|
|
Analýza kvasinkové DNA pomocí pulsní gelové elektroforézy
Kubáčková, Martina ; Drábková, Michaela (oponent) ; Márová, Ivana (vedoucí práce)
Technika pulzní gelové elektroforézy našla široké uplatnění v analýze genomu všech živých organismů. Využívá se k separaci molekul DNA o velikosti desítek kilobází až několika megabází, kde už není možné užít konvenční elektroforézy (např.chromozomů bakterií, kvasinek či plísní, ale i lidských či zvířecích buněk). Předložená diplomová práce byla pojata jako srovnávací analýza genomu vybraných karotenoidních kvasinek. Byly optimalizovány podmínky izolace a analýzy chromozomální kvasinkové DNA a jako nejvhodnější metoda se ukázala lyze kvasinkových buněk a deproteinace DNA v agarosových bločcích. K analýze DNA předložených kvasinek byla vyhodnocena jako nejvíce vyhovující pozdní exponenciální fáze (50. hodina kultivace). Karotenoidní kvasinky byly také podrobeny náhodné mutagenezi alkylačním činidlem - ethylesterem kyseliny methansulfonové (EMS). Poté byl analyzován genom kolonií vizuálně naznačujících nadprodukci karotenoidů metodou pulzní gelové elektroforézy a množství karotenoidů v sušině metodou HPLC. K nadprodukci b-karotenu došlo u mutantů kmene Rhodotorula glutinis (10,6 g/l biomasy obohacené 0,34 mg b-karotenu /g sušiny) a mutantů Cystofilobasidium capitatum (8,5 g/l biomasy obohacené 0,23 mg b-karotenu /g sušiny). Selekce mutantů schopných nadprodukce karotenů byla v provedené sérii experimentů úspěšná u téměř všech analyzovaných kvasinkových kmenů kromě kmene Rhodotorula aurantiaca.
|
|
|
Charakterizace kolagenu izolovaného z různých živočišných tkání
Mikulíková, Zuzana ; Drábková, Michaela (oponent) ; Márová, Ivana (vedoucí práce)
Cílem předložené diplomové práce je optimalizace postupu izolace kolagenu z živočišných tkání, optimalizace metod molekulární charakterizace izolátů a testování jejich stability. V rámci experimentální části práce byly provedeny izolace kolagenu z živočišných tkání (kuřecí, slepičí, kapří a vepřová kůže). Koncentrace celkových proteinů byla stanovena Biuretovou metodou a metodou TNBSA. Obě tyto metody byly použity také při studiu fyziologické a tepelné stability izolátů v modelových prostředích. Molekulární charakterizace vyizolovaného kolagenu byla provedena PAGE–SDS elektroforézou a mikročipovou elektroforézou. Mechanické vlastnosti byly ověřeny viskozimetricky. Dále bylo analyzováno aminokyselinové složení a obsah stopových prvků. Stabilita izolovaných preparátů byla testována v různých typech simulovaného fyziologického i patologického prostředí. Izolace kolagenu z kuřecí kůže poskytla poměrně uspokojivé výtěžky, bylo získáno až 15 % purifikovaného kolagenu z původní hmotnosti biologického materiálu. Ve všech analyzovaných tkáních byl nalezen kolagen typu I. Tepelná stabilita preparátů se lišila v závislosti na typu organismu i na jeho stáří. Viskozimetrické měření potvrdilo vyšší termostabilitu u kolagenu získaného ze starších jedinců. Kolagenáza vykazovala nejnižší degradační efekt na hovězí kolagen, zatímco efekt vybraných směsných preparátů mikrobiálních hydroláz se lišil v závislosti na typu enzymového preparátu. Inkubace s potenciálními humánními mikrobiálními patogeny potvrdila vyšší odolnost vůči tvorbě biofilmu u hovězího kolagenu ve srovnání s kuřecím.
|
|
|
Studium vybraných modifikovaných kolagenových biomateriálů
Zouharová, Lucie ; Drábková, Michaela (oponent) ; Márová, Ivana (vedoucí práce)
Cílem předložené práce je studium a biochemická charakterizace modifikovaných materiálů na bázi kolagenu (připravené na ÚCHM FCH VUT v Brně), optimalizace postupu izolace kolagenu z různých druhů živočišných tkání a testování stability kolagenových preparátů. V rámci experimentální části práce byla provedena izolace kolagenu z pěti různých druhů živočišných tkání s uspokojivým výtěžkem. Koncentrace celkových proteinů byla analyzována metodou Biuretovou a Hartree – Lowryho, k měření koncentrace volných aminoskupin bylo využito metody TNBSA. Charakterizace proteinového složení kolagenu byla provedena elektroforézou PAGE-SDS. Jako srovnávací analýza byl využit mikrofluidní elektroforetický systém na mikročipech. V rámci práce byla testována i možnost separace a purifikace kolagenů pomocí gelové chromatografie. K bližší charakterizaci kolagenových preparátů byl proveden test tepelné stability s využitím ultrazvukové spektroskopie. Biologická stabilita byla testována v modelovém fyziologickém prostředí.
|
|
| |
|
| |
|
|
Omezení masového rozvoje plantkonních sinic: sumarizace metod
Maršálek, Blahoslav ; Drábková, Michaela ; Maršálková, Eliška ; Feldmanová, Marie ; Jančula, Daniel
Tato práce shrnuje všechny nejdůležitější metody a postupy, jak bojovat proti vodním květům sinic ve vodních nádržích. První část pojednává o zdrojích znečištění živinami a možnostech, jak toto znečištění eliminovat. Druhá část je věnována redukci živin na přítocích do nádrže a třetí, nejobsáhlejší, se věnuje již konkrétním zásahům přímo ve vodním tělese nádrže. Diskutovány jsou především tyto metody omezení rozvoje sinic: koagulace sinic z vodního sloupce, redukce koncentrace fosforu pomocí biopreparátů, využití cyanocidních a cyanostatických látek, biomanipulace, fyzikální metody a atd.
|
host ::
RSS.