|
|
Charakterizace kolagenu izolovaného z různých živočišných tkání
Mikulíková, Zuzana ; Drábková, Michaela (oponent) ; Márová, Ivana (vedoucí práce)
Cílem předložené diplomové práce je optimalizace postupu izolace kolagenu z živočišných tkání, optimalizace metod molekulární charakterizace izolátů a testování jejich stability. V rámci experimentální části práce byly provedeny izolace kolagenu z živočišných tkání (kuřecí, slepičí, kapří a vepřová kůže). Koncentrace celkových proteinů byla stanovena Biuretovou metodou a metodou TNBSA. Obě tyto metody byly použity také při studiu fyziologické a tepelné stability izolátů v modelových prostředích. Molekulární charakterizace vyizolovaného kolagenu byla provedena PAGE–SDS elektroforézou a mikročipovou elektroforézou. Mechanické vlastnosti byly ověřeny viskozimetricky. Dále bylo analyzováno aminokyselinové složení a obsah stopových prvků. Stabilita izolovaných preparátů byla testována v různých typech simulovaného fyziologického i patologického prostředí. Izolace kolagenu z kuřecí kůže poskytla poměrně uspokojivé výtěžky, bylo získáno až 15 % purifikovaného kolagenu z původní hmotnosti biologického materiálu. Ve všech analyzovaných tkáních byl nalezen kolagen typu I. Tepelná stabilita preparátů se lišila v závislosti na typu organismu i na jeho stáří. Viskozimetrické měření potvrdilo vyšší termostabilitu u kolagenu získaného ze starších jedinců. Kolagenáza vykazovala nejnižší degradační efekt na hovězí kolagen, zatímco efekt vybraných směsných preparátů mikrobiálních hydroláz se lišil v závislosti na typu enzymového preparátu. Inkubace s potenciálními humánními mikrobiálními patogeny potvrdila vyšší odolnost vůči tvorbě biofilmu u hovězího kolagenu ve srovnání s kuřecím.
|
|
|
Charakterizace kolagenu izolovaného z různých živočišných tkání
Mikulíková, Zuzana ; Drábková, Michaela (oponent) ; Márová, Ivana (vedoucí práce)
Cílem předložené diplomové práce je optimalizace postupu izolace kolagenu z živočišných tkání, optimalizace metod molekulární charakterizace izolátů a testování jejich stability. V rámci experimentální části práce byly provedeny izolace kolagenu z živočišných tkání (kuřecí, slepičí, kapří a vepřová kůže). Koncentrace celkových proteinů byla stanovena Biuretovou metodou a metodou TNBSA. Obě tyto metody byly použity také při studiu fyziologické a tepelné stability izolátů v modelových prostředích. Molekulární charakterizace vyizolovaného kolagenu byla provedena PAGE–SDS elektroforézou a mikročipovou elektroforézou. Mechanické vlastnosti byly ověřeny viskozimetricky. Dále bylo analyzováno aminokyselinové složení a obsah stopových prvků. Stabilita izolovaných preparátů byla testována v různých typech simulovaného fyziologického i patologického prostředí. Izolace kolagenu z kuřecí kůže poskytla poměrně uspokojivé výtěžky, bylo získáno až 15 % purifikovaného kolagenu z původní hmotnosti biologického materiálu. Ve všech analyzovaných tkáních byl nalezen kolagen typu I. Tepelná stabilita preparátů se lišila v závislosti na typu organismu i na jeho stáří. Viskozimetrické měření potvrdilo vyšší termostabilitu u kolagenu získaného ze starších jedinců. Kolagenáza vykazovala nejnižší degradační efekt na hovězí kolagen, zatímco efekt vybraných směsných preparátů mikrobiálních hydroláz se lišil v závislosti na typu enzymového preparátu. Inkubace s potenciálními humánními mikrobiálními patogeny potvrdila vyšší odolnost vůči tvorbě biofilmu u hovězího kolagenu ve srovnání s kuřecím.
|
|
|
Degradace biomateriálů v modelovém fyziologickém prostředí
Mikulíková, Zuzana ; Obruča, Stanislav (oponent) ; Márová, Ivana (vedoucí práce)
Cílem předložené práce je studium degradace vybraných modifikovaných bílkovinných materiálů a optimalizace metod použitelných pro sledování změn koncentrace proteinů ve vzorcích podléhajících proteolytické degradaci. V první části práce byla zpracována rešerše o biomateriálech používaných v biomedicínských aplikacích, biokompatibilitě, charakteru kolagenových materiálů a jejich použití. V rámci praktické části byly ověřeny vybrané metody sledování proteolýzy na kalibračních standardech hovězího sérového albuminu, kolagenu a vybraných aminokyselin. Součástí předložené práce bylo také sledování proteolýzy u vybraných modifikovaných kolagenových materiálů. V první fázi byly testovány vybrané metody stanovení celkových bílkovin: ninhydrinová, biuretová, Hartree-Lowryho, spektrofotometrie UV-VIS a metoda s využitím TNBS - trinitrobenzensulfonové kyseliny. Pro sledování proteolýzy byly upraveny dvě metody: biuretová metoda, detekuje peptidové vazby a metoda s TNBS, pomocí které lze detekovat primární aminoskupiny. Metody byly aplikovány na sledování proteolýzy u tří různých typů kolagenu degradovaných pomocí kolagenázy. U standardu rozpustného kolagenu a rovněž u modifikovaných kolagenů byl zaznamenán úbytek peptidových vazeb a přírůstek primárních aminoskupin úměrně koncentraci enzymu a poměru enzym : substrát. U nerozpustného kolagenu byla analýza výrazně ovlivněna strukturou a změnami konformace materiálu během degradace.
|
host ::
RSS.