|
|
Modulace biotransformačních a antioxidačních enzymů vybranými přírodními látkami
Lněničková, Kateřina ; Szotáková, Barbora (vedoucí práce) ; Anzenbacherová, Eva (oponent) ; Trejtnar, František (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Mgr. Kateřina LNĚNIČKOVÁ Školitel: prof. Ing. Barbora SZOTÁKOVÁ, Ph.D. Název disertační práce: MODULACE BIOTRANSFORMAČNÍCH A ANTIOXIDAČNÍCH ENZYMŮ VYBRANÝMI PŘÍRODNÍMI LÁTKAMI V posledních desetiletích významně stoupl zájem o různé doplňky stravy, které obsahují léčivé byliny, rostlinné extrakty či izolované účinné látky. Jejich spotřeba celosvětově roste, a protože jsou obecně považovány za bezpečné, jsou mnohdy konzumovány v nepřiměřeně velkých dávkách. Po vstupu do organismu jsou tyto látky, stejně jako jiná xenobiotika, modifikovány především prostřednictvím biotransformačních enzymů a současně mohou tyto enzymy ovlivňovat. Případná modulace aktivity (indukce nebo inhibice) biotransformačních enzymů může významně ovlivnit farmakokinetiku současně podávaných léčiv. Pro bezpečné užívání přírodních látek je tedy nezbytná znalost jejich možného působení na biotransformační enzymy. Cílem předkládané disertační práce bylo studovat účinky extraktů vybraných rostlin a jejich obsahových látek s biologickým účinkem na aktivitu a expresi biotransformačních a antioxidačních enzymů. Zaměřili jsme se na studium účinků extraktů a obsahových látek z brusinky velkoplodé (Vaccinium macrocarpon, Ericaceae), zeleného čaje...
|
|
|
Opakované nízkodávkové podání flubendazolu a jeho vliv na buňky glioblastoma multiforme
Namyslová, Marie ; Szotáková, Barbora (vedoucí práce) ; Králová, Věra (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Marie Namyslová Školitel: prof. Ing. Barbora Szotáková, Ph.D. Název diplomové práce: Opakované nízkodávkové podání flubendazolu a jeho vliv na buňky glioblastoma multiforme Glioblastom (GBM) patří mezi nejagresivnější a nejčastější primární nádory mozku u dospělých. GBM je odolný vůči dosavadní léčbě a medián přežití u léčených pacientů s tímto onemocněním se pohybuje okolo 15 měsíců. Velice špatná prognóza této nemoci podněcuje ke studiu nových terapeutických strategií. Nadějný směr představují léčiva již registrovaná pro jiné indikace, jako je např. anthelmintikum flubendazol (FLU) s potenciální protinádorovou aktivitou. Cílem této práce bylo studovat účinek FLU po opakovaném nízkodávkovém ovlivnění buněk GBM. Pro tuto práci byly použity dvě buněčné linie - U87MG a U87MG-IDH1mut a byl studován vliv opakovaného podání FLU na jejich viabilitu (metodou WST-1) a na morfologii buněk (mikroskopie fázového kontrastu). Dále byly po podání FLU hodnoceny změny exprese markerů buněčného cyklu, proliferace, růstu a markerů rezistence na úrovni mRNA (RT-PCR) a na úrovni proteinů (Western blotting). Následně probíhalo stanovení aktivity iniciačních a efektorových kaspáz (pomocí luminiscenčního měření) a stanovení...
|
|
|
Testování účinnosti a toxicity nových potenciálních anthelmintik OMK3 a OMK4
Žáková, Barbora ; Skálová, Lenka (vedoucí práce) ; Szotáková, Barbora (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Bc. Barbora Žáková Školitel: prof. RNDr. Lenka Skálová, Ph.D. Název diplomové práce: Testování účinnosti a toxicity nových potenciálních anthelmintik OMK3 a OMK4 Haemonchus contortus (vlasovka slezová) je parazitem menších přežvýkavců, hlavně ovcí a koz. Způsobuje onemocnění zvané haemonchóza, jehož hlavním příznakem je anémie, která může skončit až smrtí zvířete. Pro léčbu tohoto onemocnění se používají anthelmintika. Tato léčiva ale přestávají být účinná, protože na ně vzniká rezistence. Haemonchóza se proto stává velkým celosvětovým problémem. Z toho důvodu je nutné hledat nová anthelmintika s novým mechanismem účinku. V této práci byly zkoumány potenciální anthelmintiké účinky nových derivátů kyseliny benzhydroxamové, OMK3 a OMK4. Cílem práce bylo zjistit, jestli tyto látky mají účinek na vajíčka, larvy a dospělce H. contortus, porovnat jejich účinek na citlivém a rezistentním kmeni H. contortus a testovat jejich potenciální toxicitu na játrech ovcí. K těmto účelům byla izolována vajíčka, larvy a dospělci H. contortus, připraveny precizní tkáňové řezy z ovčích jater a použity testy: líhnutí vajíček, sledování motility a stanovení koncentrace ATP bioluminiscenční metodou. Výsledky ukázaly, že deriváty...
|
|
|
Sledování exprese aldo-ketoreduktas u vlasovky slezové
Babičková, Markéta ; Matoušková, Petra (vedoucí práce) ; Szotáková, Barbora (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Bc. Markéta Babičková Školitel: doc. Ing. Petra Matoušková, Ph.D. Název diplomové práce: Sledování exprese aldo-ketoreduktas u vlasovky slezové Vlasovka slezová (Haemonchus contortus) je krev sající hlístice vyskytující se převážně u hospodářských zvířat. Tato hlístice způsobuje onemocnění zvané hemonchóza. Během svého vývoje si vytvořila rozvíjející se rezistenci na anthelmintika, což i přes dobré strategie je stále větší celosvětový problém. Aldo-ketoreduktasy (AKR) se řadí do super rodiny NADPH-dependetních oxidoreduktas katalyzujících oxidačně-redukční reakce aldehydů a ketonů v různých organismech od bakterií po savce. U savců jsou hojně exprimovány v různých tkáních. Jejich zásadní role je hlavně v metabolismu hormonů, xenobiotik, eobiotik, oxidativních molekul anebo role v lékové rezistenci. Některé druhy AKR jako je např. aldosareduktasa (ADR) jsou schopné organismus poškodit. Bohužel je o těchto enzymech v H. contortus popsáno velmi málo, a proto se tato diplomová práce zaobírá zkoumáním domnělých genů AKR v této hlístici. Pomocí sekvenace genomu se určilo 22 genů z nadrodiny AKR. Byly zjištěny exprese všech AKR ve vajíčkách, larvách a dospělcích. Dále se porovnávala exprese AKR ve vývojových...
|
|
|
Vliv GP46 na funkci HU proteinu bakterie Francisella tularensis
Sokolová, Eliška ; Szotáková, Barbora (vedoucí práce) ; Skálová, Lenka (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Bc. Eliška Sokolová Školitel: prof. Ing. Barbora Szotáková, Ph.D. Školitel - konzultant: RNDr. Petra Špidlová, Ph.D. Název diplomové práce: Vliv Gp46 na funkci HU proteinu bakterie Francisella tularensis Francisella tularensis je vysoce virulentní bakterie a DNA vazebný HU protein představuje jeden z jejích významných faktorů virulence. Nedávno bylo publikováno, že protein Gp46 inhibuje funkci HU proteinu bakterie Bacillus subtilis (Zhang et al., 2022). Hlavním cílem předkládané diplomové práce bylo zjistit, zda protein Gp46 bakteriofága SPO1 B. subtilis funguje i jako inhibitor HU proteinu F. tularensis. Jelikož jsou HU proteiny vysoce konzervované, mohl by Gp46 fungovat jako univerzální inhibitor všech HU proteinů. Na pracovišti (Katedra molekulární patologie a biologie, VLF Univerzita obrany) bakteriofág SPO1, ani jeho DNA, nebyl k dispozici, proto bylo nejprve nutné metodou overlap PCR získat gen gp46 kódující protein Gp46. Následně byl protein Gp46 pomocí afinitní chromatografie purifikován z expresního sytému E. coli. V podmínkách in vivo i in vitro jsme studovali, zda a jak protein Gp46 ovlivňuje životaschopnost a virulenci F. tularensis. Pomocí EMSA metody jsme prokázali, že DNA vazebná aktivita HU...
|
|
| |
|
|
Exprese a aktivity antioxidačních enzymů v in vivo modelech nealkoholové tukové choroby jater
Sochová, Gabriela ; Boušová, Iva (vedoucí práce) ; Szotáková, Barbora (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Gabriela Sochová Školitel: doc. PharmDr. Iva Boušová, Ph.D. Konzultant: Mgr. Gabriela Svobodová Název diplomové práce: Exprese a aktivity antioxidačních enzymů v in vivo modelech nealkoholové tukové choroby jater Nealkoholová tuková choroba jater je jedno z nejčastějších jaterních onemocnění. Toto onemocnění je způsobeno nerovnováhou mezi příjmem tuků a jejich degradací. Akumulace lipidů může být způsobena několika faktory (genetická predispozice, dieta, metabolická onemocnění atd.). Pokud tyto podněty působí dostatečně dlouhou dobu, může onemocnění vést k jaterní fibróze až cirhóze. Cílem této diplomové práce bylo porovnat expresi a aktivitu antioxidačních enzymů glutathion-S-transferasy (GST), glutathionperoxidasy (GPx), glutathionreduktasy (GR), superoxiddismutasy (SOD) a katalasy ve dvou modelech NAFLD (dietní model (K) - dieta s vysokým obsahem tuku, fruktózy a cholesterolu (FFC); chemický model - navození glutamátem monosodným (MSG)). Dále byl v těchto modelech zjišťován vliv LiPR31 a liraglutidu na expresi a aktivitu antioxidačních enzymů. Exprese a aktivita byly stanoveny ve 20.000×g supernatantu z myších jater. Pro stanovení relativní exprese mRNA byla použita metoda RT-qPCR. Exprese proteinu byla...
|
|
|
Stanovení gancikloviru u pacientů po transplantaci plic
Hrach, Filip ; Szotáková, Barbora (vedoucí práce) ; Kotaška, Karel (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Bc. Filip Hrach Školitel: prof. Ing. Barbora Szotáková, Ph.D. Konzultant: doc. Ing. Eva Klapková, Ph.D. Název diplomové práce: Stanovení gancikloviru u pacientů po transplantaci plic Ganciklovir je nukleosidový analog, který je široce využíván pro léčbu infekcí způsobených herpetickými viry včetně cytomegaloviru. Pacientům po transplantaci plic je vždy profylakticky podáván valganciklovir (proléčivo gancikloviru), aby se předešlo cytomegalovirové infekci. Cílem diplomové práce bylo zavést spolehlivou, citlivou a rychlou analytickou metodu pro stanovení gancikloviru a tuto metodu validovat. Dále stanovit hodnoty gancikloviru u pacientů po transplantaci plic. Posledním cílem bylo zhodnotit význam terapeutického monitorování gancikloviru. Pro stanovení gancikloviru byla zavedena metoda kapalinové chromatografie s tandemovou hmotnostní spektrometrií. Byly stanoveny validační parametry nezbytné pro bioanalytické metody. Všechny validační parametry splnily podmínky úspěšné validace. Při perorálním podání antivirotika je využíván valganciklovir a při intravenózním podání ganciklovir. Pacienti po transplantaci plic dostávají profylakticky perorálně 900 mg/den valgancikloviru. Po profylaxi je intravenózně podáván...
|
|
|
Charakterizace enzymů redukujících karbonylové sloučeniny u vlasovky slezové
Kunzová, Lucie ; Szotáková, Barbora (vedoucí práce) ; Novotná, Eva (oponent)
Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Lucie Kunzová Školitel: prof. Ing. Barbora Szotáková, Ph.D. Konzultant: Mgr. Nikola Rychlá Název diplomové práce: Charakterizace enzymů redukujících karbonylové sloučeniny u vlasovky slezové Vlasovka slezová (Haemonchus contortus), jeden z nejpatogennějších parazitů malých přežvýkavců jako jsou kozy a ovce, si vyvinul rezistenci vůči všem používaným anthelmintikům. Předpokládá se, že k rozvoji lékové rezistence přispívají i detoxikační enzymy, které představují hlavní obranný systém proti škodlivým xenobiotikům a u tohoto druhu nejsou plně prozkoumány. Tato práce je proto zaměřená na studium enzymů vlasovky slezové, konkrétně na reduktasy karbonylových sloučenin pomocí specifických substrátů a inhibitorů. Byly připraveny subcelulární frakce (cytosol a mikrosomy) z dospělců vlasovky slezové pro následné in vitro experimenty. V jednotlivých frakcích byla stanovena koncentrace proteinů a aktivita reduktas vůči různým substrátům. Substráty byly zvoleny na základě znalosti o lidských biotransformačních enzymech. Nejvyšší aktivita v cytosolu byla zjištěna pro substráty glyceraldehyd (8,22 ± 0,82 [nmol/min/mg]) a menadion (4,63 ± 0,46 [nmol/min/mg]), v mikrosomální frakci pro menadion (4,38 ± 0,36 [nmol/min/mg])...
|
|
|
Charakterizace enzymů redukujících karbonylové sloučeniny u vlasovky slezové
Kunzová, Lucie ; Szotáková, Barbora (vedoucí práce) ; Novotná, Eva (oponent)
Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Lucie Kunzová Školitel: prof. Ing. Barbora Szotáková, Ph.D. Konzultant: Mgr. Nikola Rychlá Název diplomové práce: Charakterizace enzymů redukujících karbonylové sloučeniny u vlasovky slezové Vlasovka slezová (Haemonchus contortus), jeden z nejpatogennějších parazitů malých přežvýkavců jako jsou kozy a ovce, si vyvinul rezistenci vůči všem používaným anthelmintikům. Předpokládá se, že k rozvoji lékové rezistence přispívají i detoxikační enzymy, které představují hlavní obranný systém proti škodlivým xenobiotikům a u tohoto druhu nejsou plně prozkoumány. Tato práce je proto zaměřená na studium enzymů vlasovky slezové, konkrétně na reduktasy karbonylových sloučenin pomocí specifických substrátů a inhibitorů. Byly připraveny subcelulární frakce (cytosol a mikrosomy) z dospělců vlasovky slezové pro následné in vitro experimenty. V jednotlivých frakcích byla stanovena koncentrace proteinů a aktivita reduktas vůči různým substrátům. Substráty byly zvoleny na základě znalosti o lidských biotransformačních enzymech. Nejvyšší aktivita v cytosolu byla zjištěna pro substráty glyceraldehyd (8,22 ± 0,82 [nmol/min/mg]) a menadion (4,63 ± 0,46 [nmol/min/mg]), v mikrosomální frakci pro menadion (4,38 ± 0,36 [nmol/min/mg])...
|
host ::
RSS.