|
|
Hydrophilic Interaction Liquid Chromatography in the Analysis of Intact Glycopeptides
Molnárová, Katarína ; Kozlík, Petr (vedoucí práce) ; Coufal, Pavel (oponent) ; Cvačka, Josef (oponent)
Analýza glykoproteínov predstavuje obrovskú výzvu v rámci glykoproteomiky, a to hlavne kvôli makro- a mikroheterogenite glykozylácie. Hydrofilná interakčná kvapalinová chromatografia (HILIC) je vhodnou alternatívou k chromatografii na reverznej fáze, ktorá sa najbežnejšie využíva v glykoproteomickej analýze. Táto dizertačná práca sa venuje potenciálu HILIC v glykoproteomickej analýze, zahrňujúca separáciou glykopeptidov na polárnych stacionárnych fázach až po využitiu HILIC v rámci prípravy vzoriek. Na úvod bol preskúmaný vplyv koncentrácie acetonitrilu na precipitáciu glykopeptidov v závislosti na typu pripojeného glykánu. Následne boli testované tri, komerčne dostupné stacionárne fáze - kolóna obsahujúca silikagél modifikovaný piatimi hydroxylovými skupinami, amidová a zwitteriónová stacionárna fáza. Porovnaná bola ich účinnosť v separácii glykopeptidových izomérov, ktoré sa líšili iba vo vetvení a/alebo v type väzby. Ďalší výskum bol venovaný separácii glykopeptidov ľudského imunoglobulínu G na relatívne nových kolónach, ktoré zatiaľ neboli charakterizované v rámci glykoproteomickej analýze. Jednalo sa o kolóny od spoločnosti Advanced Chromatography Technologies s nemodifikovaným silikagélom (HILIC-A), s aminopropylom-modifikovaným sorbentom (HILIC-B) a s polyhydroxylovou stacionárnou fázou...
|
|
|
Vývoj hmotnostně-spektrometrických metod pro strukturní analýzu mastných kyselin a estolidů
Cudlman, Lukáš ; Cvačka, Josef (vedoucí práce) ; Kozlík, Petr (oponent) ; Lísa, Miroslav (oponent)
(CZ) Tato disertační práce shrnuje použití moderních hmotnostně-spektrometrických metod pro strukturní identifikaci mastných kyselin a estolidů triacylglycerolů (TG-EST) a jejich následnou charakterizaci v lipidomu novorozeneckého mázku, tj. biofilmu pokrývajícího pokožku lidského plodu během posledního trimestru těhotenství. Novorozenecký mázek je především známý svými antimikrobiálními vlastnostmi a schopností hojení ran a popálenin. První část disertační práce se zaměřuje na rozmanitost mastných kyselin v lipidomu novorozeneckého mázku. Tyto kyseliny tvoří strukturní podjednotky komplexních lipidů, např. hojně zastoupených triacylglycerolů a voskových esterů. Studiem mastných kyselin a jejich strukturních rysů bylo možné v této práci získat cenné poznatky o strukturní variabilitě celého lipidomu novorozeneckého mázku. Bez plného pochopení struktury těchto klíčových podjednotek by bylo v budoucnu nemožné dokončit analýzu tohoto lipidomu. Mastné kyseliny byly v této práci charakterizovány pomocí vysokoúčinné kapalinové chromatografie (HPLC) a pokročilých metod hmotnostní spektrometrie, a to fotodisociace ultrafialovým zářením (UVPD) a disociace vyvolané ozonem (OzID). Spojení HPLC a hmotnostní spektrometrie (HPLC-MS) poskytlo jednoznačné informace o polohách a geometrii dvojných vazeb a...
|
|
|
Separace farmaceuticky aktivních látek v multimodální a chirální chromatografii: interakční studie
Fojtíková, Sofia ; Bosáková, Zuzana (vedoucí práce) ; Kozlík, Petr (oponent) ; Fischer, Jan (oponent)
Během procesu vývoje léčiv spoléhá farmaceutický průmysl často na chromatografické techniky. Vysokoúčinná kapalinová chromatografie (HPLC) patří pro tyto účely mezi nejběžněji používané chromatografické techniky, přičemž reverzní fáze a HILIC jsou nejčastějšími volbami. Nicméně, navzdory jejich popularitě, tyto techniky mají několik nevýhod jako je příspěvek sekundárních interakcí, které vycházejí z povahy materiálu nosiče, a omezení z hlediska analýzy molekul s určitými vlastnostmi. V tomto smyslu se multimodální (také mixed-mode) chromatografie (MMC) jeví jako slibná technika, schopná řešit tyto výzvy. První část disertační práce je zaměřena na porovnání retence strukturně odlišných molekul v různých chromatografických systémech s použitím sedmi různých multimodálních stacionárních fází ve snaze objasnit interakční mechanismy, uplatňující se na jednotlivých studovaných stacionárních fázích. Na základě sledování trendů, pozorovaných za různých podmínek pro molekuly s různými fyzikálně-chemickými vlastnostmi, se to alespoň částečně podařilo. Chirální chromatografie je dalším klíčovým nástrojem v analýze farmak. Jejím hlavním účelem je při vývoji léčivých přípravků rozdělení enantiomerů tak, aby bylo možno studovat potenciálně různé bezpečnostní a účinnostní profily pro každý z enantiomerů zvlášť. Z...
|
|
|
Stanovení vápníku, hořčíku a fosforu v kostech vybraných živočichů
Škardová, Alice ; Hraníček, Jakub (vedoucí práce) ; Kozlík, Petr (oponent)
Tato bakalářská práce je věnována stanovení vybraných prvků (vápníku, hořčíku a fosforu) v kostech různých druhů živočichů a jejich vzájemného porovnání. Analyzované vzorky kostí byly vybrány za účelem porovnání výživových hodnot v souvislosti se stanovovanými prvky. Získané vzorky kostí byly nejprve mechanicky rozmělněny a naváženy do rozkladných patron. Pomocí vysokotlakého mikrovlnného rozkladu za přítomnosti kyseliny dusičné a chlorovodíkové byly vzorky převedeny do roztoku a následně vhodným způsobem naředěny. Analýza kapalných vzorků byla provedena pomocí hmotnostního spektrometru s indukčně vázaným plazmatem. Výsledný obsah všech třech prvků byl vypočten na základně kalibračních závislostí a se započtením navážky vzorku a příslušného faktoru ředění. Všechny získané výsledky byly nad limitem detekce přístroje za daných podmínek. Tento limit byl pro vápník 0,38 mg/l, pro hořčík 0,037 mg/l a pro fosfor 0,078 mg/l. Základním přínosem této práce je ucelený přehled o obsahu prvků v kostech různých druhů živočichů.
|
|
|
Analýza relevantních fotoproduktů bilirubinu a jejich biologický význam v problematice novorozenecké žloutenky
Křepelka, David ; Kozlík, Petr (vedoucí práce) ; Zelenka, Jaroslav (oponent)
Novorozenecká žloutenka se objevuje u téměř 60 % donošených a 80 % nedonošených dětí, kde mírně zvýšená koncentrace bilirubinu chrání před oxidačním stresem těsně po narození. Při překročení specifické koncentrace bilirubinu (obvykle nad 340 µmol·l-1 ) může nastat kernicterus. Tomuto se předchází fototerapií modrým světlem (460 nm), jež přeměňuje bilirubin na fotoprodukty, které se snadněji vylučují žlučí a/nebo močí. Publikovaná data ukazují, že se u novorozenců s indikovanou fototerapií mohou v pozdější fázi života objevit klinické obtíže (např. vyšší incidence astmatu, alergií, diabetu 1. typu). Možným důvodem vzniku těchto onemocnění je specifická biologická aktivita fotoproduktů. Tato práce se zabývá separací neznámého fotoproduktu (bend P), který vznikl po 8hodinovém osvícení roztoku bilirubinu modrým světlem. Následně byl tento produkt izolován a separován tenkovrstvou a sloupcovou chromatografií. V další části byla vyvinuta kvantitativní metoda pro analýzu bendu P pomocí LC-MS/MS. Nakonec byly změřeny vzorky moči, plazmy a stolice odebrané 15 novorozencům před a po fototerapii. Výsledky potvrdily vznik bendu P při fototerapii novorozenců. Bend P je nezmapovaný fotoprodukt. Izolace standardu bendu P a následná kvantitativní analýza v biologických vzorcích představují další krok k porozumění...
|
|
|
Vývoj UHPLC-PDA metody vhodné ke stanovení účinných látek v tabletě Ataralginu
Chocová, Natálie ; Kozlík, Petr (vedoucí práce) ; Hraníček, Jakub (oponent)
Tableta Ataralgin je volně dostupné léčivo napomáhající proti bolestem a zvýšené tělesné teplotě. Tableta obsahuje tři účinné látky - paracetamol, kofein a guaifenesin. Cílem této práce bylo vyvinout rychlou, účinnou, selektivní a jednoduchou UHPLC-PDA metodu vhodnou ke stanovení účinných látek v tabletě Ataralginu, která by následně sloužila ke kontrole kvality při výrobě tohoto léčiva ve farmaceutickém průmyslu. Separace probíhala na koloně Acquity UPLC BEH C18 (50 × 2,1 mm, 1,7 µm), teplota kolony byla nastavena na 40 řC, teplota na dávkovači byla 10 řC, mobilní fáze byla složena z methanolu (B) a destilované vody s přídavkem 0,1% kyseliny mravenčí (A), objem nástřiku byl 1 µl a průtok byl nastaven na 0,4 ml·min-1 . Pro měření byla nastavena podmínka gradientové eluce (čas: 0-0,5-1,5-2,5-3-5,5 min, A: 85-85-30-30-85-85 % v/v). Analýza probíhala při 275 nm a celková doba analýzy trvala 5,5 minut. Správnost (relativní chyba) byla v rozmezí 0,05 - 2,73 % a přesnost (relativní směrodatná odchylka) byla v rozmezí 2,38 - 5,79 %. Hodnoty LOD byly následující: 9,25·10-4 mg·ml- 1 pro paracetamol, 2,15·10-4 mg·ml-1 pro kofein a 7,93·10- 4 mg·ml-1 pro guaifenesin a hodnoty pro LOQ byly 3,08·10-3 mg·ml-1 pro paracetamol, 7,17·10-4 mg·ml-1 pro kofein a 2,64·10- 3 mg·ml-1 pro guaifenesin. Klíčová slova:...
|
|
|
Stanovení anorganických inhibitorů koroze iontovou chromatografií
Kapiasová, Anna ; Kubíčková, Anna (vedoucí práce) ; Kozlík, Petr (oponent)
Inhibitory koroze jsou látky, které zabraňují korozi vnitřního povrchu chladicího systému. Anorganické inhibitory koroze obsahují anorganické anionty, které povrch pasivují, tím brání difúzi kyslíku do systému a chrání povrch před oxidací. Tato práce je zaměřena na vývoj a validaci metody stanovení anorganických inhibitorů koroze (konkrétně chloridů, dusitanů, dusičnanů, hydrogenfosforečnanů, síranů a molybdenanů) pomocí iontové chromatografie. Optimální separace aniontů bylo dosaženo s mobilní fází o složení 3,3 mM uhličitanu sodného a 3,3 mM hydrogenuhličitanu sodného (pH= 10,1) při teplotě 45 řC na koloně Metrosep A Supp 7 (250 × 4.0 mm s velikostí částic 5 µm) (Metrohm, Švýcarsko). Při těchto podmínkách trvala analýza 48 minut. Metoda byla po validaci dále využita ke stanovení inhibitorů koroze v reálných vzorcích chladicích kapalin. Pomocí metody tzv. "spikování" byly rozpoznány píky jednotlivých aniontů obsažených v chladicích kapalinách a z ploch těchto píků byly stanoveny koncentrace aniontů metodou kalibračních křivek. Klíčová slova iontová chromatografie, chladicí kapaliny, inhibitory koroze, anorganické anionty
|
|
|
Analýza složení pozůstatků anorganických farmak z 18. století
Janoušková, Eva ; Nesměrák, Karel (vedoucí práce) ; Kozlík, Petr (oponent)
V této bakalářské práci bylo analyzováno šestnáct vzorků anorganických farmak z 18. století pomocí spektrometrie s indukčně vázaným plazmatem, atomové absorpční spektrometrie, atomové emisní spektrometrie, UV/VIS spektrometrie, kapilární zónové elektroforézy, titrací a gravimetrických stanovení. Analýza potvrdila, že složení čtrnácti analyzovaných vzorků odpovídá latinským signaturám na příslušných barokních stojatkách, avšak ve dvou případech bylo prokázáno, že se jedná o látky zcela odlišné. Každý ze vzorků, s výjimkou jednoho, obsahoval poměrně vysoké množství nečistot. Tyto nečistoty pomohly určit, zda je daný vzorek původem minerál běžně se vyskytující v přírodě anebo produkt chemické reakce. Klíčová slova: dějiny farmacie, ICP-MS, F-AAS, F-AES, UV/VIS spektrometrie, historická léčiva
|
|
|
Sekvenční injekční analýza pro spektrometrické stanovení složek biseptolu
Kroiherová, Anna ; Nesměrák, Karel (vedoucí práce) ; Kozlík, Petr (oponent)
Byla vyvinuta a optimalizována metoda využívající techniku sekvenční injekční analýzy pro spektrometrické stanovení dvou analytů, sulfamethoxazolu a trimethoprimu, ve směsi v léčivém přípravku Biseptol® 480 bez nutnosti jejich separace. Oba analyty absorbují záření v UV oblasti spektra, ale pouze sulfamethoxazol, jakožto primární amin, poskytuje po derivatizační reakcí s dusitanem sodným a N-(1-naftyl)ethylendiaminem barevný produkt, který lze detegovat ve VIS oblasti spektra. Koncentrace sulfamethoxazolu je přímo úměrná absorbanci barevného produktu diazotační reakce a odečtením této koncentrace od koncentrace obou analytů změřené v UV oblasti spektra, lze určit koncentraci trimethoprimu ve vzorku.
|
|
|
Prvková analýza dendrochronologického vzorku smrku ztepilého
Zámečník, Karel ; Hraníček, Jakub (vedoucí práce) ; Kozlík, Petr (oponent)
Předmětem této bakalářské práce je stanovení lithia, sodíku, hořčíku, draslíku, vápníku, manganu, železa, zinku, selenu, rubidia, stroncia, kadmia, antimonu, cesia, barya a thallia v dendrochronologických vzorcích smrku ztepilého využitím hmotnostní spektrometrie s indukčně vázaným plazmatem. Vzorky smrku ztepilého byly odebrány na podzim roku 2018 na jižním svahu vrchu Melechov v kraji Vysočina. Vzorek kmene byl nejdříve rozdělen na příslušné kusy podle vzdálenosti od kůry. Tyto kusy byly následně označeny A1a - A1g. Vzorek popelu byl získán spálením příčného průřezu kmenem a oddělením jeho kůry, ze které byl vytvořen vzorek A3b. Zbylé dva vzorky byly tvořeny jehličím a větvičkou a byly označeny jako vzorek E a F. Pro prvkovou analýzu bylo nejdříve nutné tyto vzorky převést do roztoku. Toho bylo docíleno jejich rozpuštěním v roztoku kyseliny chlorovodíkové, dusičné a fluorovodíkové a využitím mikrovlnného rozkladného zařízení. Po rozpuštění byla do jednotlivých roztoků vzorků přidán roztok kyseliny borité za účelem komplexace nezreagované kyseliny fluorovodíkové, která by mohla poškodit vnitřní komponenty přístroje ICP-MS. Následně byly ze zásobních roztoků o koncentraci 100 mg/l vytvořeny kalibrační roztoky o koncentracích 0,0016; 0,008; 0,04; 0,2 a 1,0 mg/l. Poté byly v počítačovém programu...
|
host ::
RSS.