Název: Molekulární detekce původců cerkáriové dermatitidy
Překlad názvu: Molecular detection of cercarial dermatitis causative agents
Autoři: Procházka, Jan ; Leontovyč, Roman (vedoucí práce) ; Baláž, Vojtech (oponent)
Typ dokumentu: Diplomové práce
Rok: 2024
Jazyk: cze
Abstrakt: [cze] [eng]
Lidská cerkáriová dermatitida je svědivé kožní onemocnění způsobované larválními stádii ptačích motolic, v ČR nejčastěji způsobované rodem Trichobilharzia. Monitoring jejich výskytu je od roku 2021 součástí povinného sledování kvality koupacích vod. Oficiálně používanou metodou detekce je sběr a vyšetřování vodních plžů. Tato metoda má však mnoho nevýhod v podobě vysoké časové náročnosti, nízké citlivosti a obtížné determinace parazitů. Alternativu by mohly poskytnout molekulární metody založené na filtraci environmentální DNA (eDNA) společně s metodami izotermální amplifikace, a to díky jejich nižším časovým nárokům, vysoké citlivosti a přesné determinaci. Cílem této práce bylo vytvořit metodu detekce původců cerkáriové dermatitidy založenou na izotermální amplifikaci cLAMP a filtraci eDNA z vody. Za tímto účelem byla pomocí molekulární analýzy vybrána konzervovaná sekvence pro rod Trichobilharzia, na jejímž základě byla navržena sada primerů pro cLAMP. Bylo potvrzeno, že navržená esej specificky amplifikuje DNA minimálně čtyř druhů rodu Trichobilharzia. Na základě laboratorních pokusů byla potvrzena dostatečná senzitivita eseje pro použití při detekci eDNA, a to jak na ředících řadách DNA, tak v kombinaci s filtrací eDNA živých cerkárií z vody. Po pokusech v laboratorních podmínkách byla esej... Human cercarial dermatitis (CD), also called Swimmer's itch appears as a skin rash caused by skin penetration by larval stages of avian schistosomes. In the Czech Republic, the most common causative agens is genus Trichobilharzia. Since 2021, monitoring of CD is a part of a mandatory testing of bathing water quality. The official method used for CD detection is collecting and examination of aquatic snails under a light source. However, this method has many disadvantages, such as time demands, low sensitivity and difficult parasite determination. These disadvantages can be overcome by usage of alternative approaches, such as molecular methods based on environmental DNA (eDNA) filtration and isothermal amplification. Hence, the main goal of this thesis was development of molecular method based on eDNA filtration and cLAMP isothermal amplification for detection of CD causative agent in water. Based on molecular analysis a conserved region of target DNA was selected to create a cLAMP assay specific for genus Trichobilharzia. The cLAMP assay was confirmed to specifically amplify the DNA of at least four species of the genus Trichobilharzia. The laboratory experiments showed a sufficient sensitivity of cLAMP assay for eDNA detection, based on DNA dilution series and cercariae filtration from water. The...
Klíčová slova: cerkáriová dermatitida; detekční metody; eDNA; LAMP; ptačí schistosomy; Trichobilharzia; avian schistosomes; cercarial dermatitis; detection methods; eDNA; LAMP; Trichobilharzia

Instituce: Fakulty UK (VŠKP) (web)
Informace o dostupnosti dokumentu: Dostupné v digitálním repozitáři UK.
Původní záznam: http://hdl.handle.net/20.500.11956/188272

Trvalý odkaz NUŠL: http://www.nusl.cz/ntk/nusl-541411


Záznam je zařazen do těchto sbírek:
Školství > Veřejné vysoké školy > Univerzita Karlova > Fakulty UK (VŠKP)
Vysokoškolské kvalifikační práce > Diplomové práce