Original title: Vývoj metod pro genetickou analýzu potravin rostlinného původu
Translated title: Development of methods for genetic analysis of plant foods
Authors: Fialová, Lenka ; Brázda, Václav (referee) ; Doškař, Jiří (referee) ; Márová, Ivana (advisor)
Document type: Doctoral theses
Year: 2022
Language: eng
Publisher: Vysoké učení technické v Brně. Fakulta chemická
Abstract: [eng] [cze]
Multiplex real-time PCR-HRM is an approach which has gained some attention in recent years. It has already found applications in clinical diagnostics and food authenticity and safety control. Compared to its corresponding singleplex PCR assays, an optimized multiplex PCR assay provides the same information in a fraction of time. First part of this work dealt with isolation of DNA from both fresh fruits and processed commercial products. Six different DNA isolation protocols were tested with fresh fruits – three silica column-based kits, two magnetic carrier-based kits and one conventional protocol. One method was chosen as the most suitable and was applied to DNA isolation from commercial products. These experiments also involved optimisation of the chosen method. The second part of this work was focused on the development of a triplex real-time PCR assay for simultaneous detection of blueberry, strawberry and raspberry, and its application on DNA isolated from commercial products. During DNA isolation, calcium chloride was shown to be a promising agent for removal of pectin from samples. In several samples, presence of raspberry DNA was confirmed by singleplex PCR. We found out that for accurate results of food analysis by this assay, further optimization of its parameters would be needed. Multiplex real-time PCR-HRM je analytická metoda, která v posledních letech získává pozornost. Našla si využití např. v diagnostických aplikacích, při kontrole bezpečnosti potravin, i při ověřování jejich autenticity. Optimalizovaná multiplex PCR reakce dokáže poskytnout stejné informace jako odpovídající singleplex PCR reakce za výrazně kratší dobu. První část této práce byla zaměřena na izolaci DNA jak z čerstvého ovoce, tak i z vybraných průmyslově zpracovaných potravin. Na čerstvém ovoci bylo testováno šest různých metod pro izolaci DNA – tři kolonkové kity, dva kity s magnetickými nosiči a jedna konvenční metoda. Z těchto metod byla vybrána jedna, která byla využita pro izolace DNA z různých typů potravin rostlinného původu. Posledně zmíněné experimenty zahrnovaly i optimalizaci zvolené metody. Druhá část této práce byla zaměřena na vývoj triplex PCR metody pro simultánní detekci borůvek, malin a jahod ve vybraných potravinách. Během izolace DNA se chlorid vápenatý ukázal jako vhodný prostředek k odstranění pektinu ze vzorků, a v několika komerčních výrobcích byla prokázána přítomnost malin pomocí sigleplex PCR, ale z naměřených dat byl vyvozen závěr, že pro získání spolehlivějších výsledků jsou potřebné další optimalizace vyvinuté triplex PCR metody.
Keywords: analýza potravin; multiplex PCR; ovoce; pyré; Real-time PCR; real-time PCR-HRM; čaj; food analysis; fruit; multiplex PCR; puree; Real-time PCR; real-time PCR-HRM; tea

Institution: Brno University of Technology (web)
Document availability information: Fulltext is available in the Brno University of Technology Digital Library.
Original record: http://hdl.handle.net/11012/208594

Permalink: http://www.nusl.cz/ntk/nusl-511865


The record appears in these collections:
Universities and colleges > Public universities > Brno University of Technology
Academic theses (ETDs) > Doctoral theses