Název: Příprava expresního systému gama-laktamázy a otestování exprese v E.coli
Překlad názvu: Preparation of expression system of gamma-lactamase and expression testing
Autoři: Magyerková, Monika ; Ingr, Marek (vedoucí práce) ; Šácha, Pavel (oponent)
Typ dokumentu: Bakalářské práce
Rok: 2011
Jazyk: cze
Abstrakt: [cze] [eng]
γ-laktamasa je enzym štěpící pětičlenné laktamové cykly. Jedním z jejích potenciálních substrátů je polyvinylpyrrolidon (PVP). Degradace PVP γ-laktamasou je zkoumána s ohledem na využití v čistírnách odpadních vod. Cílem této práce proto bylo připravit synteticky gen γ- laktamasy z bakterie Comamonas acidovorans a provést jeho klonování do expresního vektoru pET22b. Pro syntézu genu γ-laktamasy byla použita metoda PCA. Sekvence genu γ- laktamasy o délce 1725 bp byla rozdělena do dvou částí (syntonů), které byly syntetizovány samostatně. Po syntéze bylo provedno restrikční štěpení a ligace do vektoru pUC19. Takto připravenými konstrukty byly transformovány kompetentní buňky E. coli kmene DH5α. Po ověření správnosti sekvencí byly oba syntony vyštěpeny restrikčními endonukleasami a spojeny jednokrokovou ligací do plazmidu pET22b. Rekombinantním plazmidem obsahujícím spojené syntony byly transformovány expresní buňky E. coli kmene BL21(DE3)RIL a byla testována exprese rekombinantní γ-laktamasy. Sekvence klonu produkujícío protein odpovídající délky byla potvrzena sekvenční analýzou. Připravený expresní plazmid bude použit pro produkci rekombinantní γ-laktamasy. (In Czech) γ-lactamase is an enzyme clearing five-membered lactam cycles. Polyvinylpyrrolidone (PVP) is one of its potential substrates. Degradation of PVP by γ-lactamase is being studied due to its eventual use in waste-water purifying plants. The aim of the work was to prepare a synthetic gene from the bacterium Comamonas acidovorans and to clone it into the expression vector pET22b. PCA method was used for the synthesis of the γ-lactamase gene. 1725 bp long sequence of the γ-lactamase gene was split into two parts (synthons) which were synthesized individually. After the synthesis restriction cleavage and ligation to the vector pUC19 were performed. Competent cells E. coli, strain DH5α, were transformed by the obtained construct. After the sequence confirmation both synthons were cleaved by restriction endonucleases and connected by single-step ligation to the plasmid pET22b. Expression bacterial cells E. coli, strain BL21(DE3)RIL, were transformed by the recombinant plasmid containing the connected synthons and expression of the recombinant γ-lactamase was tested. Sequence of the clone producing a protein of the expected length was confirmed by sequencing analysis. The prepared plasmid will be used for the expression of recombinant γ- lactamase. (In English)
Klíčová slova: exprese proteinu; gama-laktamasa; genová syntéza; klonování; polyvinylpyrrolidon; cloning; gama-lactamase; gene synthesis; polyvinylpyrrolidone; protein expression

Instituce: Fakulty UK (VŠKP) (web)
Informace o dostupnosti dokumentu: Dostupné v digitálním repozitáři UK.
Původní záznam: http://hdl.handle.net/20.500.11956/38117

Trvalý odkaz NUŠL: http://www.nusl.cz/ntk/nusl-495949


Záznam je zařazen do těchto sbírek:
Školství > Veřejné vysoké školy > Univerzita Karlova > Fakulty UK (VŠKP)
Vysokoškolské kvalifikační práce > Bakalářské práce