Název:
Neurogeneze a gliogeneze po ischemickém poškození mozku u EGFP/GFAP myší
Překlad názvu:
Neurogenesis and gliogenesis after ischemic brain injury in EGFP/GFAP mice
Autoři:
Dlouhá, Veronika ; Anděrová, Miroslava (vedoucí práce) ; Vargová, Lýdia (oponent) Typ dokumentu: Diplomové práce
Rok:
2011
Jazyk:
cze
Abstrakt: [cze][eng] Fokální ischemické poškození mozku zvyšuje neurogenezi/gliogenezi v subventrikulární zóně (SVZ) postranních komor a také vede k tvorbě gliální jizvy v blízkosti ischemické léze. Na tvorbě gliální jizvy se podílejí zejména reaktivní astrocyty exprimující gliální fibrilární acidický protein (GFAP), který je exprimován i v dospělých multipotentních neurálních kmenových buňkách (NSCs). Z tohoto důvodu jsme použili GFAP/EGFP transgenní myši, ve kterých je zelený fluorescenční protein (EGFP) exprimován pod kontrolou lidského promotoru GFAP, jak v astrocytech, tak v NSCs což nám umožnilo jejich okamžitou vizualizaci a sledování vlivu ischemického poškození na jejich diferenciační a proliferační potenciál in vitro. Fokální ischemické poškození bylo navozeno okluzí střední mozkové artérie (MCAO) a po třech dnech byla provedena imunohistochemická analýza mozku. Navíc byla provedena izolace buněk ze SVZ a z oblasti gliální jizvy, následovaná jejich kultivací v proliferativních podmínkách ve formě neurosfér, a jejich následnou diferenciací po dobu 7-10 dnů. Diferenciační potenciál těchto buněk byl studován imunocytochemickými analýzami a metodou terčíkového zámku byl sledován vliv na jejich membránové vlastnosti. Na základě zvýšené proliferace a změně exprese specifických neurálních/gliálních markerů, jsme potvrdili,...Focal ischemia induces enhancement of neurogenesis/gliogenesis in the subventricular zone (SVZ) of the lateral ventricle and it also leads to glial scar formation in the vicinity of the ischemic lesion. The gliotic scar is mainly formed by reactive astrocytes that express glial fibrilarly acidic protein (GFAP), nevertheless this protein is also expressed in adult multipotent neural stem cells (NSCs). Therefore, we have used the strain of transgenic mice (GFAP/EGFP mice), in which the enhanced green fluorescent protein (EGFP) is expressed under human GFAP promoter in astrocytes as well as in NSCs, thus allowing us an immediate vizualization of these cells, and to estimate the effect of ischemic injury on their fate during proliferation and differentiation in vitro. Focal ischemia was induced by the occlusion of the middle cerebral artery (MCAO) and 3 days post injury, an immunohistochemical analysis was carried out. Furthermore, the cell isolation from SVZ and the region of gliotic scar was performed, followed by their cultivation under proliferative conditions (as neurospheres) and their differentiation for 7-10 days. The differentiation potential of these cells was studied using immunocytochemical analyses and patch clamp technique was employed to estimate their membrane properties. Based on increased...