Název:
Studium funkce AtAFB4
Autoři:
Zelinka, Radim Typ dokumentu: Bakalářské práce
Rok:
2017
Jazyk:
cze
Abstrakt: [cze][eng] Přestože od počátku výzkumu podstaty regulace apikální dominance uplynulo více než sto let, není tento hospodářsky důležitý fenomén u rostlin plně objasněn. Jedním z genů, který se u modelové rostliny hrachu (Pisum sativum L.) na regulaci podílí je PsRms2, který byl nedávno naklonován a jedná se o ortolog auxinového F-box receptoru AtAFB4. Cílem bakalářské práce bylo připravit křížence mutantů Arabidopsis thaliana s vyřazeným genem AFB4 s transformovanými liniemi exprimujícími gen pro zeleně fluoreskující protein GFP fúzované s genovou rodinou membránových PIN přenašečů (PINx:PIXx::GFP, kde x=1,2,3,4, a 7). Všech pět vzniklých T1 generací z jednotlivých křížení, bylo předběžně testováno pomocí selekčního genu rezistenci vůči antibiotiku sulfadiazinu, obsaženého v genomu samčích rostlin a více než 50 % kříženců na tomto selekčním mediu rostlo bez známek poškození. Při další kultivací linie kříženců byl pozorován u všech linií výrazný fenotyp spojený s mutací samčí linie (afb4-1). Z uvedených skutečností je zřejmé, že se jedná o křížence nesoucí požadovanou genetickou informaci. Takto připravené rostliny budou v další práci využity pro studium vlivu afb4 mutace na změnu lokalizace auxinových přenašečů PIN a na další vlastnosti jako jsou změny v transportu auxinu, reakce na exogenní aplikace auxinu a strigolaktonu, atd.Despite the fact, that research on apical dominance started before more than 100 years ago, this economically important phenomenon is not fully understood yet. One of the genes involved in this regulation in the model plant Pisum sativum is PsMS2, that was cloned recently and it came out i tis an ortholog of the auxin F-box receptor AtAFB4. The aim of this bachelor thesis was to prepare hybrids of the Arabidopsis mutant afb4 with plants expressing the GFP gene for green fluorescent protein fused to genes of the PIN family (1,2,3,4,7) under native promoters. T1 plans from all five crosses were test-ed preliminary using the selection gene for resistance to the herbicide sulphadiazine contained in the genome of male plants and more than 50 % of T1 plants from all lines survived without any symptoms of damage. In further cultivation of the surviving plants strong phenotype resembling the afb4 mutation of the male plants was observed in all plants. From the above-mentioned facts we can conclude that we have obtained hybrids bearing the intended genetic information. These prepared plants will be used in further studies on the influence of the afb4 mutation on the changes of PIN membrane transporters and further characteristics, like changes in auxin transport, reaction to exogenous application of auxin and strigolactone, etc.
Klíčová slova:
afb4; Arabidopsis thaliana; auxinový receptor; F-box protein; GFP; polární transport auxinu