Název:
Příprava geneticky modifikované buněčné linie jakožto modelu pro akumulační studie
Překlad názvu:
Preparation of genetically modified cell line as a model for accumulation studies
Autoři:
Rückelová, Alexandra ; Hyršová, Lucie (vedoucí práce) ; Maixnerová, Jana (oponent) Typ dokumentu: Diplomové práce
Rok:
2019
Jazyk:
cze
Abstrakt: [cze][eng] Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmakologie a toxikologie Studentka: Alexandra Rückelová Školitel: PharmDr. Lucie Hyršová, Ph.D. Název diplomové práce: Příprava geneticky modifikované buněčné linie jakožto modelu pro akumulační studie Námi studovaný transportér megalin patří do skupiny lipoproteinových receptorů, konkrétně se jedná o low density lipoprotein receptor-related protein 2 (LRP2). Jedná se o transportér, jež je schopný přenášet do buňky velké organické molekuly prostřednictvím receptorem zprostředkované endocytózy. Mezi jeho substráty patří celá řada peptidických látek včetně albuminu, hemoglobinu, vitaminů, hormonů a také aminoglykosidová antibiotika (gentamicin atd.), polymyxin B, kadmium a jiné látky. Tato diplomová práce se zaměřuje na vytvoření buněčných modelů pro studium transportu velkých organických molekul přes membrány buněk. Konkrétně se v této práci věnuji snižování exprese megalinu ve dvou modelových buněčných liniích pomocí siRNA proti LRP2 genu. Snížení exprese bylo stanoveno s využitím metody RT-PCR a následně ověřena funkčnost vytvořených modelů s využitím známého substrátu gentamicinu. Jedná se o aminoglykosidové antibiotikum s nefrotoxickým působením. Principem těchto ověřovacích experimentů bylo snížení toxického působení...Charles University Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department of Pharmacology & Toxicology Student: Alexandra Rückelová Supervisor: PharmDr. Lucie Hyršová, Ph.D. Title of diploma thesis: Preparation of genetically modified cell line as a model for accumulation studies The studied megalin transporter belongs to the group of lipoprotein receptors, namely low density lipoprotein receptor-related protein 2 (LRP2). It is a transporter capable of transporting large organic molecules into the cell through the receptor - mediated endocytosis. Huge variety of peptide compounds including albumin, hemoglobin, vitamins, hormones as well as the amoniglycoside antibiotics (e.g. gentamicine), polymixin B, cadmium and other substrates belong among its substrates. This theses is focused on the creation of cell models for the study of the transport of large organic molecules across the cell membranes. I am dealing with reducing megalin expression in two model cell lines using siRNA against LRP2 gene. The inhibition of expression was determined using the RT-PCR method and subsequently verified on the functional level using known megalin substrate gentamicine. It is an aminoglycoside antibiotic with nephrotoxic action. The principle of these validation experiments was to reduce gentamicine toxic effects in cells...