Název: Nanočástice pro přenos genové terapie
Překlad názvu: Nanoparticle-Mediated Delivery System for Gene Therapy
Autoři: Dvořáková, Nikola ; Ellederová, Zdeňka (vedoucí práce) ; Šálek, Petr (oponent)
Typ dokumentu: Diplomové práce
Rok: 2019
Jazyk: cze
Abstrakt: [cze] [eng]
Genová editace pomocí CRISPR/Cas9 systému je jedna z možností, která udává nový směr v rozvoji genové terapie. Nejčastěji využívaným prostředkem pro přenos DNA do buněk jsou viry, které však nedokáží často pojmout CRISPR/Cas9 systém, velký až několik kb. Nanočástice (NPs) jako nevirové přenašeče se jeví jako možný prostředek, jak tento systém do buňky přenést. Pro tuto práci byly vybrány magnetické Fe3O4 NPs (MNPs) kvůli jejich skvělým vlastnostem jako je multifunkčnost, biokompatibilita, snadná odbouratelnost a jednoduchá syntéza. Cílem práce bylo vytvořit MNPs a komplex MNPs obalených PEI/CRISPR-Cas9 plazmidem a následně je charakterizovat pomocí fyzikálně chemických metod. Vytvořenému komplexu MNPs/PEI/CRISPR-Cas9 byly definovány přesné parametry, které byly určeny jako vhodné pro možné pohlcení buňkou. Byla ověřena také hypotéza stabilizace komplexu MNPs/CRISPR-Cas9 plazmidu po přidání polyethyleniminu (PEI), který dokáže taktéž plazmidovou DNA ochránit i před restrikčními endonukleázami. Následně mohla být komplexem MNPs/PEI/CRISPR-Cas9 transfekována stabilní modifikovaná buněčná linie HEK293-TLR3, určená pro možné pozorování oprav dvouřetězcových zlomů (DSB) pomocí nehomologního připojení konců (NHEJ) nebo homologní rekombinace (HR). Výsledky ukazují efektivitu transfekce 13 % a pro NHEJ 5 %... Gene editing with the CRISPR/Cas9 system is one of the options that sets a new trend in the development of gene therapy. The most commonly used delivery of DNA into the cells are via viruses. Nevertheless, they are often unable to take CRISPR/Cas9 system, which can be bigger than several kb. Nanoparticles (NPs), as non-viral transporters, seem to be a good alternative delivery system. For this work magnetic Fe3O4 NPs (MNPs) were selected, because of their excellent properties such as multifunctionality, biocompatibility, easy degradation and simple synthesis. The aim of this work was to synthesise MNPs and a complex of MNPs coated with PEI/CRISPR-Cas9 plasmid and to characterize them by physicochemical methods. The created complex MNPs/PEI/CRISPR-Cas9 was defined by exact parameters that are suitable for possible cell uptake. The hypothesis of stabilization of the MNPs/CRISPR-Cas9 plasmid complex by polyethylenimine (PEI), which can also protect plasmid DNA against restriction endonucleases, was verified. Next a stable modified cell line HEK293-TLR3, designed to evaluate the efficacy of double strand break (DSB) repair by nonhomologous end joining (NHEJ) or homologous recombination (HR) was, transfected with the synthesised MNPs/PEI/CRISPR-Cas9 complex. The results indicate a 25% transfection...
Klíčová slova: CAS9; CRISPR; genová terapie; nanočástice; CAS9; CRISPR; gene therapy; nanoparticles

Instituce: Fakulty UK (VŠKP) (web)
Informace o dostupnosti dokumentu: Dostupné v digitálním repozitáři UK.
Původní záznam: http://hdl.handle.net/20.500.11956/106196

Trvalý odkaz NUŠL: http://www.nusl.cz/ntk/nusl-397521


Záznam je zařazen do těchto sbírek:
Školství > Veřejné vysoké školy > Univerzita Karlova > Fakulty UK (VŠKP)
Vysokoškolské kvalifikační práce > Diplomové práce