Název:
Panely reportérových linií pro steroidní receptory určené k profilování chemických knihoven a vývoj selektivních ligandů pro estrogenové receptory alfa a beta
Překlad názvu:
Panels of steroid receptor reporter cell lines for compound profiling and development of selective ligands for estrogen receptor alpha and beta
Autoři:
Sedlák, David ; Bartůněk, Petr (vedoucí práce) ; Anzenbacher, Pavel (oponent) ; Kasal, Alexander (oponent) Typ dokumentu: Disertační práce
Rok:
2010
Jazyk:
eng
Abstrakt: [eng][cze] of the Ph.D. thesis Steroid hormone receptors represent a major target in the drug discovery. As ligand inducible transcription factors, their activity can be modulated by small lipophilic molecules. The first part of this work describes a preparation of two panels of potent, selective and robust luciferase reporter cell lines on the unified cellular background in U2OS osteosarcoma cell line. This system consists of two panels of stable luciferase reporter cell lines for estrogen receptor α (ERα), estrogen receptor β (ERβ), androgen receptor (AR), glucocorticoid receptor (GR), mineralocorticoid receptor (MR) and progesterone receptor (PR). The first panel of reporter cell lines relies on the expression of the chimeric steroid receptors created by the replacement of the N-terminal part of the steroid receptor molecule by Gal4 DNA binding domain (Gal4 DBD) binding to 9 copies of Gal4 upstream activation sequences (Gal4 UAS) in the promoter of the pGL4 luciferase reporter vector. In the second panel of reporter cell lines the activation of either synthetic promoter containing multiple hormone response elements or viral promoter derived from MMTV LTR is mediated by full- length exogenously expressed steroid receptors. We have extensively validated both panels using 28 well established ligands, carefully...Obr 1. Porovnání odpovědí U2OS-ERα/3xERE (●), U2OS-ERαwt -LBD/9xGal4UAS (○) a U2OS- ERαG420C -LBD/9xGal4UAS ( ) z reportérových buněčných linií vystavených vzrůstající koncentraci vybraných látek. Agonistická odpověď reportérových buněčných linií v závislosti na E2 (A), DES (B) a PPT (C) je vyjádřena jako podíl naměřené luciferázové aktivity vyvolané testovanou látkou a luciferázovou aktivitou naměřenou maximální stimulací receptoru pomocí E2. V antagonistickém modu byly buňky inkubovány s různými koncentracemi ICI 182.780 (D), raloxifene hydrochloridu (E) and tamoxifen citrátu (F). Panel reportérových linií využívajících plnodélkových steroidních receptorů je zvláště vhodný pro detailní studium mechanizmů jakými látky dosahují biologických projevů vazbou na steroidní receptory. Tento systém totiž poskytuje biologicky více významnou informaci o aktivitě testované látky tím, že odráží například aktivitu jiných transkripčních faktorů, signálních drah, přítomnost různých kofaktorů v buňce atd. Užitečnost těchto buněčných linií jsme prokázali "screeningem" chemické knihovny obsahující 3700 látek a identifikací nových agonistů a antagonistů pro PR, MR a GR. Obr 3. Účinek E2 na růst myší mléčné žlázy u mladých myších samic. Prepubertálním mladým myším bylo po dobu 10 dnů podáváno subkutánně pouze olejové...