|
|
Vliv Spiruliny platensis na endoteliální expresi P-selektinu u myší
Králová, Monika ; Nachtigal, Petr (vedoucí práce) ; Mičuda, Stanislav (oponent)
Monika Králová Vliv Spiruliny platensis na endoteliální expresi P-selektinu u myší. Diplomová práce Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Farmacie Cíl práce: Sledovali jsme endoteliální expresi P-selektinu v aortě u apoE-deficientních myší po podávání Spiruliny platensis. Exprese P-selektinu byla kvantifikována pomocí stereologických metod. Metody: V experimentu jsme použili myší samce kmene C57BL/6J s deficitem apolipoproteinu E (apoE-/- ). Myši byly rozděleny do dvou skupin. Kontrolní skupině byla podávána aterogenní dieta s obsahem 1% cholesterolu po dobu 8 týdnů. Ve Spirulina platensis skupině byly myši krmeny stejnou aterogenní dietou s přídavkem 40 mg Spiruliny denně. Provedli jsme biochemickou analýzu krve. Imunohistochemická analýza byla provedena v 1 cm aortálního sinu a v části aortálního oblouku. Pro hodnocení byly nakrájeny série příčných řezů o tloušťce 7 µm. Pro detekci exprese P-selektinu v řezech jsme použili metodiku s avidin-biotinovým komplexem (ABC) a vizualizací pomocí diaminobenzidinu (DAB). Výsledky: Biochemická analýza neprokázala výrazné změny v hladinách celkového cholesterolu u kontrolních myší ve srovnání se skupinou, které byla podávána Spirulina. Exprese P-selektinu byla pozorována u všech myší v experimentu. U obou skupin byla exprese...
|
|
|
Nukleární receptory - studium nových ligandů a význam genové variability
Carazo Fernández, Alejandro ; Pávek, Petr (vedoucí práce) ; Mičuda, Stanislav (oponent) ; Vrzal, Radim (oponent)
V ČESKÉM JAZYCE Kandidát: Mgr. Alejandro Carazo Fernández Školitel: Prof. Petr Pávek, PhD. Název dizertační práce: Nukleární receptory - stadium nových ligandů a význam genové variability Nukleární receptory (NR) náleží do superrodiny transkripčních faktorů, které regulují expresi cílových genů. Nukleární receptory se dělí na steroidní receptory, "adopted orphan receptors" a sirotčí receptory. Receptory, které nemají žádný identifikovaný endogenní ligand, jsou nazývány jako "sirotčí receptory". Nukleární receptory hrají důležitou roli ve fyziologických procesech a jsou široce distribuovány po celém lidském těle. Jejich role je důležitá například při regulaci adipogeneze, glukoneogeneze, lipolýze, odpovědi na inzulín, oxidativním metabolismu, homeostáze mastných kyselin, homeostáze cholesterolu, homeostáze glykogenu a triglyceridů. Během své doktorské práce jsem testoval několik sad látek endogenní, přírodní a syntetické povahy na interakce s několika jadernými receptory se zaměřením zejména na konstitutivní androstanový receptor (CAR) a v menší míře na pregnanový X receptor (PXR). Mým hlavním cílem bylo najít nové a spolehlivé ligandy nebo aktivátory lidského CAR. Kromě toho, cílem bylo studovat mechanismus účinku, kterým tyto sloučeniny interagují s CAR receptorem a jakým způsobem regulují jeho...
|
|
|
Alterations in gene expression of hepatobiliary transporters as potential mechanisms for drug-induced cholestasis by amoxicillin and clavulanic acid
Řepová, Veronika ; Pávek, Petr (vedoucí práce) ; Mičuda, Stanislav (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmakologie a toxikologie Studentka: Veronika Řepová Školitel: Prof. PharmDr. Petr Pávek, Ph.D., Prof. Ramiro Jover Atienza, Ph.D. Název diplomové práce: Změny genové exprese hepatobiliárních transportérů jako potenciální mechanismy vzniku polékové cholestázy navozené amoxicilinem a kyselinou klavulanovou Amoxicilin a kyselina klavulanová (AMO/CLA) představují v současné době jednu z nejčastějších příčin idiosynkratického polékového poškození jater (DILI). Navzdory obtížím v diagnostice a vyhodnocování kauzality byly již klinické projevy zdokumentovány a ve většině případů klasifikovány jako cholestatické jaterní poškození. Počet studií týkajících se molekulárních mechanismů polékové cholestázy se stále zvětšuje, přičemž role hepatobiliárních transportérů se ukázala být pro patogenezi zásadní. Molekulární mechanismy vzniku DILI navozeného AMO/CLA však zůstávají stále neobjasněny. Za účelem prozkoumat hepatotoxický efekt AMO/CLA a AMO in vitro byly jako hepatocelulární modely použity buňky HepG2 a lidské hepatocyty Upcyte. Hladiny mRNA klíčových transportérů pro žlučové kyseliny (BAs), enzymů a jaderných receptorů (NRs) byly změřeny použitím kvantitativní polymerázové řetězové reakce. Cytotoxické koncentrace AMO a AMO/CLA byly...
|
|
|
Development of novel cholinesterase modulators
Górecki, Lukáš ; Korábečný, Jan (vedoucí práce) ; Mičuda, Stanislav (oponent) ; Roh, Jaroslav (oponent)
Název: Výzkum nových modulátorů cholinesteras Autor: Mgr. Lukáš Górecki Abstrakt Enzym acetylcholinesterasa (AChE) je klíčovým komponentem cholinergních synapsí a nervosvalových spojích. Její biologická funkce je nezbytná pro všechny zástupce živočišné říše. Z patofyziologického hlediska je zapojena do řady onemocnění jako Alzheimerova choroba (AD, z anglického Alzheimer's disease) nebo Myasthenia gravis. Význam tohoto enzymu může taktéž být prokázán tím, že se AChE stala spolehlivým terčem pro řadu insekticidů. Mimo jiné nejtoxičtější skupina chemických bojových látek (nervově paralytické látky; NPL) rovněž cílí na tento enzym. V této disertační práci jsme se zaměřili na AChE ze tří různých aspektů, jako cíl proti AD, jako insekticidy a jako enzym, který musí být reaktivován po intoxikaci organofosforovými sloučeninami. Už od dob nástupu takrinu jako prvního léčivého přípravku proti AD v roce 1993, AChE inhibitory jsou velkou skupinou látek cílící proti tomuto onemocnění. Některé z nich byly i úspěšně uvedeny do klinické praxe (např. donepezil). V dnešní době však stále neexistuje úspěšná léčba tohoto multifaktoriálního onemocnění. Moderní postupy vývoje léčiv se snaží zaměřit na více cílů najednou přípravou takzvané multi-cílové látky (MTDL, z anglického multi-targeted directed ligand). V této práci je...
|
|
| |
|
|
Effect of epigallocatechin gallate on bile production
Hiršová, Petra ; Mičuda, Stanislav (vedoucí práce) ; Slanař, Ondřej (oponent) ; Trejtnar, František (oponent)
Souhrn Vliv epigallokatechingalátu na tvorbu žluče Epigallokatechingalát (EGCG), významný katechin zeleného čaje, působil příznivě u řady experimentálních modelů poškození jater. Jeho efekt na tvorbu žluče a jaterní metabolismus cholesterolu však nebyl dosud zcela objasněn. V předkládané disertační práci byl studován účinek EGCG na tvorbu žluče a homeostázu žlučových kyselin a cholesterolu jak u zdravých potkanů tak u potkanů s intrahepatální cholestázou navozenou podáváním ethinylestradiolu. Podávání EGCG potkanům vedlo ke snížení toku žluče o 23 %. Paracelulární permeabilita a biliární exkrece žlučových kyselin nebyla ovlivněna, zatímco biliární exkrece glutathionu po podáváni EGCG byla snížena významně (o 70 %). Stejně tak významné bylo snížení exprese proteinu Mrp2, hlavního transportéru pro glutathion. EGCG výrazně zvýšil biliární exkreci cholesterolu a fosfolipidů. Tyto změny těsně korelovaly se zvýšenou expresí Abcg5/8 (ATP-binding cassette transporter G5/8) a Sr-B1 (scavenger receptor class B type 1) a se sníženou expresí acyl-CoA:cholesterol acyltransferázy (Acat2). EGCG u potkanů rovněž zvýšil plazmatické koncentrace žlučových kyselin. Zatímco exprese hlavních jaterních transportérů žlučových kyselin se nezměnila, exprese Cyp7a1, klíčového enzymu v syntéze žlučových kyselin, byla po podávání EGCG...
|
|
|
Studium biologického chování derivátů kyseliny hyaluronové
Svanovský, Evžen ; Lázníček, Milan (vedoucí práce) ; Tilšer, Ivan (oponent) ; Mičuda, Stanislav (oponent)
Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmakologie a toxikologie Kandidát: Mgr. Evžen Svanovský Školitel: Prof. PharmDr. Ing. Milan Lázníček, CSc. Název disertační práce: Studium biologického chování derivátů kyseliny hyaluronové Dizertační práce se zabývá studiem biodistribuce a farmakokinetiky hyaluronové kyseliny značené izotopem 111 In a možných rozdílů v závislosti na molekulové hmotnosti HA. HA je v organismech přirozeně se vyskytující glykosaminoglykan s řadou důležitých funkcí jak na orgánové, tak na buněčné úrovni, při fyziologických i patologických dějích. Její charakter fyziologické látky zároveň velmi znesnadňuje možnosti jejího sledování v organismu. Vytvořením vhodného derivátu a reprodukovatelného postupu značení této molekuly izotopem se stalo stěžejním bodem celé práce. V experimentální části byla molekula DTPA-HA, vytvořená na pracovišti společností CPN Dolní Dobrouč, značena známou metodou používanou běžně pro vazbu 111 In na molekulu DTPA. Byl vytvořen reprodukovatelný postup, při kterém je 0,4M acetátový pufr pH 5,5 smíchán se stejným objemem, gelovou filtrací přečištěné, DTPA-HA a požadovaným množstvím izotopu 111 In a celá směs je míchána 0,5h. Takto byly značeny molekuly DTPA- HA o třech molekulových hmotnostech 10, 100 a 400kDa, které se...
|
|
|
Vliv Spirulina platensis na endoteliální expresi ICAM-1 u myší
Maxová, Vladimíra ; Nachtigal, Petr (vedoucí práce) ; Mičuda, Stanislav (oponent)
Vladimíra Maxová Vliv Spirulina platensis na endoteliální expresi ICAM-1 u myší. Diplomová práce Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Farmacie Cíl práce: Cílem bylo zjistit a popsat vliv podávání Spirulina platensis na endoteliální expresi ICAM-1 u aortě apoE-deficientních myší za použití imunohistochemických a stereologických metod. Metody: Použitá zvířata byli myší samci kmene C57BL/6J s deficitem apolipoproteinu E ve stáří 3 měsíců. Myši byli náhodně rozděleny do dvou skupin, z nichž každá byla krmena speciální aterogenní stravou s obsahem 1% cholesterolu po dobu 8 týdnů. Myším ve Spirulina platensis skupině bylo denně k dietě přidáváno 40mg Spiruliny. Poté byla provedena biochemická analýza vzorků krve odebraných ze srdce a imunohistochemická a stereologická analýza materiálu z aortálního sinu a horní části aortálního oblouku. Detekce exprese ICAM-1 byla uskutečněna pomocí metodiky Avidin-Biotin Complex (ABC) s využitím detekce diaminobenzidinem (DAB). Výsledky: Biochemická analýza neprokázala signifikantní změny hladin celkového cholesterolu po 8 týdnech podávání Spiruliny v porovnání s kontrolní skupinou. Imunohistochemickým barvením se prokázala exprese ICAM-1 v endotelu i aterosklerotických plátech u obou skupin zvířat. Intenzita zbarvení se nelišila v obou...
|
|
|
Změny ve složení a lokalizaci gangliosidů u cholestázy v návaznosti na markery signalizující patologické procesy v jaterních buňkách.
Petr, Tomáš ; Muchová, Lucie (vedoucí práce) ; Mičuda, Stanislav (oponent) ; Befekadu, Asfaw (oponent)
Předkládaná disertační práce je zaměřena na studium glykosfingolipidů v jaterní tkáni potkana u různých typů cholestatického onemocnění a vlivu oxidačního stresu na změny ve složení a lokalizaci gangliosidů. Nejprve byly optimalizovány metodické podmínky pro imunochemickou detekci GM1 gangliosidu (zástupce glykosfingolipidové rodiny). Zjistili jsme, že zcela klíčovým faktorem při fixaci histologických řezů je minimalizace obsahu vody ve fixačním činidle. Optimalizovanou metodiku jsme poté využili při in vivo experimentech. Na modelu cholestázy indukované estrogeny jsme prokázali, že působením vysoké koncentrace žlučových kyselin a oxidačního stresu dochází ke změnám v syntéze a distribuci gangliosidů v játrech. Pokud u experimentálních zvířat indukujeme antioxidační enzym hemoxygenázu a snížíme tak oxidační stres, dojde k posunu glykosfingolipidového spektra zpět ke kontrolním hodnotám. Analogickým experimentem na potkanech s mikrochirurgickým podvazem segmentálních jaterních žlučovodů jsme zjistili, že změny v lokalizaci a syntéze gangliosidů nejsou přísně specifické pro určitý typ cholestatického poškození, ale pravděpodobně se jedná o obecnější mechanismus hepatoprotekce. Rovněž jsme potvrdili významnou roli bilirubinu, vznikajícího z hemu účinkem hemoxygenázy, v ochraně hepatocytů před...
|
|
|
Vliv genetické predispozice jedince na farmakokinetiku a farmakodynamiku vybraných opioidů
Matoušková, Olga ; Perlík, František (vedoucí práce) ; Votava, Martin (oponent) ; Mičuda, Stanislav (oponent)
MUDr. Olga Matoušková - dizertační práce Vliv genetické predispozice jedince na farmakokinetiku a farmakodynamiku vybraných opioidů ABSTRAKT Úvod: Cílem dizertační práce je studium vlivu polymorfismu CYP2D6 a MDR1 na farmakokinetiku a farmakodynamiku tramadolu u zdravých dobrovolníků s využitím pupilometrického měření. Sekundárním cílem je zhodnocení vztahu uvedených polymorfismů na analgetickou účinnost a nežádoucí účinky piritramidu u akutní pooperační bolesti. Soubor a metody: Do dvou prospektivních prací studujících vliv genetické predispozice na farmakokinetické a farmakodynamické parametry tramadolu jsme zařadili celkem 90 zdravých dobrovolníků. Do klinických studií věnujících se opioidní analgezii a vlivu genetické predispozice na farmakoterapeutický efekt a výskyt nežádoucích účinků u pacientů s akutní pooperační bolestí jsme zahrnuli celkem 161 pacientů s akutní pooperační bolestí. Genotypizaci polymorfismu genu CYP2D6 a MDR1 jsme provedli pomocí PCR - RFLP analýzy, ke stanovení koncentrace tramadolu a jeho metabolitu jsme použili plynovou a kapalinovou chromatografii a farmakodynamický efekt opioidů jsme hodnotili pomocí pupilometrického měřění a vizuální analogové škály. Výsledky a závěr: Variabilita opioidního účinku je ovlivněna farmakogeneticky podmíněnými rozdíly v metabolismu vyvolanými...
|
host ::
RSS.