|
|
Zavedení afinitní separace do purifikačního protokolu lidských membránově vázaných enzymů redukujícících karbonylové sloučeniny
Štýbnarová, Radka ; Zemanová, Lucie (vedoucí práce) ; Skarka, Adam (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Radka Štýbnarová Školitel: RNDr. Lucie Zemanová, Ph.D. Název diplomové práce: Zavedení afinitní separace do purifikačního protokolu lidských membránově vázaných enzymů redukujících karbonylové sloučeniny Karbonyl-redukující enzymy hrají důležitou roli v metabolismu mnohých eobiotik (steroidů, prostaglandinů) i xenobiotik (doxorubicinu, daunorubicinu, oracinu, NNK, haloperidolu). Vzhledem k jejich substrátové specifitě hrají také důležitou roli ve vývoji některých onemocnění, jako je rakovina závislá na hormonech nebo metabolický syndrom. Zatímco cytosolické karbonyl-redukující enzymy jsou dobře charakterizovány, informací o membránově vázaných je vzhledem k jejich náročnému studování podstatně méně. V současnosti jsou popsány pouze tři mikrosomální karbonyl-redukující enzymy účastnící se metabolismu xenobiotik (11β-HSD1, DHRS7 and DHRS3), z nichž pouze 11β-HSD1 je dobře charakterizována. Nicméně, na základě výzkumu protinádorového léčiva oracinu a jeho stereospecifity redukce se předpokládá existence dalších mikrosomálních karbonyl-redukujících enzymů, účastnících se jeho metabolismu a inaktivace. Abychom mohli izolovat tyto "neznámé" enzymy, byl vyvinut afinitní nosič s imobilizovaným ligandem...
|
|
| |
|
|
Vliv monepantelu na expresi biotransformačních enzymů ovce
Štolcová, Tereza ; Skálová, Lenka (vedoucí práce) ; Zemanová, Lucie (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Tereza Štolcová Školitel: prof. RNDr. Lenka Skálová Ph.D. Název práce: Vliv monepantelu na expresi biotransformačních enzymů ovce Monepantel (MOP) představuje nové anthelmintikum ze skupiny amino-acetonitrilových derivátů, s odlišným mechanismem účinku oproti klasickým širokospektrým anthelmintikům. Používá se na léčbu a kontrolu gastrointestinálních nematodóz u ovcí a skotu. Tato práce se zaměřuje na vliv MOP na expresi vybraných cytochromů P450 (CYP) u ovcí in vivo a in vitro. K in vivo experimentům byla použita játra ovcí, kterým byl podán MOP v doporučené terapeutické dávce. Kontrolní skupině zvířat nebylo léčivo podáno. Při in vitro pokusech byly pozorovány změny v expresi mRNA vybraných CYP po 24 hodinové inkubaci primárních kultur ovčích hepatocytů s 10 μM MOP. Ke stanovení transkripčních hladin mRNA byla využita metoda qPCR (kvantitativní PCR v reálném čase). Výsledky in vivo i in vitro experimentů svědčí o výrazném nárůstu v expresi isoformy CYP3A24. Indukční efekt monepantelu byl dokonce vyšší, než indukční efekt známého CYP3A induktoru rifampicinu. Indukce enzymů CYP3A může mít vážné farmakologické anebo toxikologické důsledky. Při současném (případně následném) podání jiných léčiv s MOP...
|
|
|
Funkce a stanovení sulfotransferázy v kůži
Hekrlová, Jana ; Zemanová, Lucie (vedoucí práce) ; Szotáková, Barbora (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Jana Hekrlová Školitel: Mgr. Martina Moravcová, Ph.D. RNDr. Lucie Zemanová, Ph.D. Název diplomové práce: Funkce a stanovení sulfotransferázy v kůži Sulfotransferázy jsou enzymy nacházející se v tenkém střevě, svalech, prostatě a v menší míře v placentě, průdušnici, plicích a kůži, které se podílejí na sulfonaci steroidních hormonů, neurostransmiterů a dalších endogenních molekul. Významnou roli hrají při biotransformaci xenobiotik. Mezi nejdůležitějšího zástupce skupiny transferáz v kůži řadíme cholesterolsulfotransferázu (SULT2B1b), jejíž funkcí je katalyzovat přenos sulfoskupiny na cholesterol. SULT2B1b hraje významnou roli ve tvorbě kožní bariéry a také ve stárnoucí kůži. Sulfonací cholesterolu katalyzovanou SULT2B1b vzniká v epidermis cholesterol sulfát (CHS). CHS je významnou komponentou lipidů v epidermis. CHS má regulační roli v procesu formovaní kožní bariéry a deskvamace kůže, tedy při intercelulárních adhezivních interakcích. Cílem práce bylo najít vhodnou metodu a optimální podmínky pro měření aktivity SULT2B1b tak, aby byla metodika použitelná pro stanovení v bezbuněčném a rovněž v buněčném systému. Z dostupných možných metodik jsme zvolili dvoustupňové reakce, kdy výsledný produkt...
|
|
|
Konkurenční boj na trati Praha-Ostrava v českých denících
Zemanová, Lucie ; Jirků, Jan (vedoucí práce) ; Vysloužilová, Kristýna (oponent)
Diplomová práce s názvem Konkurenční boj na trati Praha-Ostrava v českých denících, se zabývá způsobem, jakým média informovala o dění na železnici v době nástupu třetího dopravce na tuto trať v období od 1. 10. 2012 do 1. 2. 2013. Autorka vychází z teorie o objektivitě a nestrannosti médií, která předpokládá, že média budou informovat o dění na železnici z různých pohledů a dají stejný prostor k vyjádření všem dopravcům. V úvodu práce byly definovány podstatné pojmy k tématu jako konkurence a konkurenceschopnost. Dále také teoretické koncepty objektivity a nestrannosti tisku, z nichž výzkum vychází. Součástí práce jsou profily konkurenčních dopravních společností České dráhy, STUDENT AGENCY a LEO Express a významné události na železnici ve zkoumaném období. Mezi důležité teoretické části práce patří také metodika výzkumu, kde autorka vymezila výzkumné techniky a specifikovala analyzovaný materiál. Základem práce je kvantitativní analýza 61 relevantních článků věnovaných železnici v období 1. 10. 2012 - 1. 2. 2013. Zkoumány byly příspěvky z deníků MF Dnes, Lidové noviny a Hospodářské noviny. Výsledky jsou interpretovány a znázorněny pomocí grafů. Závěr předkládá doporučení ohledně další možnosti replikace výzkumu.
|
|
|
Optimalizace exprese vybrané lidské karbonylreduktasy v Escherichia coli
Ježková, Veronika ; Novotná, Eva (vedoucí práce) ; Zemanová, Lucie (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Řešitel: Bc. Veronika Ježková Vedoucí práce: RNDr. Eva Novotná, PhD. Název práce: Optimalizace exprese vybrané lidské karbonylreduktasy v Escherichia coli Diplomová práce s názvem Optimalizace exprese vybrané lidské karbonylreduktasy v Escherichia coli je členěna na dvě části, teoretickou a experimentální. Teoretická část představuje stručný souhrn informací o vybraných enzymech karbonylreduktase 1 (CBR1), chinon-oxidoreduktase (NQO1) a enzymu DHRS2 (Hep27). Její součástí je i teoretický souhrn laboratorních metod, které byly použity v experimentální části. Experimentální část si klade za cíl optimalizaci expresních podmínek těchto vybraných enzymů v bakteriálním expresním systému Lemo21(DE3). Plasmid pET-28b(+), který kóduje naše vybrané enzymy, jsme teplotním šokem transformovali do kompetentních bakteriálních buněk Lemo21(DE3), v nichž probíhala proteinová exprese za různých koncentrací L-rhamnosy. Exprimovaný rekombinantní protein NQO1 jsme poté purifikovali metodou afinitní chromatografie. Úspěšnost exprese proteinů jsme ověřovali SDS-PAGE, popřípadě pomocí Western Blotu. Z výsledků získaných elektroforézou je patrné, že se podařilo úspěšně exprimovat enzym karbonylreduktasu 1 za různých koncentrací...
|
|
|
Vyhledání referenčních genů pro relativní kvantifikaci mRNA z Haemonchus contortus
Růžičková, Michaela ; Matoušková, Petra (vedoucí práce) ; Zemanová, Lucie (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Michaela Růžičková Školitel: Ing. Petra Matoušková, Ph.D. Název diplomové práce: Vyhledání referenčních genů pro relativní kvantifikaci mRNA z Haemonchus contortus Haemonchus contortus je parazitická hlístice, jejíž multirezistence k anthelminti- kům je celosvětovým problémem ohrožujícím hlavně chovy malých přežvý- kavců. V roce 2013 byl publikován její genom a transkriptom, což umožnilo rozsáhlý výzkum genové exprese. Referenční geny pro tyto studie prozatím ne- byly stanoveny. Použití vhodných referenčních genů je nezbytné pro správnou normalizaci hladin exprese genů. Cílem této práce bylo navrhnout a zhodnotit potenciální referenční geny pro studie genové exprese u dospělců H. contortus. Navrženo bylo 11 genů, stabilita jejich exprese byla hodnocena na samcích a sa- micích dvou kmenů H. contortus, jednoho na anthelmintika vnímavého (ISE) a druhého multirezistentního (WR). Z jedinců byla extrahována RNA, přepsána reverzní transkripcí do cDNA. Tato byla zředěna a analyzována kvantitativní real-time PCR s detekcí pomocí SYBR Green I. Stabilita exprese byla hodnocena počítačovými programy BestKeeper, geNorm, NormFinder a komparativní CT metodou. Nejstabilnějšími geny se jeví ncbp, ama, sodc, gapdh a...
|
|
|
Detekce oxidativního poškození DNA pomocí kometového testu
Kúdelová, Terézia ; Szotáková, Barbora (vedoucí práce) ; Zemanová, Lucie (oponent)
Univerzita Karlova v Prahe Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických vied Kandidát: Terézia Kúdelová Školiteľ: Doc. Ing. Barbora Szotáková, Ph.D. Školiteľ špecialista: Prof. RNDr. Rudolf Štětina, CSc. Názov diplomovej práce: Detekcia oxidačného poškodenia DNA pomocou metódy Comet Assay Opravné mechanizmy majú v organizme dôležitú úlohu. Pri poruche týchto mechanizmov vzniká nerovnováha, čo môže viesť k indukcii mnohých ochorení. Táto práca je zameraná na ochranu DNA pred oxidačným poškodením. Schopnosť ľudských buniek A549 poradiť si s oxidačným stresom bola sledovaná v podmienkach in vitro. Oxidačné poškodenie bolo indukované peroxidom vodíka (H2O2), ktorý v DNA inicioval vznik jednoreťazcových zlomov (SSBs) a súčasne oxidáciu pyrimidínových a purínových báz. Mechanizmus poškodenia a reparácie sa sledoval dvoma spôsobmi. V prvom prípade sa bunky najskôr ošetrili antioxidantom, a následne sa vystavili pôsobeniu H2O2. V druhom prípade sa bunky najskôr poškodili H2O2, a následne sa nechali reparovať s pridaním antioxidačnej látky. Testovanými antioxidantmi boli epigalokatechin galát (EGCG), glutathion (GSH) a jeho chemické modifikácie - S- allyldithioglutathion (GSH-A) a S-allyltrithioglutathion (GSH-B). Rozsah poškodenia DNA sa odhadoval pomocou metódy Comet Assay v alkalickej...
|
|
|
Imunochemické stanovení enzymů DHRS8 a DHRS12 v lidských tkáních
Svobodová, Markéta ; Novotná, Eva (vedoucí práce) ; Zemanová, Lucie (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Markéta Svobodová Školitel: RNDr. Eva Novotná, Ph.D. Název diplomové práce: Imunochemické stanovení enzymů DHRS8 a DHRS12 v lidských tkáních Dehydrogenasa/reduktasa (SDR rodiny) člen 8 (DHRS8, SDR16C2) a dehydrogenasa/reduktasa (SDR rodiny) člen 12 (DHRS12, SDR40C1) jsou lidské mikrosomální enzymy, které patří do nadrodiny dehydrogenas/reduktas s krátkým řetězcem (SDR). Tato nadrodina představuje jednu z největších proteinových skupin. SDR enzymy se podílejí na metabolismu různých endogenních a cizorodých látek a jsou zapojeny do fyziologických i patologických procesů. Nicméně, stále existuje mnoho enzymů, které nejsou dostatečně charakterizovány. Doposud jsou k dispozici informace o DHRS8 jen na úrovni mRNA a o její katalytické aktivitě vůči 5α-androstan-3α-17β-diolu. Navíc neexistují dosud publikované informace (kromě predikce) ohledně DHRS12. Cílem této studie bylo prozkoumat expresi DHRS8 a DHRS12 v různých lidských tkáních na úrovni proteinu. Vzorky tkáně byly odebrány od čtyř mužů středního věku po náhlé smrti bez zjevného onemocnění. Detekce proteinů byla provedena pomocí Western blottingu a specifických protilátek. Rekombinantní forma hledaných proteinů (DHRS12, DHRS8) byla exprimována v...
|
|
| |
host ::
RSS.