|
|
Analytické hodnocení biologicky aktivních látek chromatografickými metodami
Pasáková, Ivana ; Sochor, Jaroslav (vedoucí práce) ; Nobilis, Milan (oponent) ; Holčapek, Michal (oponent)
Předkládaná disertační práce se zabývá vývojem a validací chromatografických metod vhodných pro hodnocení vybraných biologicky aktivních látek. Vzhledem k dominantnímu postavení metody HPLC ve farmaceutické analýze, byla pro hodnocení analytů zvolena právě tato metoda ve spojení s UV a MS detekcí. Teoretická část je zaměřena na použité chromatografické metody a problematiku řešenou v rámci experimentální práce. Nejprve je uveden stručný přehled všech chromatografických metod a následně je detailněji popsána nejběžnější analytická metoda HPLC. Poté je věnována pozornost hmotnostní spektrometrii, která se v posledních letech stala nepostradatelnou metodou nejen ve farmaceutické analýze. To především díky její vysoké citlivosti a možnosti získat strukturní informace o analytech. Kromě teoretického úvodu a popisu MS instrumentace je pozornost věnována také jejím aplikacím i novým trendům. Další kapitoly se věnují problematice transdermálního podání léčiv, specifikům antiretrovirální terapie a především hodnoceným analytům. Experimentální část je zpracována jako komentovaný soubor publikovaných prací a je rozdělena do dvou tematických celků. První celek tvoří tři práce zaměřené na analytické hodnocení nového akcelerantu transdermální penetrace - transkarbamu 12. Druhý celek je tvořen prací zabývající se...
|
|
|
Analytické hodnocení léčiv s využitím HPLC II.
Hanková, Eva ; Mokrý, Milan (vedoucí práce) ; Nobilis, Milan (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmaceutické chemie a farmaceutické analýzy Kandidát: Eva Hanková Školitel: RNDr. Milan Mokrý, CSc. Název diplomové práce: Analytické hodnocení léčiv s využitím HPLC II. Abstrakt Tato diplomová práce se zabývala analytickým hodnocením kyseliny tiaprofenové pomocí vysokoúčinné kapalinové chromatografie. Pro stanovení kyseliny tiaprofenové byla použita kolona LiChroCART® 250-4 LiChrospher® 100 RP-18 (5 µm) a mobilní fáze složená z acetonitrilu a vodného pufru KH2PO4 0,01 mol/l v poměru 40 : 60 (v/v). pH pufru bylo upraveno kyselinou fosforečnou na hodnotu 3,0; průtoková rychlost byla nastavena na 1 ml/min a teplota na 22 řC. Jako vnitřní standard byl zvolen naproxen a k detekci byla použita vlnová délka 263 nm. Protože je kyselina tiaprofenová chirální látka vyskytující se ve formě racemátu, následoval výběr chromatografických podmínek pro separaci jejích enantiomerů. Byly zkoušeny dvě chirální kolony v normálním i reverzním módu. Jako nejvhodnější byla vybrána kolona Chiralcel OD-R, 250 × 4,6 mm, (10 µm) na bázi celulózy za použití mobilní fáze o složení n-hexan : propan-2-ol : kyselina octová v poměru 94 : 6 : 0,1 (v/v/v) při průtoku 0,5 ml/min a teplotě 22 žC. Enantiomery byly eluovány v retenčních časech 28,3 a 30,7 minut s rozlišením...
|
|
|
Phase II biotransformation of NSAID flobufen
Babú, Yogeeta ; Wsól, Vladimír (vedoucí práce) ; Nobilis, Milan (oponent) ; Kuchař, Miroslav (oponent)
Xenobiotika jsou chemické sloučeniny tělu cizí, které se obvykle tvoří syntetickými nebo abiotickými procesy. Syntetická xenobiotika mají často obrovský význam pro lidskou společnost a představují většinu chemických sloučenin z tak významných skupin, jako jsou petrochemikálie, pesticidy, plasty a léky, u kterých se obvykle ve vztahu ke xenobiotikům používá termín léčivo. Biotransformace je hlavním mechanismem eliminace léčiv, protože ta se biotransformaci podrobí ihned po vstupu do organismu. Biotransformace, která téměř vždy poskytuje metabolity polárnější, než je výchozí látka, obvykle ukončuje farmakologický účinek parentního léčiva a prostřednictvím exkrece zvyšuje odstraňování léčiva z těla. Nicméně může mít i další důsledky včetně podobného nebo odlišného farmakologického účinku nebo toxikologického působení. Je mnoho odlišných drah, kterými může být léčivo biotransformováno, a ty zahrnují mimo jiné oxidační, redukční, hydrolytické a konjugační reakce. Je důležité těmto drahám porozumět, protože cesta metabolismu léčiva může určovat jeho konečný farmakologický nebo toxikologický účinek. Biotransformace léčiv se rozděluje do dvou fází: Fáze I neboli přípravné reakce a Fáze II čili konjugační reakce. Kromě fyzikálně-chemických činitelů ovlivňujících metabolismus xenobiotik, hrají důležitou úlohu v...
|
|
|
Analýza biologicky aktivních látek s využitím kapilární elektroforézy
Petrů, Klára ; Polášek, Miroslav (vedoucí práce) ; Nobilis, Milan (oponent) ; Urbánek, Marek (oponent)
Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra Analytické chemie Kandidát Mgr. Klára Petrů Školitel Doc. RNDr. Miroslav Polášek, CSc. Název disertační práce Analýza biologicky aktivních látek s využitím kapilární elektroforézy Předložená práce se zabývá analýzou farmaceuticky významných kvartérních amoniových bází metodou kapilární elektroforézy (CE). V teoretické části jsou popsány principy kapilární elektroforézy a možné způsoby detekce spojené s touto technikou s důrazem na bezkontaktní vodivostní detekci (C4D) a spojení kapilární elektroforézy s hmotnostním spektrometrem (CE-MS). Dále jsou charakterizovány kvarterní amoniové sloučeniny, které byly předmětem studie - carbethopendecinium bromid, pankuronium bromid (PM), vekuronium bromid (VM) a rokuronium bromid (RM). Experimentální část popisuje vývoj a validaci nových CE metod, které nebyly v souvislosti s těmito látkami dříve popsány. Metody byly použity k analýze reálných farmaceutických přípravků. Ve všech případech byla C4D metodou volby pro detekci těchto látek málo absorbujících v UV oblasti. I. První část se zabývá analýzou antiseptické látky povahy tenzidu - septonexu. Základní elektrolyt (BGE) 30 mM MES o pH 7 s přídavkem 12,5 mg/ml 2-hydroxypropyl-β-cyklodextrinu a obsahem 20 % (v/v) ACN eliminoval adsopci...
|
|
|
HPMC-based liposomal mucoadhesive films with model peptide as target API
Belcáková, Hedviga ; Nobilis, Milan (vedoucí práce) ; Doležal, Pavel (oponent)
Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové, Katedra farmaceutické chemie a farmaceutické analýzy Kandidát: Hedviga Belcáková Školiteľ: Prof. Milan Nobilis, CSc; Vernika Fidelj (Heidelberg Universität, Institut für Pharmazie und Molekulare Biotechnologie) Názov diplomovej práce: Lipozomální mukoadhezivní filmy na bázi HPMC s modelovým peptidem jako cílovým API Predmetom diplomovej práce je preliminárna formulačná fáza mukoadhezívnych bukálnych filmov určených k transmukozálnemu podaniu peptidových liečiv. Skúšobné metódy zahŕňajú hodnotenie hrúbky, pevnosti v ťahu, elongácie, reziduálnej vlhkosti, in vitro 'swelling' parametru a podisolučnej integrity lipozómov. Zvolený polymér (hydroxypropyl methylcelulóza) preukázala optimálne vlastnosti v koncentrácii 10 % v kombinácii s polyethylenglykolom (5 %) ako plasticizérom. Použitá koncentrácia lipozómov bola 2 %. Vyvinutá metóda prípravy vykazovala uspokojivú reprodukovateľnosť s priestorom pre optimalizáciu v oblasti homogenizácie. Výber solventu (H2O vs. PBS) preukázal silný vplyv na mechanické vlastnosti formulácie vedúce k značnej strate elasticity a mukoadhezívnej sily. Prídavok lipozómov v tretej fáze bol úspešný. Následná disolúcia mala len mierny vplyv na ich integritu.
|
|
|
Enantiomeric separation of drugs and their metabolites II
Verešpejová, Natália ; Nobilis, Milan (vedoucí práce) ; Mokrý, Milan (oponent)
Tramadol je centrálne pôsobiace opioidné analgetikum, ktoré je v pečeni pomocou enzýmu CYP2D6 premenené na účinnú látku O-demetyltramadol, zodpovednú za vznik opioidnej analgézie. V terapii je užívaný ako racemát. Chovanie každého enantioméru je odlišné: (-)-tramadol inhibuje spätné vychytávanie noradrenalínu a (+)-tramadol, ktorý je terapeutický účinnejší inhibuje spätné vychytávanie serotonínu. Je indikovaný k liečbe slabej, až stredne silnej bolesti. Táto práca sa zaoberá možnosťami stanovenia liečiva tramadol a jeho hlavného metabolitu v plazme pomocou chromatografických metód, ktoré v súčasnosti patria medzi moderné a progresívne separačné metódy. S využitím chirálnej HPLC analýzy s rôznymi typmi detekcie bolo liečivo stanovené s vysokou citlivosťou a selektivitou. Jednotlivé publikácie poskytujú farmakokinetické dáta tramadolu a jeho metabolitu po orálnom podaní jednorazovej dávky liečiva zdravým dobrovoľníkom. Stanovenia sa líšia chromatografickými podmienkami, spôsobom úpravy vzoriek, použitými chemikáliami a hlavne celkovým časom analýzy. Výsledky sú uvedené a porovnané v súhrnnej tabuľke.
|
|
|
Analytical evaluation of drugs using HPLC IV.
Mojšová, Kristína ; Mokrý, Milan (vedoucí práce) ; Nobilis, Milan (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmaceutické chemie a farmaceutické analýzy Kandidát: Kristína Mojšová Školiteľ: RNDr. Milan Mokrý, CSc. Názov diplomovej práce: Analytické hodnotenie liečiv s využitím HPLC IV. Táto práca sa zaoberá vývojom vhodnej metódy pre analýzu ketoprofénu pomocou vysokoúčinnej kvapalinovej chromatografie. Ako stacionárna fáza bola použitá kolóna LiChro CART® 125-4 Lichrospher® 100 RP-18 (5 μm), mobilná fáza obsahovala zmes metanolu a roztoku KH2PO4 (pH 3,4) v pomere 60:40 (v/v). Prietoková rýchlosť bola 1 ml/min, teplota kolóny 25 řC a látky boli detegované pri vlnovej dĺžke 254 nm. Za týchto podmienok bol výsledný retenčný čas ketoprofénu 7,9 minút. Pre kvantitatívne hodnotenie bol ako vhodný vnútorný štandard zvolený benetazon. V ďalšej časti práce boli hľadané podmienky pre chirálnu separáciu analyzovaného liečiva za použitia normálneho ako aj reverzného módu. Pre analýzu ketoprofénu bola zvolená kolóna Chiralcel OD-R, 250 x 4,6 mm od firmy Daicel Chemical industries a mobilná fáza heptán : 2-propanol v pomere 97:3 s prídavkom 0,6 ml kyseliny mravčej. Pri prietoku 0,7 ml/min boli získané retenčné časy okolo 20 minút. Na záver bola vykonaná extrakcia ketoprofénu z ľudskej plazmy, pre ktorú bola vybraná metóda extrakcie v systéme...
|
|
|
Optimalizace chromatografických podmínek pro chirální separaci biologicky aktivních látek.
Novák, Martin ; Kučera, Radim (vedoucí práce) ; Nobilis, Milan (oponent)
Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra: Farmaceutické chemie a farmaceutické analýzy Student: Bc. Martin Novák Školitel: doc. PharmDr. Radim Kučera, Ph.D. Konzultant Mgr. et Mgr. Rafael Doležal, Ph.D. Název diplomové práce: Optimalizace chromatografických podmínek pro chirální separaci biologicky aktivních látek Diplomová práce se zaměřuje na vývoj HPLC - UV metody pro stanovení enantiomerů látky K 1277 se strukturním vzorcem N - (2 - ((6 - chlor - 1,2,3,4 - tetrahydroakridin - 9 - yl) amino) hexyl - 2 - amino - 3 - (1H - indol - 3 - yl) propylamid dihydro - chlorid, která je vybraným zástupcem ze skupiny hybridních sloučenin takrinu a tryprofanu. Hybridy syntetizované z molekul takrinu a tryptofanu je možné zařadit mezi velmi slibné kandidáty potenciálních léčiv působících v terapii Alzheimerovy choroby. V teoretické části práce přináší seznámení se základní charakteristikou chirality molekul, možnostmi a principy chirálních separačních metod, patofyziologií a klinickými projevy Alzheimerovy nemoci, možnostmi léčby Alzheimerovy nemoci a se stručnou charakteristikou hybridních sloučenin takrinu a tryptofanu. Cílem diplomové práce je nalezení vhodné metody separace enantiomerů vznikajících syntézou z takrinového skeletu a tryptofanové části. Experimentální část práce se...
|
|
|
Moderní separační techniky pro analýzu biologického materiálu v klinickém výzkumu
Kasalová, Eva ; Solich, Petr (vedoucí práce) ; Nobilis, Milan (oponent) ; Friedecký, David (oponent)
Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Mgr. Eva Kasalová Školitel: prof. RNDr. Petr Solich, CSc. Školitel specialista: doc. RNDr. Dagmar Solichová, Ph.D. Název disertačni práce: Moderní separační techniky pro analýzu biologického materiálu v klinickém výzkumu Předkládaná disertační práce se zabývá vývojem chromatografického stanovení lipofilních vitaminů a úpravou vzorku biologického materiálu před vlastní analýzou. Klinické monitorování hladin těchto vitaminů, zvláště pak vitaminu D, v různých biologických matricích je v posledním desetiletí velmi diskutovaným tématem. V teoretické části této disertační práce jsou charakterizovány cílové analyty - vitaminy A, E, D s jejich biologickou aktivitou - dále pak biologický materiál používaný ve Výzkumné laboratoři, zvláště pak podrobný popis složení mateřského mléka, jeho nezastupitelná role ve výživě novorozenců a zpracování mateřského mléka v mléčné bance. Na tuto část navazuje obsáhlá kapitola věnující se úpravě biologické matrice před analýzou. Jsou zde popsány nejčastěji používané techniky úpravy vzorku, jako jsou extrakční metody, velká pozornost je věnována novým trendům v těchto metodách, které se rozvíjejí v posledních letech. Teoretickou část uzavírá problematika analytického stanovení...
|
|
|
Achirální a chirální vysokoúčinná kapalinová chromatografie léčiv a jejich metabolitů III.
Horáček, Ondřej ; Nobilis, Milan (vedoucí práce) ; Mokrý, Milan (oponent)
Nabumeton je nesteroidní protizánětlivé proléčivo, které je v játrech přeměněno na účinnou látku kyselinu (6-methoxynaftalen-2-yl)octovou. Rozdíl biotransformace nabumetonu in vitro na potkaních a lidských cytosolárních a mikrosomálních frakcích byl studováno již dříve. Studium stereospecificity enzymů a výpočet enantiomerních poměrů vzniklých chirálních metabolitů, je stejně důležitou charakteristikou enzymu jako je Michaelisova konstanta. Výpočet enantiomerních poměrů metabolitů vzniklých z prochirálních léčiv v in vitro systémech se následně používá k identifikaci nových enzymů zodpovědných za biotransformaci daného prochirálního léčiva. Tato práce se zabývá optimalizací separačních a detekčních podmínek pro achirální a chirální LLE-HPLC-PDA analýzu nabumetonu a jeho šesti metabolitů v extraktech z různých biomatric (lidské jaterní mikrosomální a cytosolární frakce a miniprasečí krevní plasmy). S využitím chirální LLE-HPLC-PDA analýzy byly studovány rozdíly v biotransformaci nabumetonu a racemické směsi 3-HO-nabumetonu mezi mužem a ženou v in vitro podmínkách v extraktech pocházejících z jaterních cytosolárních a mikrosomálních frakcí. Pomocí achirální LLE-HPLC-PDA analýzy byla studována farmakokinetika 6-MNA v krevní plasmě miniprasete po enterálním podání 1 g nabumetonu do miniprasečího...
|
host ::
RSS.