|
|
Optimalizace metody pro stanovení anorganických iontů za využití kapilární elektroforézy
Špačková, Simona ; Bezděková, Jaroslava (oponent) ; Vaculovičová, Markéta (vedoucí práce)
Anorganické ionty jsou jednou z nejdůležitějších skupin chemických látek. Jejich význam je klíčový pro všechny živé organismy na planetě a monitorování jejich obsahu se uplatňuje jak v klinické nebo environmentální analýze ale také v potravinářství, zemědělství nebo řadě dalších průmyslových odvětví. Postupem let bylo navrženo a použito mnoho analytických metod pro detekci iontů v závislosti na oblasti jejich využití. V poslední době dochází k adaptaci některých metod i do oblastí, ve kterých nebyly primárně zamyšleny. Jednou z takových metod může být například laserová ablace s hmotnostní spektrometrií indukčně vázaného plazmatu, která se v nedávné době začala využívat pro analýzu biologických vzorků. Jako doplňkovou metodu schopnou detekovat i nekovové ionty je možné s výhodou využít kapilární elektroforézu. V této diplomové práci byla testována možnost aplikace kapilární elektroforézy s nepřímou fotometrickou detekcí pro separaci anorganických iontů v buněčných lyzátech HeLa buněk kapilární elektroforézou. Pozornost byla zaměřena na chloridové ionty. Byla ověřena schopnost separace anorganických iontů v buněčném materiálu při použití kyseliny salicylové jako absorbujícího aniontu v základním elektrolytu.
|
|
|
Využití kapilární elektroforézy pro stanovení vybrané skupiny flavonoidů
Tran Xuan, Tiep ; Mravcová, Ludmila (oponent) ; Řezáčová, Veronika (vedoucí práce)
V posledních letech se znovu dostalo do popředí zájmu široké veřejnosti užívání přírodních léčivých vlastností rostlin. Tyto léčivé rostliny se pro své terapeutické vlastnosti běžně využívají v alternativních metodách léčby u méně závažných onemocnění. Tato diplomová práce se zabývá stanovováním polyfenolových kyselin v extraktech z aronie, třapatkovky, migrénovníku a pupečníku. Jedním z cílů diplomové práce bylo srovnat množství polyfenolových kyselin v jednotlivých rostlinách s jejich s antioxidačními vlastnostmi. Teoretická část zahrnuje obecné představení flavonoidů, uvedení do problematiky polyfenolových kyselin, představení principů kapilární zónové elektroforézy a souhrn vybraných zahraničních studií pro stanovení flavonoidů. Důležitou kapitolou teoretické části je popis jednotlivých rostlin s vysvětlením jejich možného terapeutického využití. Experimentální část se věnuje procesu optimalizace elektroforetického stanovení vybraných polyfenolových kyselin a vyhodnocení jejich obsahu. Bylo zjištěno, že v extraktech se šest zástupců polyfenolových kyselin vyskytuje v minimálních množství, často pod limitem kvantifikace či detekce metody.
|
|
|
Elektroforetické stanovení sacharidů v nektaru z květů
Hurychová, Nikola ; Křížek, Tomáš (vedoucí práce) ; Sobotníková, Jana (oponent)
Tato práce se zabývá vývojem a základní validací metody stanovení obsahu sacharózy, glukózy a fruktózy v nektaru z květů. Využívá metodu kapilární elektroforézy s bezkontaktní vodivostní detekcí. V teoretické části jsou obecně popsány funkce sacharidů v nektaru, princip kapilární elektroforézy a bezkontaktní vodivostní detekce. Je zde i stručný přehled konkrétních aplikací při stanovování sacharidů. Při experimentální části bylo nejprve otestováno dávkování na dlouhém a na krátkém konci kapiláry. Při dalších experimentech byl optimalizován základní elektrolyt, kde byly vyzkoušeny koncentrace NaOH 10 až 50 mmol l-1 . Optimální podmínky pro experimenty bylo dávkování na kratším konci kapiláry, 40mmol l-1 NaOH jako základní elektrolyt a separační napětí 15 kV. Poté byla ověřena opakovatelnost, mez detekce a stanovitelnosti a také výtěžnost metody s reálným vzorkem nektaru. Jako vnitřní standard byla použita laktóza o koncentraci 0,2 mg ml-1 . Relativní směrodatná odchylka stanovení byla pod 2 %. Hodnoty meze detekce byly pod 0,003 mg ml-1 a hodnoty stanovitelnosti byly pod 0,009 mg ml-1 . Výtěžnost metody byla 97-105 %. Dále byla proměřena kalibrace, ze které byl stanoven obsah jednotlivých sacharidů ve vzorku. Původní vzorek obsahoval 1,204 ± 0,011 mg (n = 3, 0,1 %) sacharózy, 0,341 ± 0,009 mg (n =...
|
|
|
Elektroforetické stanovení tantalu v recyklátech chladicích kapalin
Gogulin, Semen ; Křížek, Tomáš (vedoucí práce) ; Coufal, Pavel (oponent)
Práce se věnuje vývoji elektroforetických metod stanovení tantalu v recyklátech chladicích kapalin používaných ve výrobě tantalových kondenzátorů, a zároveň separace tantalu od chemicky podobného niobu. Při vývoji metod bylo využito tvorby záporně nabitých komplexů tantalu a niobu s řadou ligandů přidávaných do separačního elektrolytu, zejména vinné a citronové kyseliny a 4-(2-pyridylazo)resorcinolu. Separace byly prováděny v křemenné kapiláře o vnitřním průměru 50 µm a efektivní délce 36,5 cm, na kapiláru bylo vkládáno záporné separační napětí -25 kV. Při použití separačního elektrolytu obsahujícího vinnou a citronovou kyselinu o koncentraci 0,1 mol·l-1 při hodnotě pH = 2 bylo dosaženo separace niobu a tantalu během méně než 3 min; absorpční spektrometrická detekce byla přitom prováděna v ultrafialové oblasti při vlnové délce 200 nm, stanovená mez detekce měla hodnotu 2,8 ppm tantalu, a mez stanovitelnosti 9,2 ppm tantalu. Přídavek 4-(2-pyridylazo)resorcinolu umožnil snížení meze detekce na 0,8 ppm tantalu a meze stanovitelnosti na 2,6 ppm tantalu, základní elektrolyt přitom obsahoval 0,1 mmol·l-1 4-(2-pyridylazo)resorcinolu, 10 mmol·l-1 vinné a 10 mmol·l-1 citronové kyseliny a 25 mmol·l-1 amoniaku pro ustavení hodnoty pH v rozmezí 6 až 7 jednotek; za těchto podmínek trvala separace niobu a...
|
|
|
Determination of proteinogenic amino acids by high-performance separation techniques
Hodek, Ondřej
(CZ) Proteinogenní aminokyseliny patří mezi základní stavební jednotky živých organismů. Proto byl v poslední době výzkum v metabolomice zaměřen na vývoj rychlých a citlivých analytických metod pro stanovení aminokyselin. Tato práce obsahuje dvě studie popisující vývoj vysoce účinných separačních metod pro kvantifikaci aminokyselin. V první studii byla vyvinuta metoda kapilární elektroforézy pro stanovení aminokyselin v rostlinách tabáku. Nedílnou součástí této studie byla optimalizace extrakce aminokyselin z rostlinného materiálu. Extrakce byla optimalizována postupem "design of experiments" (DoE), pomocí kterého byly vyhodnoceny faktory ovlivňující výtěžek extrakce aminokyselin. Nejdůležitějšími faktory byly objem a koncentrace extrakčního činidla (kyselina chlorovodíková), jejichž optimální hodnoty byly určeny pomocí "response surface methodology" (RSM). Poté byly aminokyseliny separovány pomocí kapilární elektroforézy s bezkontaktní vodivostní detekcí a stanoveny za použití kalibrace s vnitřním standardem, což přispělo ke zlepšení přesnosti metody. Druhá studie byla zaměřena na vývoj metody pro stanovení aminokyselin v lidské plasmě pomocí superkritické fluidní chromatografie. Jedním z cílů této studie bylo zvýšit rozpustnost aminokyselin v mobilní fázi bohaté na CO2. Nejdříve byla zvýšena...
|
|
|
Stanovení vybraných komponent v lidské moči elektroforézou v krátké kapiláře.
Makrlíková, Anna
Kapilární zónová elektroforéza má široké uplatnění v různých analýzách. V této práci byl navržen hydrodynamický způsob zavedení vzorku do krátké elektroforetické kapiláry řízený tlakovým pulsem. Separační pufr promývá dávkovací smyčku šesticestného ventilu a zóna vzorku je nesena k dávkovacímu konci kapiláry. V čase, kdy se zóna vzorku nachází u vstupu do kapiláry, je v toku elektrolytu generován krátký tlakový puls, což vede k nadávkování vzorku do kapiláry. Následně je tok elektrolytu zastaven a současně je zapnuto separační napětí. Množství nadávkovaného vzorku je závislé na době trvání tlakového pulsu. Tato nově vyvinutá metoda byla testována pro stanovení amonných iontů, histidinu, kreatininu, kyseliny močové a kyseliny hippurové v lidské moči a pro rychlé sledování anorganických iontů v mozkomíšním moku a krevní plazmě. Stanovení bylo provedeno v kapiláře o celkové délce 10,5 cm a vyzkoušeny byly dva separační elektrolyty - 50 mM MES + 5 mM NaOH (pH 5,10) a 1 M kyselina octová + 1,5 mM crown ether 18-crown-6 (pH 2,40). Použitím duální detekce, bezkontaktní vodivostní a spektrometrické UV detekce, bylo možno současně detegovat anorganické i organické látky ve vzorku. Klíčová slova Kapilární elektroforéza, krátká kapilára, hydrodynamické dávkování, duální detekce, amonné ionty, histidin,...
|
|
|
Využití vysokoúčinných separačních metod pro chirální i achirální separace
Šubová, Martina
V první části disertační práce byla na sadě analytů pomocí kapilární elektroforézy otestována schopnost chirální separace nejprve dvou permanentně kladně nabitých cyklodextrinových derivátů, a to PEMEDA- a PEMPDA-β-cyklodextrinu. Výborné enantioseparační vlastnosti vykazovaly oba selektory v přítomnosti N-boc-D,L-tryptofanu, u kterého docházelo k úplnému oddělení enantiomerů již při 0,5 mmol·l-1 koncentraci cyklodextrinového derivátu v základním elektrolytu. Rozdíly mezi enantiodiskriminačními vlastnostmi jednotlivých derivátů však byly minimální. Druhou testovanou skupinu tvořily dva deriváty cyklodextrinu, a to 2-O- a 3-O-cinnamyl- α-cyklodextrin. Tyto deriváty jsou schopné tvořit supramolekulární polymery ve vodných roztocích, které se při zvýšené teplotě rozpadají. Tvorba těchto polymerů byla otestována pomocí NMR a DLS experimentů. Při testování chirálních separační schopností na skupině vybraných analytů ani jeden z uvedených cyklodextrinových derivátů nevykazoval enantiodiskriminační vlastnosti. V rámci antipredační studie byla pro separaci deseti derivátů pterinu a riboflavinu, které se mohou ve formě pigmentů vyskytovat u hmyzu, plazů nebo obojživelníků jako součást jejich výstražného zbarvení, použita HPLC-MS/MS metoda pracující v HILIC módu. Vyvinutá metodika byla aplikována při analýze...
|
|
| |
|
|
Elektroforetické stanovení rivaroxabanu
Petrák, Ondřej ; Křížek, Tomáš (vedoucí práce) ; Kubíčková, Anna (oponent)
Kapilární elektroforéza je metoda používaná ve farmaceutické analýze z důvodu nízkých nákladů, rychlosti a šetrnosti k životnímu prostředí. Tato diplomová práce se zabývá vývojem elektroforetické metody pro stanovení rivaroxabanu. V rámci řešení této práce byla po několika optimalizacích vyvinuta metoda vhodná pro stanovení lékových forem rivaroxabanu. Optimalizace zahrnovaly změnu složení základního elektrolytu, který byl z vodného roztoku nízkomolekulárních organických kyselin změněn v několika krocích až na nevodný roztok kyseliny octové a cetyltrimethylamoniumbromidu v acetonitrilu. Konečné podmínky zahrnovaly základní elektrolyt složený z 1M kyseliny octové a 40 mM cetyltrimethylamoniumbromid v acetonitrilu, hydrodynamické dávkování vzorku tlakem 5,0 kPa po dobu 3,0 s a následné vložení separační napětí 30,0 kV po celou dobu analýzy. Obsah kapiláry byl po celou dobu analýzy mobilizován tlakem 0,50 kPa. Tím byla získána selektivní metoda pro stanovení lékových forem rivaroxabanu s mezí detekce 0,0056 mg/ml a mezí stanovitelnosti 0,019 mg/ml, která byla lineární v rozmezí koncentrací rivaroxabanu 0,01 - 0,40 mg/ml s výtěžností 92,3 %. Klíčová slova kapilární elektroforéza, farmaceutická analýza
|
|
|
Sledování enzymové aktivity myrosinasy pomocí kapilární elektroforézy v off-line a on-line uspořádání
Orgoníková, Andrea ; Křížek, Tomáš (vedoucí práce) ; Kubíčková, Anna (oponent)
3 Abstrakt Glukosinoláty jsou sekundární produkty rostlin, které jsou hydrolyzovány enzymem myrosinasou, za vzniku toxických produktů, jako jsou například isothiokyanatany. Tyto produkty degradace se podílejí na obraně rostliny proti vnějším patogenům. Tato bakalářská práce se zabývá sledováním enzymové aktivity myrosinasy pomocí kapilární elektroforézy. Jako substrát enzymové reakce byl zvolen 3-indolylmethylglukosinolát známý pod triviálním názvem glukobrassicin. V rámci experimentů byla vyzkoušena enzymová reakce jak v off-line, tak i on-line uspořádání kapilární elektroforézy. Jako základní elektrolyt byl použit roztok obsahující 9 mM tetraboritan sodný, 15 mM kyselinu fosforečnou a 10 mM hexadecyltrimethylammonium chlorid (pH = 7,02). Vzorek byl dávkován hydrodynamicky tlakem (5 kPa, 3 s). Na kapiláru bylo vkládané napětí -20 kV a roztok v kapiláře byl zároveň mobilizován tlakem 5 kPa. Optimalizovaná metoda byla vyhodnocena změřením kalibrační závislosti, meze detekce, meze stanovitelnosti, opakovatelnosti měření pro dávkování glukobrassicinu v off-line i on-line uspořádání a opakovatelnosti on-line enzymové reakce. Hodnota meze detekce byla stanovena na 0,011 mg ml-1 a hodnota meze stanovitelnosti na 0,035 mg ml-1 . V off-line i on-line uspořádání byly relativní směrodatné odchylky pro plochy píků...
|
host ::
RSS.