|
|
Large Extracellular Vesicles in Cell Culture and Blood: Role in Prion Transmission and Detection by Flow Cytometry
Soukup, Jakub ; Holada, Karel (vedoucí práce) ; Šebestová Janoušková, Olga (oponent) ; Živný, Jan (oponent)
Priony (PrP) jsou hlavní příčinou neurodegenerativních onemocnění jako je ovčí klusavka, bovinní spongiformní encefalopatie, chronické strádání jelenovité zvěře a lidská Creutzdfeld- Jacobova choroba. Přestože se buněčný PrP (PrPC ) účastní mnoha buněčných procesů, jeho přesná funkce není dosud známá. Onemocnění vzniká akumulací patologické formy PrP (PrPTSE ), která vzniká přímým kontaktem PrPTSE a PrPC . PrP je ukotvený v membráně pomocní GPI a může být přenášen mezi buňkami kontaktem, tzv. "tunnelling nanotubes" nebo extracelulárními vezikuly (EV). Frakce EV se dělí na exosomy, mikrovezikuly a apoptotická tělíska rozdílnou biogenezí. PrPTSE se nachází v exosomech a mikrovezikulech, ale tyto frakce EV nikdy nebyly mezi sebou porovnány. Prvním cílem dizertační práce je porovnat obsah PrP, prion konvertující aktivitu a infektivitu v těchto frakcích EV na CAD5 a N2a-PK1 buněčných modelech infekce. Centrifugací jsme izolovali frakci velkých EV (20 000× g) a malých EV (110 000× g) z kondiciovaného média. EV jsme charakterizovali pomocí kryo-elektronové mikroskopie a western blotem s markery Alix, TSG-101, CD63, CD9 a HSP70. Kontaminace z jiných buněčných kompartmentů byla ověřena kalnexinem. Frakce EV se mezi sebou lišili obsahem β-1 integrinu. Malé EV mají sníženou a velké EV mají zvýšenou hladinu...
|
|
|
Diagnostický potenciál extracelulárních vesikulů
Klementová, Helena ; Holada, Karel (vedoucí práce) ; Živný, Jan (oponent)
Extracelulární vesikuly (EV) jsou membránové váčky produkované buňkami. Řada publikovaných prací popisuje změny počtu EV v tělních tekutinách za různých patologických stavů. V naší práci jsme pomocí průtokové cytometrie analyzovali počty EV v periferní krvi pacientů s roztroušenou sklerózou (MS) a v pupečníkové krvi u nedonošených novorozenců se zánětem. Metodu detekce jsme extenzivně optimalizovali a přítomnost EV ve vzorcích ověřili pomocí elektronové mikroskopie. U pacientů s nově diagnostikovanou MS jsme nalezli snížený počet T-lymfocytárních a fosfatidylserin pozitivních EV ve srovnání se zdravými dárci krve. U MS pacientů vyžadujících změnu léčby byl nižší počet B-lymfocytárních EV ve srovnání s neurologickými kontrolami. Podobně byl nižší počet endotelových EV u MS pacientů podstupujících biologickou léčbu Natalizumabem. V pupečníkové krvi nedonošených novorozenců se zánětem jsme pozorovali signifikantně zvýšené počty placentárních, endoteliálních a destičkových EV oproti nedonošeným novorozencům bez zánětu. Ve srovnání s donošenými kontrolami nebyly změny v počtech EV signifikantní. Počet endoteliálních EV v pupečníkové krvi koreloval s koncentrací IL-6 v žilní krvi novorozenců. Podobně koreloval i počet destičkových a fosfatidylserin pozitivních EV s koncentrací volného hemoglobinu v...
|
|
|
Úloha exosomů u chronické myeloidní leukemie
Březinová, Lenka ; Krijt, Matyáš (vedoucí práce) ; Holada, Karel (oponent)
Exosomy jsou extracelulární váčky o velikosti 30-150 nm, jejichž funkce je u chronické myeloidní leukemie (CML) zkoumaná kvůli jejich vlivu na proliferaci CML buněk, remodelaci kostní dřeně, angiogenezi a rezistenci na léčbu tyrosin-kinázovými inhibitory (TKIs). Ačkoliv byly vyvinuty účinné TKIs inhibující BCR-ABL kinázu, přesto zůstává 20-30 % pacientů na léčbu rezistentní. Rezistence CML buněk na léčbu je podporována exosomy. Exosomy přenášejí proteiny, nukleové kyseliny, chemokiny i malé molekuly, které podporují antiapoptotické, respektive tlumí proapoptotické procesy. Antiapoptotické procesy jsou podporovány zejména zvýšenými hladinami proteinů: TGF-β1, USP6 a FGF2 a různorodých zástupců RNA: miR-365, miR-21, Hsa_circ_0058493 a mRNA pro BCR-ABL. Snaha leukemických buněk je naopak snížit množství proapoptotických molekul, mezi které patří miR-320, miR-328 a miR-146a-5p. Leukemické buňky prostřednictvím exosomů modifikují mikroprostředí kostní dřeně tak, aby je podporovalo, a dále ovlivňují expresi adhezních a proangiogenních molekul. Důležitou roli v těchto procesech hrají miR-126, miR-210 a miR-92a. Vzhledem k variabilitě přenášených molekul není překvapující množství procesů ovlivněných CML exosomy ani jejich potenciální využití v léčbě CML, jak již bylo dokázáno v případě využití...
|
|
|
Prvky farmacie jako inspirace pro výuku chemie
Zachariášová, Miroslava ; Holada, Karel (vedoucí práce) ; Liška, František (oponent)
SOUHRN A KLÍČOVÁ SLOVA Rigorózní práce je věnována školním chemickým experimentům, které jsou inspirovány farmacií. Hlavním výstupem práce je kartotéka návodů pro pokusy, které jsou využitelné ve výuce chemie na středních a vyšších školách, případně v zájmovém školství, a které jsou úzce svázány s různými odvětvími farmacie, využívají farmaceutické suroviny, výrobní postupy či technologie. V úvodu práce je pojednáno o současném pojetí výuky chemie v rámcových vzdělávacích programech, o metodách a formách výuky chemie a o specifické metodě výuky chemie, kterou je školní chemický experiment. V další části práce jsou popsány literární i jiné zdroje, ze kterých byly náměty čerpány a jsou zde uvedeny kontakty na firmy, kde se dají zakoupit farmaceutické suroviny. Stručně je shrnuta problematika bezpečné práce s chemickými látkami ve vztahu k výuce ve škole. Klíčová slova: pokus; chemie; farmacie; chemické látky; farmaceutické suroviny; bezpečnost práce; inspirace; motivace; metody a formy výuky; lék, léčivo
|
|
|
Ekochemické hry
Čermáková, Jana ; Holada, Karel (vedoucí práce) ; Pumpr, Václav (oponent)
Diplomová práce se zabývá možnostmi využití hry při výuce ekochemie na základní škole. V práci je popsána metoda hry obecně, následuje její začlenění do systému kurikulárních dokumentů a konkrétní návrh realizace některých ekochemických témat prostřednictvím hry. V experimentální části práce je předložen zpracovaný souhrn, přehled edukačních her s ekochemickou tematikou. Ten může sloužit jako inspirace pro vyučující při volbě aktivit do hodin nejen chemie. Efektivita hry byla zjištěna a ověřena provedeným šetřením, jehož výsledky potvrdily hypotézu, že prostřednictvím her lze dosáhnout lepších a trvalejších výsledků v oblasti výuky ekochemie.
|
|
|
Chemické reakce a světelná energie
Sečková, Jana ; Holada, Karel (vedoucí práce) ; Liška, František (oponent)
Práce je zaměřena na specifické činnosti učitele a jeho žáků. Jsou zde shrnuty fyzikálně-chemické aspekty chemických reakcí a světelné energie a uvedeny návrhy pro zařazení tohoto tématu do výuky na základních školách, gymnáziích a středních odborných školách. V praktické části pedagogické je vypracována didaktická transformace učiva, terminologický slovníček základních pojmů z popisované tematiky a školní projekt zaměřený na luminiscenci. Praktická část chemická obsahuje 20 efektních pokusů učitele, žáků a žáků s učitelem. Pokusy jsou seřazeny v přehledné kartotéce, vybrané pokusy byly vyzkoušeny. V této části je návrh pořadu o luminiscenci. Součástí obrazové části jsou vlastní fotografie zhotovené při práci v laboratoři.
|
|
|
Chemie Verneovek
Deutschová, Olga ; Holada, Karel (vedoucí práce) ; Hally, Jan (oponent)
V současné době je stále obtížnější upoutat pozornost žáků během výuky a vybavit je do života širokým vzdělanostním základem a žádoucími klíčovými kompetencemi, které jsou dnes stavěny do popředí. Proto bych zde ráda nabídla učitelům chemie možný způsob, jakým lze žáky seznámit s učivem. Snažím se nabídnout zcela konkrétní činnosti a zároveň nechávám učitelům volnou ruku v uplatnění a rozvíjení dále uvedených témat (viz tabulka č. 1). Vycházím z toho, že schopnosti, které si žáci osvojí během vyučování, by měly být založeny na jejich znalostech, zkušenostech a hodnotách. Tato diplomová práce nabízí řadu možností, jak lze uchopit výuku chemie a zábavnou formou žákům předat důležité poznatky z tohoto oboru, motivovat je dalšímu studiu a samostatné činnosti. Četba a téma diplomové práce má význam pro mediální výchovu a možnost rozvíjet u žáků klíčové kompetence v rámci RVP a ŠVP. Právě dnes je aktuální dbát důraz na rozvíjení klíčových kompetencí u žáků ZŠ a SŠ. Tato diplomová práce obsahuje řadu konkrétních činností, kterými se učitel může zaměřit na jednotlivé kompetence. Rozhodně sem patří kompetence učení, řešení problémů, komunikativní, kompetence pracovní a sociální kompetence. Zájemci o níže uvedenou problematiku se naučí řešit samostatně běžné pracovní i mimopracovní problémy, využívat prostředky...
|
|
|
Pokusy (se rtutí), které dělat nebudete
Záhorská, Denisa ; Holada, Karel (vedoucí práce) ; Hally, Jan (oponent)
V úvodu práce jsem si vymezila cíl, který spočíval ve vytvoření záznamu ukazujícího fyzikální a chemické vlastnosti rtuti a jejích sloučenin, a to v konkrétních pokusech s kapkou rtuti. S realizací tohoto nelehkého úkolu mi velmi pomohl pan Doc. RNDr. K. Holada,CSc. Podstata mé práce spočívala v pokusech s minimálním množstvím rtuti - tzn. semimikro a mikro provedení. Je paradoxem, že zákon o chemických látkách a chemických přípravcích zakazuje nakládání s jakýmkoliv množstvím rtuti a přitom provádění pokusů v rámci této práce v již shora uvedeném množství, je v případě demonstračních pokusů prováděných učitelem v podstatě neškodné. Powered by TCPDF (www.tcpdf.org)
|
|
|
Dětské hry a hračky jako pomůcky ve výuce chemie
Dubská, Martina ; Holada, Karel (vedoucí práce) ; Liška, František (oponent)
Diplomová práce je věnována studiu jedné z aktivizačních metod - hře. Při hře se žáci aktivně zapojují, jsou motivováni, jsou kreativní. Hlavním cílem práce je prozkoumání výhod, které přináší zavedení herních aktivit do výuky chemie, dále celková problematika herních činností, podmínky pro tyto činnosti ve výuce chemie a návrhy k jejich realizaci ve výuce. Součástí práce je soubor 11 konkrétních her a hraček, které jsou zpracovány pro výuku chemie na 2. stupni základních škol, středních a výjimečně vysokých škol. Tento soubor obsahuje pravidla, metodické pokyny, časovou dotaci a vše potřebné pro zařazení her do vyučování. V praktické části také nalezneme seznam mnoha již publikovaných i nepublikovaných her a hraček, které mohou sloužit jako inspirace pro učitele chemie. Šetření provedená na dvou základních školách potvrdila domněnku, že studijní výsledky dosažené pomocí herních aktivit, jsou uspokojivější než výsledky, při níž herní činnosti použity nebyly.
|
|
|
Apoptosis Signating Pathways and Biological Effects of TGFB
Šimáková, Olga ; Fuchs, Ota (vedoucí práce) ; Brdička, Radim (oponent) ; Holada, Karel (oponent)
Apoptosis is necessary for maintaing the integrity of all alive multicellular organisms and therefore needs to be precisely regulated. Very important regulators of apoptosis are pleiotropic cytokines from TFGβ superfamily (e.g. TGFβ, BMP, aktivins), whose signals are transduced by SMAD proteins. Patients with secondary myelodysplasias and acute myeloid leukemias (MDS/AML) frequently exhibit interstitial deletions of the chromosome-5q resulting in hemizygous loss of the transcription transactivator SMAD5. SMAD5 is a member of the signal transducer family conveying the pleiotropic TGFβ/BMP cytokine signals with roles in development, cell growth control, and tumor progression. Consistent Smad5 gene expression in these cell types and the gradual increase in its mRNA and protein levels in a model of induced erythroid differentiation of murine erythroleukemia (MEL) cells suggest a role of the gene in hematopoiesis. We show that bone morphogenetic protein 4 (BMP4) directs Smad5 activation in human hematopoietic cells, as monitored at the levels of protein phosphorylation, nuclear translocation, and specific transcription response. In vitro induction of normal human CD34+ cells by BMP4 results in significantly increased proliferation of erythroid progenitors (BFU-E) and formation of glycophorin- A+ cells, whereas...
|
host ::
RSS.