|
|
Identification and functional characterization of C/EBPalpha targets in normal and malignant hematopoiesis
Zjablovskaja, Polina ; Alberich Jorda, Meritxell (vedoucí práce) ; Stopka, Tomáš (oponent) ; Fuchs, Ota (oponent)
Hematopoetickýsystémpředstavujevysoceorganizovanoustrukturu,kterákesvému správnémufungovánívyžadujepřesnouregulaci.Aberantnívývojkrevníchbuněkmůževést khematologickýmporuchám,jakojenapř.akutní myeloidníleukémie(AML).Správné fungování hematopoetickéhosystémuzávisízvelkéčásti natranskripčníchfaktorech. TranskripčnífaktorC/EBPjeznámjakojedenzhlavníchregulátorůkrvetvorbyajenezbytný profunkčnosthematopoetickýchkmenovýchbuněkavývojbuněkmyeloidnílinie.Významná jetakéskutečnost,žezměnyexpreseC/EBP bylydetekoványuvelkéčástipřípadůAML. C/EBPregulujekrvetvorbuzejménaprostřednictvímregulaceexpresesvýchcílovýchgenů. Byloprokázáno,žeřadatěchtogenůsenasystémukrvetvorbypodílíahrajerolipřileukemické transformaci.IdentifikacenovýchcílovýchgenůC/EBPajejichfunkčnícharakterizacesetak stávázajímavýmpředmětemvýzkumu.Vtétoprácijsmeidentifikovalisouborgenů,jejichž expresejenaaktivitěC/EBPzávislá,tzv."signaturu"C/EBP.Prokázalijsme,žeinhibitory histon-deacetyláz(HDAC)obnovujíexpresitěchtogenůvbuňkáchsnefunkčnímC/EBPa indukujímyeloidnídiferenciacivevzorcíchAMLsbialelickýmimutacemiCEBPA,kterése vyznačujísníženouexpresísignaturyC/EBP.Výzkumzaměřenýnajedenkonkrétnícílový gen C/EBP,EVI2B,dáleprokázal,žeproteinkódovanýtímtogenemjenezbytnýkesprávné...
|
|
|
Apoptosis Signating Pathways and Biological Effects of TGFB
Šimáková, Olga ; Fuchs, Ota (vedoucí práce) ; Brdička, Radim (oponent) ; Holada, Karel (oponent)
Apoptosis is necessary for maintaing the integrity of all alive multicellular organisms and therefore needs to be precisely regulated. Very important regulators of apoptosis are pleiotropic cytokines from TFGβ superfamily (e.g. TGFβ, BMP, aktivins), whose signals are transduced by SMAD proteins. Patients with secondary myelodysplasias and acute myeloid leukemias (MDS/AML) frequently exhibit interstitial deletions of the chromosome-5q resulting in hemizygous loss of the transcription transactivator SMAD5. SMAD5 is a member of the signal transducer family conveying the pleiotropic TGFβ/BMP cytokine signals with roles in development, cell growth control, and tumor progression. Consistent Smad5 gene expression in these cell types and the gradual increase in its mRNA and protein levels in a model of induced erythroid differentiation of murine erythroleukemia (MEL) cells suggest a role of the gene in hematopoiesis. We show that bone morphogenetic protein 4 (BMP4) directs Smad5 activation in human hematopoietic cells, as monitored at the levels of protein phosphorylation, nuclear translocation, and specific transcription response. In vitro induction of normal human CD34+ cells by BMP4 results in significantly increased proliferation of erythroid progenitors (BFU-E) and formation of glycophorin- A+ cells, whereas...
|
|
|
The role of cereblon in lenalidomide therapy of del(5q) myelodysplastic syndrome
Bokorová, Radka ; Fuchs, Ota (vedoucí práce) ; Lukačková, Renata (oponent) ; Krijt, Jan (oponent)
Myelodysplastický syndrom (MDS) s delecí dlouhého raménka chromozomu 5 (5q syndrom, del(5q)) může být charakterizován anémií, makrocytózou, normálnímim nebo zvýšeným počtem krevních destiček a hypolobulovanými kostní dřeni. 5q syndrom se řadí mezi nízko rizikové MDS, které ojediněle transformují do akutní myeloidní leukémie (AML). 5q spojen se starším věkem a převládá u žen. Dalším znakem je transfúzní závislost, která je léčená léky stimulujícími erytropoézu (ESA), například erytropoetin (EPO). Navíc, odpověď pacientů je jenom 30 mediánem odpovědi ~24 měsíců. Druhou linií léčby je lenalidomid (LEN), což je derivát teratogenního analogu thalidomid. LEN zvyšuje erytropoézu a inhibuje růst erytroidných progenitorových buněk del(5q) in vivo a nemá signifikantní efekt na růst normálních progenitorových buněk CD34+ nebo cytogeneticky normálních progenitorových buněk u MDS se klony del(5q). LEN je využíván jako léčba u mnohočetného myelomu, myelodysplastického syndromu a lymfomů. LEN je drahý lék a ne u každý MDS pacient odpovídá na terapii. Toto je důvod proč je důležité najít biomarker pro určení úspěšné terapie. Některé studie u mnohočetného myelomu ukazují, že cereblon může být tímto biomarkrem, který je zapotřebí. Cereblon (CRBN) je součástí komplexu E3 ubiguitin ligázy CRL4 obsahující komplexu CRL4 jako...
|
|
|
Úloha TGFß a studium prognostických faktorů u pacientů s MDS a AML
Provazníková, Dana ; Fuchs, Ota (vedoucí práce) ; Pohlreich, Petr (oponent) ; Martásek, Pavel (oponent)
Neprokázali jsme žádnou mutaci v kódujících oblastech genů signální dráhy TGF1, ale zjistili jsme sníženou nebo nedetekovatelnou expresi těchto analyzovaných genů. Snížená exprese je zřejmě způsobena epigenetickými změnami, tedy hypermetylací a deacetylací promotorových oblastí těchto genů. Antiproliferační a apoptotický účinek TGF1 byl testován na liniích AML (ML1, ML2, CTV1 a Kasumi1). Rezistence ML2 buněk k inhibici DNA syntézy pomocí TGFβ1 je způsobena jinými faktory než mutacemi genů signalizační dráhy TGFβ1.Zjistili jsme, že zvýšená exprese genu pro SnoN (Ski-like novel gene) na úrovni mRNA i proteinu je zřejmě důvodem této rezistence. Buňky linie Kasumi1 a ML2 byly citlivé k indukci apoptózy vyvolané působením TGFβ1, ale v menší míře než při působení inhibitoru proteazomu, bortezomibu. Rozdílnost odpovědí AML buněk jednotlivých linií odráží velkou heterogenitu akutní myeloidní leukémie (AML) u pacientů s AML. Analýza prognostických faktorů AML s normálním karyotypem potvrdila, že mutace genu CEBPA (CCAAT/enhancer binding protein alpha) jsou příznivým prognostickým faktorem a naopak zvýšená exprese genů pro EVI1 ("Ecotropic Virus Integration Site 1") a ERG ("ETS- related gene") jsou nepříznivým prognostickým faktorem. EVI1 je také negativním markerem u myelodysplastického syndromu (MDS). Nepotvrdili...
|
|
|
Identification and characterisation of novel mechanisms regulating steady state and emergency granulopoiesis
Daněk, Petr ; Alberich Jorda, Meritxell (vedoucí práce) ; Fuchs, Ota (oponent) ; Balounová, Jana (oponent)
ABSTRAKT Neutrofily jsou nedílnou složkou imunitního systému, zodpovědnou za zneškodnění patogenů, eskalaci zánětlivé reakce a hojení poškozených tkání. Drastické snížení krevních neutrofilů, zvané neutropenie, je život ohrožující patologie spojená s neschopností pacienta čelit běžným infekcím. Neúplná neutrofilní diferenciace zároveň vede ke vzniku fatálních meloidních leukémií. Zvýšený počet či aktivita neutrofilů je naopak zase častou příčinou patologií autoimunitních. Je tedy zřejmé, že množství neutrofilů musí být pro udržení hemostázy a správné funkce imunitního systému přesně regulováno. V rámci této práce jsme prozkoumali tři dosud nepopsané mechanismy, které by mohly neutrofilní diferenciaci regulovat. Prvním z nich je kanonická signální dráha Wnt. Aktivace této dráhy probíhá prostřednictvím interakce -kateninu s transkripčními faktory TCF/LEF. Úlohu této signální dráhy jsme zkoumali s použitím myšího modelu, ve kterém byla transkripce, indukovaná komplexem -kateninu s faktory TCF/LEF, inhibována prostřednictvím dominantně negativní varianty proteinu TCF4 (dnTCF4). S pomocí řady in vitro a in vivo metod jsme zjistili, že -katenin v interakci s faktory TCF/LEF zvyšuje v hematopoetických progenitorech expresi receptoru G-CSF, molekuly, která navozuje diferenciaci myeloidních buněk. Tento...
|
|
|
Identification and functional characterization of C/EBPalpha targets in normal and malignant hematopoiesis
Zjablovskaja, Polina ; Alberich Jorda, Meritxell (vedoucí práce) ; Stopka, Tomáš (oponent) ; Fuchs, Ota (oponent)
Hematopoetickýsystémpředstavujevysoceorganizovanoustrukturu,kterákesvému správnémufungovánívyžadujepřesnouregulaci.Aberantnívývojkrevníchbuněkmůževést khematologickýmporuchám,jakojenapř.akutní myeloidníleukémie(AML).Správné fungování hematopoetickéhosystémuzávisízvelkéčásti natranskripčníchfaktorech. TranskripčnífaktorC/EBPjeznámjakojedenzhlavníchregulátorůkrvetvorbyajenezbytný profunkčnosthematopoetickýchkmenovýchbuněkavývojbuněkmyeloidnílinie.Významná jetakéskutečnost,žezměnyexpreseC/EBP bylydetekoványuvelkéčástipřípadůAML. C/EBPregulujekrvetvorbuzejménaprostřednictvímregulaceexpresesvýchcílovýchgenů. Byloprokázáno,žeřadatěchtogenůsenasystémukrvetvorbypodílíahrajerolipřileukemické transformaci.IdentifikacenovýchcílovýchgenůC/EBPajejichfunkčnícharakterizacesetak stávázajímavýmpředmětemvýzkumu.Vtétoprácijsmeidentifikovalisouborgenů,jejichž expresejenaaktivitěC/EBPzávislá,tzv."signaturu"C/EBP.Prokázalijsme,žeinhibitory histon-deacetyláz(HDAC)obnovujíexpresitěchtogenůvbuňkáchsnefunkčnímC/EBPa indukujímyeloidnídiferenciacivevzorcíchAMLsbialelickýmimutacemiCEBPA,kterése vyznačujísníženouexpresísignaturyC/EBP.Výzkumzaměřenýnajedenkonkrétnícílový gen C/EBP,EVI2B,dáleprokázal,žeproteinkódovanýtímtogenemjenezbytnýkesprávné...
|
|
| |
|
|
Úloha TGFß a studium prognostických faktorů u pacientů s MDS a AML
Provazníková, Dana ; Fuchs, Ota (vedoucí práce) ; Pohlreich, Petr (oponent) ; Martásek, Pavel (oponent)
Neprokázali jsme žádnou mutaci v kódujících oblastech genů signální dráhy TGF1, ale zjistili jsme sníženou nebo nedetekovatelnou expresi těchto analyzovaných genů. Snížená exprese je zřejmě způsobena epigenetickými změnami, tedy hypermetylací a deacetylací promotorových oblastí těchto genů. Antiproliferační a apoptotický účinek TGF1 byl testován na liniích AML (ML1, ML2, CTV1 a Kasumi1). Rezistence ML2 buněk k inhibici DNA syntézy pomocí TGFβ1 je způsobena jinými faktory než mutacemi genů signalizační dráhy TGFβ1.Zjistili jsme, že zvýšená exprese genu pro SnoN (Ski-like novel gene) na úrovni mRNA i proteinu je zřejmě důvodem této rezistence. Buňky linie Kasumi1 a ML2 byly citlivé k indukci apoptózy vyvolané působením TGFβ1, ale v menší míře než při působení inhibitoru proteazomu, bortezomibu. Rozdílnost odpovědí AML buněk jednotlivých linií odráží velkou heterogenitu akutní myeloidní leukémie (AML) u pacientů s AML. Analýza prognostických faktorů AML s normálním karyotypem potvrdila, že mutace genu CEBPA (CCAAT/enhancer binding protein alpha) jsou příznivým prognostickým faktorem a naopak zvýšená exprese genů pro EVI1 ("Ecotropic Virus Integration Site 1") a ERG ("ETS- related gene") jsou nepříznivým prognostickým faktorem. EVI1 je také negativním markerem u myelodysplastického syndromu (MDS). Nepotvrdili...
|
|
|
Apoptosis Signating Pathways and Biological Effects of TGFB
Šimáková, Olga ; Fuchs, Ota (vedoucí práce) ; Brdička, Radim (oponent) ; Holada, Karel (oponent)
Apoptosis is necessary for maintaing the integrity of all alive multicellular organisms and therefore needs to be precisely regulated. Very important regulators of apoptosis are pleiotropic cytokines from TFGβ superfamily (e.g. TGFβ, BMP, aktivins), whose signals are transduced by SMAD proteins. Patients with secondary myelodysplasias and acute myeloid leukemias (MDS/AML) frequently exhibit interstitial deletions of the chromosome-5q resulting in hemizygous loss of the transcription transactivator SMAD5. SMAD5 is a member of the signal transducer family conveying the pleiotropic TGFβ/BMP cytokine signals with roles in development, cell growth control, and tumor progression. Consistent Smad5 gene expression in these cell types and the gradual increase in its mRNA and protein levels in a model of induced erythroid differentiation of murine erythroleukemia (MEL) cells suggest a role of the gene in hematopoiesis. We show that bone morphogenetic protein 4 (BMP4) directs Smad5 activation in human hematopoietic cells, as monitored at the levels of protein phosphorylation, nuclear translocation, and specific transcription response. In vitro induction of normal human CD34+ cells by BMP4 results in significantly increased proliferation of erythroid progenitors (BFU-E) and formation of glycophorin- A+ cells, whereas...
|
|
| |
host ::
RSS.