|
|
Role of disulphide bonds in hA2A subtype adenosine receptor
Zappe, Lukáš ; Matoušková, Petra (vedoucí práce) ; Bárta, Pavel (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická Fakulta v Hradci Králové Katedra Biochemicky věd Kandidát: Lukáš Zappe Vedoucí: Ing. Petra Matoušková Ph.D., PD Dr. Anke C. Schiedel Název diplomové práce: Role disulfidických vazeb u hA2A podtypu adenosinového receptoru Adenosinový receptor podtyp A2A je součástí rodiny receptorů spřažených s G proteinem (GPCR), která je nyní cílem téměř 40% všech léčivých látek. GPCRs se skládají ze sedmi transmembránových domén spojených třemi extracelulárními a třemi intracelulárními kličkami (ECL a ICL). Byla odkryta skutečná struktura receptoru, tedy víme, že ECL1 a ECL2 jsou spojeny disulfidickými vazbami. Z toho ECL2 je pravděpodobně zodpovědná za proces rozpoznání a navázání ligandu. Abychom lépe pochopili, jak důležitá je úloha těchto disulfidických vazeb v tomto procesu, pomocí přímé jednobodové mutace byly vytvořeny čtyři adenosinové A2A mutantní receptory, kde aminokyselina cystein byla nahrazena za serin (C146S, C159S, C166S a C146S-C159S). Ovlivnění receptorové exprese bylo zkoumáno pomocí metody ELISA (Enzyme-linked immunosorbent assay). Následný efekt na proces rozpoznání ligandu receptorem byl proveden pomocí kompetice mezi radioaktivně značeným ligandem [3 H]CGS-21680 (5 nM) a několika agonisty na adenosinových receptorech (NECA, CGS-21680, PSB-826,...
|
|
|
Role of disulphide bonds in hA2A subtype adenosine receptor
Zappe, Lukáš ; Matoušková, Petra (vedoucí práce) ; Bárta, Pavel (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická Fakulta v Hradci Králové Katedra Biochemicky věd Kandidát: Lukáš Zappe Vedoucí: Ing. Petra Matoušková Ph.D., PD Dr. Anke C. Schiedel Název diplomové práce: Role disulfidických vazeb u hA2A podtypu adenosinového receptoru Adenosinový receptor podtyp A2A je součástí rodiny receptorů spřažených s G proteinem (GPCR), která je nyní cílem téměř 40% všech léčivých látek. GPCRs se skládají ze sedmi transmembránových domén spojených třemi extracelulárními a třemi intracelulárními kličkami (ECL a ICL). Byla odkryta skutečná struktura receptoru, tedy víme, že ECL1 a ECL2 jsou spojeny disulfidickými vazbami. Z toho ECL2 je pravděpodobně zodpovědná za proces rozpoznání a navázání ligandu. Abychom lépe pochopili, jak důležitá je úloha těchto disulfidických vazeb v tomto procesu, pomocí přímé jednobodové mutace byly vytvořeny čtyři adenosinové A2A mutantní receptory, kde aminokyselina cystein byla nahrazena za serin (C146S, C159S, C166S a C146S-C159S). Ovlivnění receptorové exprese bylo zkoumáno pomocí metody ELISA (Enzyme-linked immunosorbent assay). Následný efekt na proces rozpoznání ligandu receptorem byl proveden pomocí kompetice mezi radioaktivně značeným ligandem [3 H]CGS-21680 (5 nM) a několika agonisty na adenosinových receptorech (NECA, CGS-21680, PSB-826,...
|
|
|
Radioaktivní značení ramucirumabu s následnou studií jeho internalizace in vitro
Gajdoš, Jakub ; Bárta, Pavel (vedoucí práce) ; Kuchařová, Monika (oponent)
v českém jazyce Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biofyziky a fyzikální chemie Student: Bc. Jakub Gajdoš Školitel: Mgr. Pavel Bárta, Ph.D. Název diplomové práce: Radioaktivní značení ramucirumabu s následnou studií jeho internalizace in vitro. Proces angiogeneze zajišťuje tvorbu krevního řečiště v místě jeho zvýšené potřeby. Není proto překvapením, že je angiogeneze mnohdy zahrnuta do procesu tvorby nádorů, jelikož zajišťuje nádorovým buňkám přístup živin a odvod metabolitů. Cílení angiogeneze se tak stalo klíčovým tématem některých vědeckých výzkumů. Proces tvorby krevního zásobení nádorů zajišťuje rodina vaskulárních endoteliálních faktorů (VEGF) a jejich příslušných receptorů, které se tak staly cílem útlumu angiogeneze v onkologické léčbě. Jednou z mnoha terapeutik je i monoklonální protilátka ramucirumab cílená proti VEGF receptoru typu 2 (VEGFR-2). Radioaktivní značení ramucirumabu vhodným radionuklidem může přinést výhody ať už v radioterapii nebo radiodiagnostice. Cílem této diplomové práce bylo nepřímé radioaktivní značení monoklonální protilátky ramucirumabu pomocí radiodiagnostického nuklidu 99m Tc přes chelatační činidlo succinimidyl-6-hydrazino-nikotinamid (HYNIC) s následným stanovením radiochemické čistoty připraveného radiofarmaka a zejména jeho...
|
|
|
Testing of influence of newly synthetized compounds on viability of cells in vitro
Šebová, Dominika ; Smutná, Lucie (vedoucí práce) ; Bárta, Pavel (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmakológie a toxikológie Študentka: Dominika Šebová Školiteľ: PharmDr. Lucie Smutná, Ph.D. Názov diplomovej práce: Testovanie vplypu novo nasyntetizovaných látok na viabilitu buniek in vitro Výskum a vývoj nových substancií zamýšľaných k terapeutickému použitiu je náročný a dlhotrvajúci proces. Neodmysliteľnou súčasťou tohto procesu za účelom zaistenia bezpečnosti, účinnosti a kvality nového liečiva sú preklinické a neskôr aj klinické hodnotenie liečiv. Táto práca je zameraná na štúdie cytotoxicity, ktoré sú nevyhnutnou súčasťou preklinického hodnotenia liečiv. Vplyv potencionálnych liečiv bol testovaný na bunkovom modeli in vitro. Boli použité bunky bunkovej línie HepG2, odvodenej od dobre diferencovaného hepatocelulárneho karcinómu. Sledovaným parametrom bola viabilita, teda životaschopnosť buniek. Počas experimentu sa testovalo 9 látok o 9 rôznych koncentráciách v koncentračnom rozmedzí 1-1000 µM. Testované boli látky s antimykobakteriálnym pôsobením, ktorých základná chemická štruktúra bola odvodená od antituberkulotika isoniazidu. Sledovaná bola viabilita buniek po 24 a 48-hodinovom pôsobení jednotlivých látok na HepG2 bunky. Viabilita buniek bola stanovená pomocou kolorimetrického MTS testu, pri ktorom dochádza k redukcii...
|
|
|
Studium vlivu množství přidaného chelatačního činidla na výsledek konjugace monoklonální protilátky
Janečková, Adriana ; Bárta, Pavel (vedoucí práce) ; Janoušek, Jiří (oponent)
v českém jazyce Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmakologie a toxikologie Studentka: Mgr. Adriana Janečková Školitel: Mgr. Pavel Bárta, Ph.D. Název rigorózní práce: Studium vlivu množství přidaného chelatačního činidla na výsledek konjugace monoklonální protilátky Monoklonální protilátky jsou v posledních několika desetiletích významným nástrojem nejenom pro terapii ale také pro diagnostiku infekčních, autoimunitních či nádorových onemocnění. Monoklonální protilátky se vedle svého terapeutického účinku staly i biologickými vektory pro látky s terapeutickým a diagnostickým významem. Vedle bakteriálních nebo rostlinných toxinů jsou monoklonální protilátky schopny doručit na místo jejich specifické vazby, tj. antigenu proti kterému byly připraveny, i radionuklidy, které jsou významné z hlediska radiodiagnostiky a radioterapie. Tyto emitory radioaktivního záření se mohou na molekulu vázat buď přímo například v případě halogenace nebo nepřímo. Posledně zmíněný způsob je nejrozšířenější z hlediska větší stability a většího počtu radionuklidů, které se tak mohou pomocí protilátek transportovat. Sloučeninami, které umožňují vazbu radionuklidu na molekulu monoklonální protilátky, jsou bifunkční chelatační činidla (BFC). Míra vazby, tj. konjugace, BFC na molekulu protilátky...
|
|
|
The influence of critical condition of patients on DNA damage
Verešpejová, Natália ; Kuchařová, Monika (vedoucí práce) ; Bárta, Pavel (oponent)
V decembri 2019 sa začali objavovať prvé prípady pacientov s pneumóniou, ktorá prerástla v syndróm akútnej respiračnej tiesne a spôsobovala problémy s dýchaním. Koronavírusová choroba 2019 (COVID-19) je príčinou globálnej pandémie a spôsobuje ju závažný akútny respiračný syndróm koronavírus 2 (SARS-CoV-2). Za progresiu ochorenia je zodpovedná komplexná súhra faktorov. Niektoré štúdie naznačujú, že podporuje vznik oxidačného stresu a teda môže viesť k oxidačnému poškodeniu buniek a DNA. Cieľom tejto štúdie bolo pozorovanie závislosti medzi oxidačným poškodením DNA a kritickým stavom spôsobeným ochorením COVID-19 s použitím techniky kométovej analýzy. Základný princíp použitej metódy spočíva vo fixácii lymfocytov v agarózovom gély, odstránení membrány a cytoplazmy buniek, inkubácii so špecifickými enzýmami a elektroforéze. V procese elektroforézy dochádza k migrácii negatívne nabitých fragmentov DNA smerom k anóde a bunka tak nadobúda typický tvar kométy. Kométy vizualizujeme pomocou DNA interkalačného farbiva etídia bromidu. Kvantifikovali sme jednoreťazové zlomy a s použitím špecifických enzýmov (modifikácia metódy na detekciu špecifických lézií) aj oxidované pyrimidíny a puríny. Výsledky sú udávané ako % tail DNA, teda množstvo DNA vo chvoste kométy v percentách. Stanovenie DNA poškodenia...
|
|
| |
|
|
Testing of influence of newly synthetized compounds on viability of cells in vitro
Šebová, Dominika ; Smutná, Lucie (vedoucí práce) ; Bárta, Pavel (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmakológie a toxikológie Študentka: Dominika Šebová Školiteľ: PharmDr. Lucie Smutná, Ph.D. Názov diplomovej práce: Testovanie vplypu novo nasyntetizovaných látok na viabilitu buniek in vitro Výskum a vývoj nových substancií zamýšľaných k terapeutickému použitiu je náročný a dlhotrvajúci proces. Neodmysliteľnou súčasťou tohto procesu za účelom zaistenia bezpečnosti, účinnosti a kvality nového liečiva sú preklinické a neskôr aj klinické hodnotenie liečiv. Táto práca je zameraná na štúdie cytotoxicity, ktoré sú nevyhnutnou súčasťou preklinického hodnotenia liečiv. Vplyv potencionálnych liečiv bol testovaný na bunkovom modeli in vitro. Boli použité bunky bunkovej línie HepG2, odvodenej od dobre diferencovaného hepatocelulárneho karcinómu. Sledovaným parametrom bola viabilita, teda životaschopnosť buniek. Počas experimentu sa testovalo 9 látok o 9 rôznych koncentráciách v koncentračnom rozmedzí 1-1000 µM. Testované boli látky s antimykobakteriálnym pôsobením, ktorých základná chemická štruktúra bola odvodená od antituberkulotika isoniazidu. Sledovaná bola viabilita buniek po 24 a 48-hodinovom pôsobení jednotlivých látok na HepG2 bunky. Viabilita buniek bola stanovená pomocou kolorimetrického MTS testu, pri ktorom dochádza k redukcii...
|
|
|
Farmakologické ovlivnění nukleárních receptorů při terapii diabetes mellitus
Draský, Jakub ; Pávek, Petr (vedoucí práce) ; Bárta, Pavel (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmakologie a toxikologie Student: Jakub Draský Školitel: prof. PharmDr. Petr Pávek, Ph.D. Název diplomové práce: Farmakologické ovlivnění nukleárních receptorů při terapii diabetes mellitus Nukleární receptory přísluší do superrodiny transkripčních faktorů, mezi jejich hlavní funkce patří regulace exprese cílových genů. Ve svojí práci jsem se věnoval hlavně skupině sirotčích receptorů, konkrétně pregnanovému X receptoru (PXR) a konstitutivnímu androstanovému receptoru (CAR). Společným znakem těchto receptorů je jejich aktivace pomocí specifického ligandu. CAR i PXR mají nezbytnou funkci jako biologické senzory hydrofobních xenobiotik, když indukují enzymy I. a II. fáze metabolismu. Zásadní význam mají také při regulaci glukoneogeneze, inzulínové odpovědi, adipogeneze, homeostáze cholesterolu, mastných kyselin, triglyceridů a glykogenu. Cílem této experimentální práce bylo zavést metodu luciferázové reportérové eseje pro dva DNA konstrukty obsahující promotorovou oblast genů PEPCK a CYP7A1. Pro aktivaci PXR jsme použili známého agonistu rifampicin a antagonistu SPA70. Jako agonistu CAR receptoru jsme použili látku CITCO. Funkčnost metody luciferase reporter gene assay jsme si nejdříve ověřili s luciferázovým vektorem pro gen CYP3A4....
|
|
|
Hodnocení jaterní toxicity in vitro
Kafuňková, Kateřina ; Maixnerová, Jana (vedoucí práce) ; Bárta, Pavel (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmakologie a toxikologie Studentka: Kateřina Kafuňková Vedoucí: RNDr. Jana Maixnerová, Ph.D. Název diplomové práce: Hodnocení jaterní toxicity in vitro Předmětem diplomové práce bylo hodnocení toxicity nově syntetizovaných látek na buněčném modelu reprezentujícím jaterní buňky. Testované látky byly dodány z Katedry organické a anorganické chemie, Farmaceutické fakulty v Hradci Králové, Univerzity Karlovy jakožto potencionální antifungální léčiva a léčiva účinná na Meticilin-rezistentní Staphylococcus aureus (MK-NO2-1, MK-NO2-2, DAB-5-K, PABA- Me-5, PABA-Et-5, MK-F-1, PABAN-3, PABAN-5, MK-F-2, MK-CF3-1, MK-CF3- 2). Pro stanovení toxicity byly využity dvě metody. První metoda je založena na měření metabolické aktivity buněk pomocí redukce tetrazolinu na barevný produkt. Druhá metoda detekuje množství uvolněného LDH jako markeru cytotoxicity. Jako buněčný model byla použita buněčná linie lidských buněk hepatomu HepG2. K posouzení míry viability a cytotoxicity byl použit parametr IC50 a EC50. Výsledné hodnoty za využití první metody ukázaly, že všechny testované látky vykazovaly určitou míru toxicity vůči jaterní tkáni. Nejtoxičtější látkou je MK-CF3-2. Použitý standard (amfotericin B) můžeme na základě naměřených hodnot označit za netoxickou...
|
host ::
RSS.