|
Migraine and its treatment
Petríková, Andrea ; Jirkovský, Eduard (vedoucí práce) ; Červený, Lukáš (oponent)
Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra: Katedra farmakológie a toxikológie Vedúci diplomovej práce: PharmDr. Eduard Jirkovský, Ph.D. Autor: Andrea Petríková Názov diplomovej práce: Migréna a jej liečba Migréna patrí k primárnym bolestiam hlavy, ktoré sa prejavujú v opakovaných atakoch silnej jednostrannej a pulzujúcej bolesti hlavy obvykle trvajúcich 4-72 hodín. Sú sprevádzané jedným z týchto príznakov: fotofóbia, fonofóbia, odorofóbia, nauzea, vomitus. Od jedného záchvatu k druhému sa nemocný cíti ako zdravý pacient. V mojej práci popisujem súčasné farmakoterapeutické postupy v liečbe migrény. V prvej časti diplomovej práce som podala literárny prehľad migrény, ktorý začína klasifikáciou bolesti hlavy. Ďalej pokračujem s definíciou migrény, históriou, klasifikáciou migrény, patofyziológiou, prevalenciou a diagnostickými kritériami migrény. V druhej časti popisujem jednotlivé typy liečby s ich postupmi a liekmi, ktoré sa používajú. Na základe našich znalostí o patofyziológii migrény, boli vyvinuté nové lieky pre liečbu akútnych záchvatov migrény, ktoré sú cielené na calcitonin gene-related peptid (CGRP) a sérotonínové 5-HT1F receptory. Venujem sa popisovaniu ich mechanizmu, ktoré lieky boli vyvinuté, ako pôsobia. Prvým dôležitým krokom je správne určená diagnóza. Od nej...
|
|
The impact of SIRT1 inhibition on zebrafish morphology and behavior
Faustová, Zuzana ; Červený, Lukáš (vedoucí práce) ; Mladěnka, Přemysl (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmakologie a toxikologie Studentka: Zuzana Faustová Školitel: Prof. Doutor Jorge Miguel de Ascenção Oliveira PharmDr. Lukáš Červený, Ph.D Název diplomové práce: Vliv inhibice SIRT1 na morfologii a chování Dánia pruhovaného Po objevu spojitosti mezi Silent Information Regulator 2 (Sir2) a jeho schopností ovlivnit délku života v kvasinkách, se Sir2 a jeho sedm savčích ortologů stalo velice zajímavým cílem. Byly nazvány sirtuiny a patří do rodiny histon deacetyláz. Funkce sirtuinů je jedinečná, jako kofaktor mají nikotinamid adenin dinukleotid a jejich aktivita může být ovlivněna vnějšími faktory. Cílem této práce bylo zjistit více o Sirtuinu 1 (SIRT1), který by měl být ze všech savčích sirtuinů nejvíce podobný Sir2 kvasinek. Nejprve jsme testovali vliv inhibice SIRT1 na raný vývoj embrya a larvy Dánia pruhovaného (Danio rerio). Zjistili jsme, že SIRT1 je důležitý pro normální vývoj a že jeho nedostatek způsobí poruchy kardiovaskulárního charakteru, zpoždění ve vývoji až smrt. Dále jsme se snažili zjistit více o spojitosti SIRT1 s Parkinsonovou chorobou, tím že jsme kombinovali netoxické dávky EX527, inhibitoru SIRT1, a 1-methyl-4-phenylpyridinium (MPP+ ), látkou využívanou k indukci symptomů Parkinsonovy choroby. Nicméně...
|
|
Studium role nukleosidových transportéru v intestinální absorpci s využitím in vitro transportního modelu založeném na buněčné linii Caco-2
Ďurišová, Markéta ; Červený, Lukáš (vedoucí práce) ; Hofman, Jakub (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmakologie a toxikologie Student: Mgr. Markéta Ďurišová Konzultant: PharmDr. Lukáš Červený, Ph.D. Název rigorózní práce: Studium role nukleosidových transportéru v intestinální absorpci s využitím in vitro transportního modelu založeném na buněčné linii Caco-2. Primárním místem absorpce je u perorálně podávaných léčiv tenké střevo. Enterocyty, tvořící střevní bariéru, exprimují značné množství transportérů, a to zástupce jak ATP-vázajících (ABC) tak i "solute carrier" (SLC) transportérů, které mohou významně ovlivnit farmakokinetiku léčiv, které jsou jimi přenášeny. I z toho důvodu je v současnosti FDA a EMA kladen důraz na studium těchto interakcí a jejich vlivu na permeabilitu léčiv. Cílem předkládané práce bylo studium, zda se ekvilibrační nukleosidové transportéry (ENTs), patřící mezi SLC transportéry, podílejí na absorpci nukleosidů (adenosinu a thymidinu) a následně i nukleosidového antiretrovirotika abakaviru (ABC). K experimentu byla využita in vitro transportní metoda, která byla provedena na monovrstvě polarizovaných Caco-2 buněk, jež byly kultivovány na mikrporózních membránových filtrech. Statistickou analýzou námi naměřených hodnot bylo zjištěno, že ačkoliv exprese ENTs byla na apikální straně membrány Caco-2 buněk...
|
|
Využití deep-sequencing při studiu závislostí průběhu lentivirové infekce na variabilitě receptorů přirozené imunity.
Zelníková, Jana ; Jílek, Petr (vedoucí práce) ; Červený, Lukáš (oponent)
Jana Zelníková Využití deep sequencing při studiu závislostí průběhu lentivirové infekce na variabilitě receptorů přirozené imunity Diplomová práce Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Farmacie Cíl práce: Cílem práce bylo zjistit za použití modelu SIV infekce u makaků, tedy jediném současném modelu HIV infekce u lidí, jak se liší dvě skupiny makaků rhesus infikovaných virem SIV239, nebo SHIV clade C s odlišnou virovou náloží, v expresi haplotypů MHC molekul I. třídy pomocí nové metody pyrosekvenování. Metody: Pomocí reverzní transkriptázy jsme vzorky RNA z leukocytů makaků převedli na cDNA a provedli jsme PCR pro úsek 190 bp MHC I. třídy s fúzními primery s identifikátory MID pomocí FastStart High Fidelity Taq DNA polymerázy. Dále jsme postupovali dle protokolu od GS Junior System a vzorky jsme pyrosekvenovali na přístroji GS Junior System (Roche). Získaná data jsme analyzovali sadou skriptů v jazyce Python použitím řady filtračních kroků a pomocí softwaru DNA Star LaserGene 11. Alely jsme identifikovali pomocí programu ncbi-blast+ 2.2.25. Výsledky: Nalezli jsme 98 známých a 11 nových alel MHC I. třídy. Analýzou jsme nalezli alely, u kterých předpokládáme rychlý, nebo pomalý průběh onemocnění SIV. Alely s pomalým průběhem onemocnění: Mamu - A1*004, A1*007, A1*019,...
|
|
Neurogenetický potenciál kmenových buněk u myší
Slabá, Barbora ; Štaud, František (vedoucí práce) ; Červený, Lukáš (oponent)
Neurální kmenové buňky (NKB) se vyskytují v dospělém nervovém systému savců, nacházejí se ve dvou specifických oblastech: subventrikulární zóna předního mozku a subgranulární zóna gyrus dentatus v hipokampu. NKB získávají své specifické vlastnosti, vyzrávají a integrují se do funkčních celků, předtím než se mohou funkčně zapojit do nervového systému. Stále víme málo o mechanismech, které kontrolují tyto procesy a o funkci nově vznikajících neuronů v dospělém mozku. Velké množství faktorů na molekulární úrovni a vliv prostředí, to vše se může podílet na regulaci proliferace, vývoje a diferenciace somatických kmenových buněk v dospělém nervovém systému. NKB dávají vznik třem hlavním typům nervových buněk: neuronům, astrocytům a oligodendrocytům. Ukazuje se, že astrocyty mohou hrát klíčovou roli v regulaci neurogeneze: v neporušeném funkčním dospělém mozku i po jeho poškození. Pro odhalení funkce astrocytů v regulaci neurogeneze na molekulární úrovni, je nezbytným krokem nejprve porozumět regulaci neurogeneze v dospělém CNS. Abychom zjistili, jak se projeví odstranění genů intermediálních filament astrocytů (GFAP, vimentin) na počtu NKB, a jak zásah ovlivní vlastnosti neurálních kmenových buněk myší, analyzovali jsme neurosféry neurálních kmenových buněk. Neurosféry sloužili k porovnání charakteristik...
|
|
Studování příčin rezistence a identifikace bakteriálních izolátů pomocí širokého spektra laboratorních metod
Bavlovič, Jan ; Červený, Lukáš (vedoucí práce) ; Mladěnka, Přemysl (oponent)
Karlova Univerzita v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmakologie a toxikologie Student: Jan Bavlovič Školitelé: PharmDr. Lukáš Červený, Ph.D. Prof. Doutora Luísa Peixe Konzultanti: Doutora Ângela Novais Doutora Ana Freitas Název diplomové práce: Charakterizace multirezistentních izolátů Klebsiella pneumoniae a Enterococcus faecium spektroskopickými a genotypickými metodami Stále se zvyšující antimikrobiální rezistence je v současné době celosvětovým problémem. Mezi významné metody charakterizace antimikrobiální rezistence patří tradičně genomické postupy. Cílem této studie bylo zhodnotit potenciál metody Fourier transform infrared spectroscopy se zeslabeným kompletním odrazem (FTIR-ATR) pro identifikaci multirezistentních karbapenemasu produkujících K. pneumoniae a E. faecium izolátů. Analyzovali jsme 20 klinických K. pneumoniae izolátů získaných z různých laboratoří v Portugalsku v období od března 2014 do září 2015 a 143 dříve popsané vankomycin-rezistentní E. faecium izoláty získaných od lidí, zvířat a životního prostředí v 26 zemích mezi lety 1992 a 2015. Izoláty byly primárně charakterizovány genotypovými metodami, včetně testování antimikrobiální citlivosti, detekce karbapenemáz a betalaktamáz s rozšířeným spektrem (ESBLs), identifikace odolnosti vůči antibiotikům...
|
|
Interakce MRP2 transportéru s vybranými antiepileptiky
Garajová, Katarína ; Pávek, Petr (vedoucí práce) ; Červený, Lukáš (oponent)
Interakce MRP2 transportéru s vybranými antiepileptiky Epilepsie je časté neurologické onemocnění postihující přibližně 1-2% populace. U většiny epileptických pacientů jsou záchvaty účinně kontrolovány v současnosti dostupnými antiepileptiky (AED - anti-epileptic drugs). Uvádí se, že přibližně 30% pacientů nedochází k zastavení záchvatů, navzdory pečlivě optimalizované léčbě. Většina těchto pacientů s farmakorezistentní epilepsií neodpovídá na léčbu různými AED s různými mechanismy účinku, což naznačuje, že rezistence u epilepsie je multifaktoriálním fenoménem nezávislým od použitého léčiva. Na základě experimentálních a klinických studií byly předloženy dvě hlavní teorie vysvětlující vznik farmakorezistence. První z nich je hypotéza cílových struktur, která se zabývá změnami ve vlastnostech cílových struktur pro AED jako příčinami jejich snížené farmakosenzitivity. Druhou je transportérová hypotéza, která hovoří o zvýšené expresi efluxních multi-drug transportérů v mozku jako příčině snížení přístupu AED k cílovým strukturám. Největší a nejvýznamnější rodinou multidrug-transportérů exprimovaných v mozku a pravděpodobně odpovědných za snížení účinné koncentrace mnohých AED v mozkové tkáni je nadrodina ABC (ATP- binding cassete) transportérů. Jedním z transportérů této rodiny, kterým byla v současnosti...
|
|
Příprava rekombinantní cDNA některých lékových transportérů
Hadrabová, Zdeňka ; Štaud, František (vedoucí práce) ; Červený, Lukáš (oponent)
Pro následnou přípravu buněčné linie se zvýšenou expresí transportéru MRP3 byl připraven vhodný plazmid obsahující kódující sekvenci pro tento transportér. Experimentálně bylo stanoveno složení reakční směsi a teplotní profil PCR pro amplifikaci sekvence kódující transportér MRP3. Připojením adenosinu byl PCR produkt upraven pro klonování do plazmidu pCR® -XL-TOPO® . Plazmid pCR® -XL-TOPO® se zaklonovanou sekvencí a plazmid pZeoSV2(-) byly štěpeny restrikčními endonukleázami EcoRV a SpeI. Následně bylo možné díky komplementárním koncům vyštěpenou kódující sekvenci MRP3 zaklonovat do plazmidu pZeoSV2(-), který je vhodný pro transfekci eukaryotní buněčné linie. Klonování bylo úspěšné.
|
|
Beneficial Effects of 11β-HSD1 Inhibition on Cognitive Performance in a Mouse Model of Alzheimer's Disease
Červinková, Tereza ; Červený, Lukáš (vedoucí práce) ; Musílek, Kamil (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmakologie a toxikologie Kandidát: Tereza Červinková Školitel: PharmDr. Lukáš Červený, Ph.D. Název práce: Prospěšný vliv inhibice enzymu 11β-HSD1 na kognitivní výkon u myšího modelu Alzheimerovy choroby Prodloužení délky života jde ruku v ruce s kognitivními poruchami souvisejícími se stárnutím. Alzheimerova choroba je nejčastěji se vyskytující demence. Je to nevratné a progresivní neurodegenerativní onemocnění vyznačující se ztrátou mozkových funkcí. Nedávné studie naznačují, že nadměrné působení glukokortikoidů má škodlivé účinky na hippocampus a způsobuje narušení prostorové paměti. Navíc bylo prokázáno, že starší myši s kognitivním deficitem vykazují zvýšenou genovou expresi enzymu 11β-hydroxysteroid- dehydrogenázy typu 1 (11β-HSD1) v oblasti hippocampu a parietální kůry. Kmen myší zvaný Senescence-Accelerated Mouse Prone 8 (SAMP8) je přirozeně se vyskytující zvířecí model zrychleného stárnutí. Mnoho studií naznačuje, že SAMP8 vykazují behaviorální a histopatologické znaky Alzheimerovy choroby. V rámci této studie jsme hodnotili neuroprotektivní účinky inhibice enzymu 11β-HSD1 potentní sloučeninou s názvem RL-118, která je syntetizována na pyrrolidinovém základě, a/nebo účinky stravy na kognitivní funkce u různých skupin SAMP8...
|
|
Inhibice histon-deacatyláz a mitochondriální pohyb v neuronech
Prokopová, Iva ; Pávek, Petr (vedoucí práce) ; Červený, Lukáš (oponent)
Inhibice histon deacetyláz a mitochondriální pohyb v neuronech Mitochondriální pohyb je nezbytný pro správnou funkci neuronů a jeho narušení vede k neurodegeneraci. Podařilo se nám nalézt signifikantní rozdíly v pohybu mitochondrií mezi neurony striata a cortexu, získanými z mozku potkanů. Ve striatu se mitochondrie pohybují nižšími průměrnými rychlostmi a se sníženou celkovou dynamikou v porovnání s cortexem, přičemž zaujímají stejnou frakční okupaci nervových výběžků. V diplomové práci je diskutováno, jak tento fakt může přispět ke zvýšené náchylnosti k neurodegeneraci buněk striata. Použili jsme dvě různé metody analýzy mitochondriálního pohybu: manuální a polo- automatickou. Tyto metody dokáží určit průměrné rychlosti jednotlivých mitochondrií stejně jako celkovou dynamiku mitochondrií v určité sledované oblasti. Analyzovali jsme pouze neurony s vytvořenými synaptickými propojeními, mitochondrie se pohybovaly v obou směrech stejnými průměrnými rychlostmi, proto nebyly dále rozlišovány dle směru pohybu. Naše předběžné výsledky také odhalily, že inhibice histon deacetyláz pomocí trichostatinu A zvyšuje pohyb mitochondrií v neuronech striata, nezávisle na mitochondriální frakční okupaci a hladině Ca2+ ve výběžcích neuronů. Předpokládáme, že pravděpodobným mechanismem vzrůstu dynamiky mitochondrií...
|