Název:
Role genu Disp3 v buněčné proliferaci
Překlad názvu:
The role of Disp3 gene in cell proliferation
Autoři:
Ditrychová, Karolína ; Zíková, Martina (vedoucí práce) ; Pospíchalová, Vendula (oponent) Typ dokumentu: Diplomové práce
Rok:
2016
Jazyk:
cze
Abstrakt: [cze][eng] Jedním z hlavních projektů naší laboratoře je výzkum funkce proteinu Dispatched 3 (DISP3). Tento protein se řadí do rodiny proteinů obsahujících sterol sensing doménu (SSD). Gen, který ho kóduje, byl dříve popsán jako regulovaný thyroidním hormonem a k jeho expresi dochází především v neurální tkáni. Naše nepublikovaná data ukazují jeho zvýšenou hladinu v meduloblastomech, velice častých nádorech mozečku u nezletilých. Na základě těchto zjištění jsme začali studovat roli DISP3 v lidských rakovinných buňkách. Cílem této práce je sledovat vliv zvýšené nebo snížené exprese DISP3 na buněčnou proliferaci a diferenciaci jednak v lidských buněčných liniích, jednak v myšších neurálních progenitorech. Za tímto účelem jsme si vybrali buněčné linie DAOY a D341 pocházející z lidských meduloblastomů, které se výrazně liší mírou exprese DISP3, a linii myšších neurálních multipotentních progenitorů C 17.2, v nichž je DISP3 exprimován velmi slabě. Ukázali jsme, že zvýšená exprese DISP3 v buněčných liniích DAOY a C 17.2 vede ke zvýšení buněčné proliferace. Dále jsme diferencovali buněčnou linii C 17.2 do neuronů a astrocytů a sledovali, že buňky se zvýšenou expresí DISP3 projevují menší ochotu podstoupit diferenciační proces, což jsme následně potvrdili pomocí specifických markerů. Za použití CRISPR-Cas9 systému...Dispatched 3 (DISP3), sterol - sensing domain (SSD) - containing protein, is a key focus of our laboratory. It was described as a gene regulated by thyroid hormone and its expression is mainly localized within neural tissue. Our preliminary data suggested increased DISP3 expression in medulloblastoma, a highly common pediatric cerebellar tumour, therefore we wanted to examine DISP3 role in human cancer cells. The aim of this thesis is to perform DISP3 overexpression and downregulation in human medulloblastoma cell lines and in mouse neural progenitors and analyse its effect on cell proliferation and differentiation. For this purpose, we chose DAOY and D341, human medulloblastoma cell lines with low and high expression of DISP3 and mouse multipotent neural progenitor cell line, C 17.2, with low DISP3 expression. We showed, that DISP3 ectopic expression leads to increase in cell proliferation in both DAOY and C 17.2 cells. Next, we examined the ability of C 17.2 cells to differentiate into neurons and astrocytes and observed, that cells overexpressing DISP3 reveal delay in differentiation, what we proved by analysis of cell specific markers. Using CRISPR-Cas9 targeting system, we reduced DISP3 expression within D341 cells and observed decrease in their proliferation. Finally, we analysed cell cycle...
Klíčová slova:
buněčná diferenciace; buněčná proliferace; Dispatched 3 (DISP3); rakovina; cancer; differentiation; Dispatched 3 (DISP3); proliferation