|
|
Vliv mebendazolu na proliferaci, migraci a adhezi buněk orálního karcinomu in vitro
Stupková, Eva ; Skálová, Lenka (vedoucí práce) ; Boušová, Iva (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Eva Stupková Školitel: RNDr. Věra Králová, Ph.D. Název diplomové práce: Vliv mebendazolu na proliferaci, migraci a adhezi buněk orálního karcinomu in vitro Mebendazol patří mezi běžně užívaná anthelmintika jak v humánní, tak ve veterinární medicíně. Jeho mechanismus účinku je založen na inhibici syntézy mikrotubulů. V naší práci jsme se zabývali efektem mebendazolu na nádorové buňky. Sledovali jsme jeho vliv na proliferaci, migraci a adhezi buněk orálního skvamózního karcinomu, což je velice agresivní a silně invazivní nádorové onemocnění. Naše pokusy jsme prováděli na dvou liniích orálního skvamózního karcinomu (DOK, PE/CA-PJ15) a na nenádorových gingiválních fibroblastech. Při měření jsme použili metodu WST-1 na stanovení vlivu mebendazolu na proliferaci, xCELLigence RTCA DP analyzátor pro stanovení vlivu mebendazolu na migraci a adhezi buněk. V našich pokusech mebendazol v klinicky dosažitelných koncentracích inhiboval proliferaci a migraci buněk orálního skvamózního karcinomu a taktéž ovlivňoval jejich adhezi.
|
|
|
Biologická aktivita potenciálních antioxidantů v potkaních L-6 myoblastech
Drahošová, Vlasta ; Boušová, Iva (vedoucí práce) ; Dršata, Jaroslav (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Universita Roma Tre Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra přírodních věd Katedra biochemických věd Laboratoř fyziologie Kandidát: Vlasta Drahošová Školitel: Doc. PharmDr. Iva Boušová, Ph.D. Prof. Sandra Incerpi Diplomová práce: Biologická aktivita potenciálních antioxidantů v potkaních L-6 myoblastech Tato diplomová práce vznikla na základě výsledků výzkumu prováděného na katedře přírodních věd Univerzity Roma Tre v Římě pod vedením profesorky Sandry Incerpi. Tým laboratoře fyziologie se dlouhodobě věnuje výzkumu různých přírodních látek s antioxidačními a cytostatickými vlastnostmi. Antioxidanty jsou schopné eliminovat reaktivní formy kyslíku (ROS), které mají v těle nezastupitelné fyziologické účinky, ale jsou také příčinnou rozvoje některých onemocnění a stárnutí díky poškození různých biomolekul. Ve své práci jsem studovala antioxidační aktivitu šesti syntetických derivátů 4-methylkumarinu (AB-3, AB-4, AB-7, AB-8, AB-11, AB-12), které byly syntetizovány a charakterizovány prof. Virinderem Parmarem (University of Delhi, Indie). Studie probíhala v buněčné linii potkaních L-6 myoblastů (stanovení intracelulárních ROS pomocí dichlorofluoresceinového testu, test proliferační křivky) a v bezbuněčném prostředí (elektronová paramagnetická resonanční spektroskopie,...
|
|
|
Oxidační poškození proteinů
Bártová, Jana ; Boušová, Iva (vedoucí práce) ; Zemanová, Lucie (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Jana Bártová Školitel: PharmDr. Iva Boušová, Ph.D. Název diplomové práce: Oxidační poškození proteinů Kyselina chlorná je silné oxidační činidlo, které využívají fagocytující buňky k usmrcení pohlcené bakterie. Pokud dojde k vylití obsahu fagocytu do okolí, může dojít k poškození okolních struktur včetně proteinů. Katechiny patří do skupiny flavonoidů, jejichž antioxidační vlastnosti byly demonstrovány v mnoha studiích. Moje diplomová práce byla zaměřená na potenciální vliv osmi přírodních derivátů katechinu na oxidační poškození lidského sérového albuminu (HSA) kyselinou chlornou. Použila jsem dvě spektrofotometrické (stanovení karbonylů a chloraminů) a tři elektroforetické metody (nativní PAGE, SDS-PAGE, imunoblotting). Při stanovení chloraminů jsem sledovala závislost účinku antioxidantu na jeho koncentraci (0-3 mM) a ze získaných dat jsem pomocí programu GraphPad Prism vypočítala hodnoty EC50 pro jednotlivé katechiny. Nejúčinnější sloučeninou byl katechin, jehož EC50 byla 4,8 µM. Z výsledků vyplývá, že antioxidační schopnost klesá s rostoucím počtem hydroxylových skupin v molekule flavonoidu. Karbonylové skupiny jsou vhodným markerem probíhající oxidace proteinu. Nejsilnější protektivní účinek...
|
|
| |
|
| |
|
|
Effect of prenylated flavonoids on biotransformation enzymes in vitro
Pataráková, Paula ; Szotáková, Barbora (vedoucí práce) ; Boušová, Iva (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Paula Pataráková Školiteľ: Prof. Ing. Barbora Szotáková, Ph.D. Názov diplomovej práce: Vplyv prenylovaných flavonoidov biotransformačné enzýmy in vitro Prenylované flavonoidy xanthohumol (XH), isoxanthohumol (IXH), 6-prenylnaringenín (6PN) a 8-prenylnaringenín (8PN) sú flavanóny a chalkóny vyskytujúce sa v chmeli a ich charakteristickým znakom je prenylový reťazec na kruhu A. Keďže sú tieto telu nie vlastné látky súčasťou piva a doplnkov stravy, cieľom práce bolo zistiť, či majú vplyv na biotransformačné enzýmy. Bol skúmaný vplyv XH, IXH, 6PN a 8PN na aktivitu a expresiu enzýmov 1. fázy biotransformácie xenobiotík, konkrétne cytozolickej karbonylreduktázy 1 (CBR1) a aldo-ketoreduktáz podrodiny 1C (AKR1C) v primárnej kultúre potkaních hepatocytov. Test na viabilitu preukázal, že prenylované flavonoidy v nižších koncentráciách viabilitu hepatocytov neovplyvňujú alebo zvyšujú, vyššie koncentrácie sú pre ne toxické. V prípade AKR1C bola u hepatocytov ovplyvnených prenylovanými flavonoidmi významne zvýšená aktivita u 8PN, v prípade CBR1 bola štatisticky významne zvýšená aktivita u IXH a 8PN. Bol preukázaný nárast expresie AKR1C3 vo vzorkách s IXH a 6PN, pokles vo vzorkách s XH a 8PN. Expresia CBR1 bola na...
|
|
|
Modifikace vybraných biotransformačních enzymů v průběhu stárnutí (u potkana)
Vyskočilová, Erika ; Boušová, Iva (vedoucí práce) ; Svobodová, Hana (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Erika Vyskočilová Školitel: PharmDr. Iva Boušová, Ph.D. Název diplomové práce: MODIFIKACE VYBRANÝCH BIOTRANSFORMAČNÍCH ENZYMŮ V PRŮBĚHU STÁRNUTÍ (U POTKANA) Stárnutí je nezastavitelný biologický proces charakterizovaný progresivním útlumem funkce orgánových systémů a současným nárůstem oxidačního poškození v důsledku kumulace reaktivních forem kyslíku (ROS). Zvýšená aktivita antioxidačních enzymů, například peroxidasy a katalasy, v průběhu stárnutí tedy souvisí se zvýšenou produkcí ROS. Aktivita biotransformačních enzymů například cytochromu P450 (CYP) a glutathion-S-transferasy (GST) se také v průběhu stárnutí mění. Zpravidla, u velmi mladých a velmi starých jedinců je aktivita nižší než v období dospělosti. Cílem práce bylo sledovat změny v aktivitě a expresi vybraných jaterních biotransformačních (GST, CYP 1A, 2B, 3A4) a antioxidačních (peroxidasa, katalasa, superoxiddismutasa) enzymů u potkanů v souvislosti s věkem. Potkaní samci kmene Wistar byli utraceni dekapitací v celkové anestezii ve věku 6 týdnů a 21 měsíců (6 jedinců v každé skupině). Následně byla jejich játra zpracována na subcelulární frakce (mikrosomy a cytosol), v nichž byly spektrofluorimetricky a spektrofotometricky stanoveny...
|
|
|
Vznik karbonylových skupin vlivem neenzymové glykace proteinů
Krautová, Lenka ; Boušová, Iva (vedoucí práce) ; Dršata, Jaroslav (oponent)
Vypracovala: Lenka Krautová Místo vypracování: Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Název: Vznik karbonylových skupin vlivem neenzymové glykace proteinů Školitel: PharmDr. Iva Boušová, Ph.D. Tato diplomová práce byla zaměřena na optimalizaci stanovení množství karbonylových skupin v biologickém materiálu. Karbonylové skupiny vznikají vlivem oxidace nebo glykace proteinů. Jako modelovou bílkovinu pro spektrofotometrickou metodu stanovení jsem použila bovinní sérový albumin a pro elektroforetickou metodu aspartátaminotransferázu, které jsem glykovala několika glykačními činidly (glukóza, glukóza + měď, fruktóza, fruktóza + měď, metylglyoxal). U spektrofotometrického stanovení jsem optimalizovala různé parametry: rozpouštědlo, koncentraci činidla, množství bílkoviny a délku inkubace. Podařilo se mi nalézt vhodné podmínky stanovení, které jsem používala v dalších experimentech s různými glykačními činidly. U elektroforetického stanovení jsem prováděla SDS-PAGE s následným barvením stříbrem nebo imunobloting s chemiluminiscenční detekcí. Výsledky spektrofotometrického stanovení ukázaly, že nejvyšší glykační schopnost má metylglyoxal, následuje fruktóza s přídavkem měďnatých iontů, samotná fruktóza, glukóza s přídavkem měďnatých iontů a nejpomalejším glykačním činidlem je...
|
|
|
Změny lipidového spektra během redukce hmotnosti pacientů s diabetes mellitus
Šmídová, Barbora ; Dršata, Jaroslav (vedoucí práce) ; Boušová, Iva (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Bc. Barbora Šmídová Školitel: Prof. MUDr. Jaroslav Dršata, CSc. Školitel - specialista: RNDr. Mgr. Alena Tichá, PhD. Název diplomové práce: ZMĚNY LIPIDOVÉHO SPEKTRA BĚHEM REDUKCE HMOTNOSTI PACIENTŮ S DIABETES MELLITUS Diplomová práce se zabývá stanovením lipidových parametrů (celkových mastných kyselin, celkového cholesterolu, cholesterolu v lipoproteinech, triglyceridů, prekurzorů cholesterolu (lathosterolu a skvalenu) a markerů absorpce cholesterolu (ß-sitosterolu a kampesterolu)) u obézních pacientů s diabetes mellitus 1. a 2. typu, kteří podstoupili sedmidenní hladovku a následně dodržovali nízkokalorickou diabetickou dietu. Předpokládá se, že snížením tělesné hmotnosti, by mělo dojít ke zlepšení inzulínové rezistence. Záměrem práce je zhodnocení lipidových parametrů během redukce hmotnosti u obézních pacientů s diabetes mellitus. Lipidy byly stanovovány před zahájením hladovky, po sedmidenní hladovce a za měsíc od začátku hladovky (u diabetiků 1. typu též rok po hladovce). Metoda plynové chromatografie byla použita pro stanovení celkových mastných kyselin a necholesterolových sterolů a skvalenu. Cholesterol a triglyceridy byly stanoveny rutinním enzymatickým kolorimetrickým testem. U diabetiků...
|
|
|
OCT activity and glycation damage in rat liver mitochondria
Merhautová, Lucie ; Dršata, Jaroslav (vedoucí práce) ; Boušová, Iva (oponent)
AKTIVITA OCT A GLYKAČNÍ POŠKOZENÍ V MITOCHONDRIÍCH JATER KRYSY Lucie Merhutová Diplomová práce. Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové. 2007 Tato práce byla vytvořena na základě pokusů provedených v LBBCV (Laboratoři buněčné biologie a biochemie stárnutí) v rámci Univerzity Paris Diderot - Paris 7. Tým této laboratoře studuje mechanismy posttranslačních neenzymatických modifikací proteinů, zahrnutých v patofyziologii stárnutí. Glykace je jedním z mechanismů odpovědných za modifikaci nitrobuněčných makromolekul, které vedou ke ztrátě jejich struktury a funkce. Ornitin karbamoyltransferáza (OCT), druhý enzym močovinového cyklu, byl v předchozím výzkumu identifikován jako jeden z enzymů, které jsou významně glykovány uvnitř mitochondrií jater stárnoucích krys. Cílem této práce bylo sledovat glykaci OCT in vitro a ex vivo a její vliv na funkci tohoto enzymu. Vzorky purifikované OCT a extraktů mitochondriální matrix byly inkubovány s methylglyoxalem, jedním z nejreaktivnějších fyziologických glykačních činidel. U vzorků byla změřena enzymatická aktivita a byly podrobeny imunochemické analýze. Podařilo se nám prokázat, že methylglyoxal modifikuje OCT jak in vitro, tak ex vivo, a způsobuje velice rychlý a rozsáhlý pokles jeho enzymatické aktivity. Podle výsledků této studie vznikají...
|
host ::
RSS.