|
|
Prolylendopeptidasa z klíštěte Ixodes ricinus
Petrvalská, Olívia ; Konvalinka, Jan (vedoucí práce) ; Ryšlavá, Helena (oponent)
Klíšťata jsou významnými parazity a vektory patogenů. Na území České republiky je klíště obecné (Ixodes ricinus) nejrozšířenějším druhem, který přenáší lymskou boreliózu a klíšťovou encefalitidu. Proteasy klíšťat jsou potenciální molekulární cíle pro vývoj nových vakcín proti těmto parazitům. Tato práce se zaměřuje na biochemickou analýzu prolylendopeptidasy z klíštěte obecného, která dosud nebyla studována. Prolylendopeptidasa byla detekována v extraktu ze střevní tkáně klíštěte pomocí jednak měření enzymové aktivity a dále vizualizací na elektroforéze SDS-PAGE metodou fluorescenčního afinitního značení. Prolylendopeptidasa se pravděpodobně účastní procesu proteolytického trávení krevních proteinů, protože její specifická aktivita byla nejvyšší ve střevní tkáni a tato aktivita vzrůstala v průběhu procesu sání a zpracování potravy. Biochemická analýza ukázala, že enzymová aktivita prolylendopeptidasy je (1) závislá na volném cysteinovém zbytku v blízkosti aktivního místa, (2) optimální v oblasti pH 8-9, (3) selektivně inhibována peptidovými inhibitory Z-Ala-Pro-CMK a Z-Pro-Pro-CHO. Klíčová slova: prolylendopeptidasa, proteolýza, enzymová aktivita, substrátová specifita, klíště
|
|
|
Vliv zemědělské techniky na vznik biogenních aminů v silážích
Jandeková, Nela
Diplomová práce se zabývá vlivem zemědělské techniky na kvalitu bílkovinných siláží. V teoretické části se věnuje výrobě siláže, faktory ovlivňujícími výslednou kvalitu siláží, vznikem nežádoucích kvasných a proteolytických produktů a jejich vliv na zdraví zvířat. V praktické části bylo provedeno posouzení dvou odlišných technologií odběru siláže ze silážního žlabu a jejich vliv na sekundární degradaci siláže. Posuzování probíhalo v terénních podmínkách v podniku ZS Kosova Hora a.s. a ZOPOS Přestavlky a.s.
|
|
|
Vliv aditiv na kvalitu a zdravotní bezpečnost siláží jetelovin
Florianová, Viola
Cílem této diplomové práce bylo porovnat kvalitu bílkovinných siláží vyrobených z píce vojtěšky seté (Medicago sativa L.) – odrůd Holyna a Tereza a jetele lučního (Trifolium pratense L.) – tetraploidní odrůdy Amos a diploidní odrůdy Spurt o nízké sušině 16–20 %. Pokusné porosty byly založeny v roce 2013, píce byla sklízena ve třech následujících letech u vojtěšky a ve dvou následujících letech u jetele lučního. Hmota byla bezprostředně po sklizni silážována v pokusných mikrosilážních nádobách. Porovnány byly varianty kontrolní bez použití silážního přípravku a varianty silážované s přidáním biologického aditiva (SiloSolve 5 mg/kg) a chemického aditiva (Soft-Acid 3,5 ml/kg). Kvalita siláží byla porovnávána v rámci použitého druhu a odrůdy jeteloviny a z hlediska použitého aditiva. Vyhodnocen byl obsah organických živin a stravitelnost zelené hmoty před silážováním. V silážích byl vyhodnocen obsah organických živin, stravitelnost, kvalita výluhů siláží, ztráty a produkce silážních šťáv. Siláže z jetele lučního vykazovaly výrazně lepší kvalitu oproti silážím vojtěšky seté, měly statisticky průkazně (p <0,05) nižší hodnoty pH, obsah amoniaku, obsah kyseliny máselné i úroveň proteolýzy, odrůda Amos měla navíc statisticky průkazně vyšší obsah kyseliny mléčné oproti oběma odrůdám vojtěšky. Zásadní vliv na kvalitu silážních výluhů mělo chemické silážní aditivum. Siláže ošetřené chemickým aditivem vykazovaly statisticky průkazně (p <0,05) nižší pH, obsah amoniaku, kyseliny octové, ethanolu a úroveň proteolýzy ve srovnání s kontrolní variantou a variantou ošetřenou biologickým přípravkem.
|
|
|
Biogenní aminy v silážích
Jandeková, Nela
Biogenní aminy jsou nízkomolekulární dusíkaté látky, které vznikají působením mikroorganismů s dekarboxylázovou aktivitou. Takovéto mikroorganismy obsahují dekarboxylační enzymy, které katalyzují dekarboxylaci volných aminokyselin. Pro organismus jsou biogenní aminy nepostradatelné, protože zastávají mnoho důležitých funkcí např. růst buněk, regulace činnosti srdce atd. Ovšem při vyšších koncentracích ( > 100 mg/kg-1) může docházet k bolestem hlavy, hypotenzi, nevolnosti, závratím a skotu může docházet k laminitidám což jsou záněty paznehtní škáry. Cílem této práce bylo vytvořit ucelený přehled o vzniku, eliminaci a stanovení biogenních aminů v bílkovinných silážích. Vznik biogenních aminů je zapříčiněn zejména špatnými podmínkami silážování a skladování. Zkrmování takto znehodnocené siláže je pro skot zdravotně závadné a může docházet k přechodu biogenních aminů do živočišných produktů a tak ohrozit i konzumenty. Vznik biogenních aminů můžeme eliminovat dodržováním správných podmínek silážování a skladování a přidáním správných inokulantů. Stanovení biogenních aminů je poté prováděn chromatografickými metodami.
|
|
|
Prolylendopeptidasa z klíštěte Ixodes ricinus
Petrvalská, Olívia ; Konvalinka, Jan (vedoucí práce) ; Ryšlavá, Helena (oponent)
Klíšťata jsou významnými parazity a vektory patogenů. Na území České republiky je klíště obecné (Ixodes ricinus) nejrozšířenějším druhem, který přenáší lymskou boreliózu a klíšťovou encefalitidu. Proteasy klíšťat jsou potenciální molekulární cíle pro vývoj nových vakcín proti těmto parazitům. Tato práce se zaměřuje na biochemickou analýzu prolylendopeptidasy z klíštěte obecného, která dosud nebyla studována. Prolylendopeptidasa byla detekována v extraktu ze střevní tkáně klíštěte pomocí jednak měření enzymové aktivity a dále vizualizací na elektroforéze SDS-PAGE metodou fluorescenčního afinitního značení. Prolylendopeptidasa se pravděpodobně účastní procesu proteolytického trávení krevních proteinů, protože její specifická aktivita byla nejvyšší ve střevní tkáni a tato aktivita vzrůstala v průběhu procesu sání a zpracování potravy. Biochemická analýza ukázala, že enzymová aktivita prolylendopeptidasy je (1) závislá na volném cysteinovém zbytku v blízkosti aktivního místa, (2) optimální v oblasti pH 8-9, (3) selektivně inhibována peptidovými inhibitory Z-Ala-Pro-CMK a Z-Pro-Pro-CHO. Klíčová slova: prolylendopeptidasa, proteolýza, enzymová aktivita, substrátová specifita, klíště
|
|
|
Kinetic behavior of the NAD(P)H:Quinone oxidoreductase WrbA from Escherichia coli.
KISHKO, Iryna
Předkládaná dizertační práce se zabývá strukturně-funkčním vztahem multimerické oxidoreduktázy WrbA. Především vysvětluje neobvyklou kinetiku tohoto enzymu na molekulární úrovni, čímž poskytuje vzhled do fyziologické role tohoto enzymu v bakteriích. Multimerický enzym WrbA, jehož kofaktorem je FMN, katalyzuje oxidaci NADH přenosem dvou elektronů. Dle strukturálních a funkčních kritérii patří Wrba mezi bakteriální flavodoxiny, z evolučního hlediska se jedná o eukaryotickou oxidoreduktázu. Kinetické chování enzymu WrbA bylo studováno při různých podmínkách (teplota, pH atd.). Mechamismus kinetiky byl určen z parametrů KM a Vmax a potvrzen analizou inhibici produktami reakce. Krystalizace a proteolytické pokusy potvrzují funkční důležitost multimerizace enzymu WrbA a pomáhají pochopit fyziologickou roli tohoto enzymu na molekulární úrovni.
|
host ::
RSS.