|
| |
|
|
Podmínky propagace prionu v tkáňových kulturách
Hobzová, Kristýna ; Janoušková, Olga (vedoucí práce) ; Rusina, Robert (oponent)
Prionová onemocnění jsou smrtelná neurodegenerativní onemocnění postihu- jící savce včetně člověka, která jsou charakteristická akumulací patologické izoformy prionového proteinu (PrPTSE ) v mozku. Dříve byla pro studium pri- onových chorob běžně používána zvířata. V posledních letech se však začalo využívat i tkáňových kultur. Tkáňové kultury mají ve srovnání se zvířaty řadu výhod, mezi které patří možnost detailního studia biochemických pro- cesů spojených s prionovými onemocněními nebo senzitivní a rychlé metody pro detekci PrPTSE . Dosud však nebyl vytvořen spolehlivý in vitro model pro studium lidských prionových onemocnění. V této práci jsme se zaměřili na sledování efektivity přenosu a propagace různých prionových kmenů a na vliv kultivačních podmínek na tento pře- nos v neuronální buněčné linii CAD5, která je vysoce senzitivní k prionové infekci. Potvrdili jsme senzitivitu CAD5 buněk k myším adaptovaným prio- novým kmenům scrapie a přinesli nové zjištění o jejich schopnosti propagovat myší adaptované priony lidských kmenů a bovinní spongiformní encefalopa- tie. Senzitivitu CAD5 buněk k infekci různými prionovými kmeny jsme vyu- žili i v dalších částech této práce. V druhé části jsme se zaměřili na studium senzitivity buněk k prionové infekci a propagaci prionových kmenů za růz- ných...
|
|
|
Prionové nemoci - úloha iontů přechodných kovů
Malová, Zuzana ; Lukeš, Ivan (vedoucí práce) ; Moško, Tibor (oponent)
Prionová onemocnění jsou hojně rozšířené nemoci, které jsou charakteristické změnou struktury prionového proteinu PrPC (cellular, nativní forma) na PrPSc (scrapie, forma typická pro prionové onemocnění). Jedná se o změnu ze sekundární struktury α-helixu na β-skládaný list, který tvoří agregáty v mozku. Jednou z možností, proč dochází ke změně struktury je zvýšená koncentrace přechodných iontů (Zn(II), Cu(II), Fe(III)) v mozku, které se pak vážou na PrPC a ovlivňují jeho strukturu. Cílem této práce je syntéza jednoho potencionálního léčiva na bázi 2-aminothiazolů jeho modifikace k navázání fluorescenčních nebo radiochemických značek a v budoucnosti studium jeho možné interakce s ionty přechodných kovů. Klíčová slova: komplexy; makrocyklické ligandy; měď; prionová onemocnění
|
|
|
Podmínky propagace prionu v tkáňových kulturách
Hobzová, Kristýna ; Janoušková, Olga (vedoucí práce) ; Rusina, Robert (oponent)
Prionová onemocnění jsou smrtelná neurodegenerativní onemocnění postihu- jící savce včetně člověka, která jsou charakteristická akumulací patologické izoformy prionového proteinu (PrPTSE ) v mozku. Dříve byla pro studium pri- onových chorob běžně používána zvířata. V posledních letech se však začalo využívat i tkáňových kultur. Tkáňové kultury mají ve srovnání se zvířaty řadu výhod, mezi které patří možnost detailního studia biochemických pro- cesů spojených s prionovými onemocněními nebo senzitivní a rychlé metody pro detekci PrPTSE . Dosud však nebyl vytvořen spolehlivý in vitro model pro studium lidských prionových onemocnění. V této práci jsme se zaměřili na sledování efektivity přenosu a propagace různých prionových kmenů a na vliv kultivačních podmínek na tento pře- nos v neuronální buněčné linii CAD5, která je vysoce senzitivní k prionové infekci. Potvrdili jsme senzitivitu CAD5 buněk k myším adaptovaným prio- novým kmenům scrapie a přinesli nové zjištění o jejich schopnosti propagovat myší adaptované priony lidských kmenů a bovinní spongiformní encefalopa- tie. Senzitivitu CAD5 buněk k infekci různými prionovými kmeny jsme vyu- žili i v dalších částech této práce. V druhé části jsme se zaměřili na studium senzitivity buněk k prionové infekci a propagaci prionových kmenů za růz- ných...
|
|
|
Prionové proteiny a jejich interakce s těžkými kovy
Sedláčková, Eliška
Prionové proteiny jsou infekční glykoproteiny, které neobsahují nukleové kyseliny. Jejich specifická funkce v mozku však dosud není zcela objasněná. Konverze buněčné formy prionového proteinu (PrPC) na jeho patologickou izoformu (PrPSc) je považována za příčinu vzniku neurodegenerativních onemocnění. PrPC je glykoprotein, který interaguje s řadou dvojmocných kovových iontů, zejména s Cu2+ a Zn2+. Dalším proteinem, který má schopnost vázat kovy je i metalothionein (MT), který tvoří několik specifických forem. Z hlediska vzniku neurodegenerativních onemocnění je významná izoforma MT-3 obsažena v mozku. Jednou z funkcí MT-3 v mozku je účast na udržování optimální koncentrace kovových iontů. Cílem této práce bylo ověření přítomnosti exprese genů PrPC anebo MT-3 v bakteriálních buňkách E. coli. Dále jsme sledovali vliv přídavků kovů k bakteriální kultuře E. coli exprimující protein PrPC anebo MT-3. V závěru jsme se věnovali stanovení celkové koncetrace MT v bakteriálních buňkách E. coli exprimujících protein PrPC anebo MT-3. Veškerá stanovení proběhla v porovnání se standardním kmenem E. coli Bl21(DE3).
|
|
|
Detekce prionových proteinů a jejich interakce s kovy a metalothioneinem
Cardová, Alžběta
Prionová onemocnění vznikají konformační změnou buněčného prionového proteinu(PrPC) struktury alfa-helixu na jeho patologickou isoformu (PrPSc), která nabývá konformace beta-skládaného listu. Vlastnosti PrPC v mozku stále nejsou dostatečně prozkoumány, ale předpokládá se jeho afinita k iontům kovů. Dalším proteinem, který má kov-vázající vlastnosti je i metalothionein (MT). Mozkově specifická isoforma MT se nazývá MT-III a předpokládá se její účast na udržování koncentrace kovových iontů v mozku. Cílem této práce byla příprava rekombinantního buněčného prionového proteinu v E. coli. Dále využití tohoto proteinu k odhalení interakcí mezi ionty kovů(Cu, Zn), MT a PrPC pomocí metody diferenční pulzní voltametrie. Poslední část pak byla věnována stanovení hladiny MT-III v prion-infekčních a neinfekčních myších mozkových tkáních různých genotypů.
|
|
| |
host ::
RSS.