|
|
Příprava polymerního terapeutika cílícího na CD20 pozitivní B lymfomy a NK buňky
Hejl, Maxmilián ; Vaněk, Ondřej (vedoucí práce) ; Bělonožníková, Kateřina (oponent)
Maligní transformace B-buněk se projevuje výrazným zvýšením počtu povrchových znaků 20 (CD20, z angl. cluster of differentiation 20). Při studiu tohoto trendu byly představeny tzv. chimérické monoklonální protilátky cílící na CD20, které navozovaly apoptózu u B-lymfomů. Od zavedení prvního terapeutika rituximab bylo vytvořeno mnoho dalších, kdy některé se využívají k léčbě B-lymfomů dodnes. Bohužel v mnoha případech dochází k vývoji rezistence vůči těmto léčivům, a proto je příprava nových typů terapeutik stále aktuální. Tato práce si klade za cíl vytvořit makromolekulární konjugát typu polymer-protein schopný indukovat apoptózu u CD20 pozitivních leukemických linií. Za tímto účelem pracujeme s biologicky aktivními vektory, tzv. nanoprotilátkami (z angl. nanobody) anti-CD20. Jedná se o variabilní vazebnou doménu odvozenou od tzv. "heavy chain only" protilátek, které se vyskytují např. u lam či velbloudů. Ve srovnání s klasickými protilátkami jsou nanoprotilátky přibližně desetkrát menší, avšak jejich vazebná afinita vůči antigenu není pozměněna. Z tohoto důvodu jsou nanoprotilátky ideálními kandidáty pro připojení na polymerní nosič, kdy v této práci byl vybrán poly-N-[2-(hydroxypropyl)methakrylamid] (pHPMA). Pro připojení námi vyrobených nanoprotilátek byla vybrána transpeptidasová reakce...
|
|
| |
|
|
Příprava reportérové buněčné linie pro ověření biologické aktivity rekombinantních proteinů
Kozojedová, Petra ; Vaněk, Ondřej (vedoucí práce) ; Moserová, Michaela (oponent)
NK buňky patří mezi imunitní buňky zprostředkovávající nespecifickou imunitní odpověď organismu. Exprimují na svém povrchu řadu ligand-specifických aktivačních či inhibičních receptorů, mezi které patří přirozeně cytotoxický aktivační receptor NKp30, indukující po interakci s ligandem cytotoxickou odpověď. Receptor NKp30 má jednu ligand vazebnou imunoglobulinu podobnou extracelulární doménu s krátkou "stalk" doménou, která umožňuje oligomerizaci extracelulární domény receptoru NKp30, což vede k posílení interakce ligand- receptor a ovlivnění signalizace vedoucí k aktivaci buňky. Tato práce se zabývá přípravou konstruktů inspirovaných technologií chimerních antigenních receptorů nesoucích extracelulární doménu receptoru NKp30 se "stalk" doménou či pouze ligand vaznou doménu pro ověření biologické aktivity konstruktů po expresi na buněčné membráně. Byly připraveny dva vektory pro expresi konstruktů inspirovaných chimerními antigenními receptory s geny pro extracelulární doménu receptoru NKp30. Pro ověření biologické aktivity různých konstruktů byla plasmidová DNA kódující připravené konstrukty transientně transfekována do buněk Jurkat. Klíčová slova: NK buňky, NKp30, reportérová buněčná linie, rekombinantní protein, chimerní antigenní receptor
|
host ::
RSS.