|
|
Využití bezobratlého zvířecího modelu Galleria mellonella pro tvorbu kvasinkových biofilmových společenství
Doubová, Dominika ; Konečná, Klára (vedoucí práce) ; Janďourek, Ondřej (oponent)
ABSTAKT Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biologických a lékařských věd Studentka: Dominika Doubová Školitel: RNDr. Klára Konečná, Ph.D. Název diplomové práce: Využití bezobratlého zvířecího modelu Galleria mellonella pro tvorbu kvasinkových biofilmových společenství Cíl práce: Cílem této diplomové práce bylo blíže představit bezobratlý organismus, Galleria mellonella (G. mellonella), který lze v rámci vědeckého výzkumu využívat jako alternativní modelový organismus k obratlovcům. Model se jeví ekonomicky výhodnějším a morálně akceptovatelnějším, což je podstatný fakt v současné době, kdy stále roste tlak na upouštění testování zejména na obratlovcích. Experimentální část této práce se pak věnuje optimalizaci využití larvy G. mellonella jakožto modelového organismu v rámci výzkumu popáleninových zranění s fungálním infektem, vyvolaným kvasinkou Candida albicans. V rámci experimentů byly larvy využívány pro přípravu tkáňových explantů, na kterých probíhalo šetření formování monodruhového kvasinkového biofilmu. Metody: Před získáváním tkáňových explantů byly larvy usmrceny dekapitací. Za účelem omezení kontaminace tkáňových vzorků především střevní mikrobiotou larev byl optimalizován přístup odstranění trávicí trubice. Popáleninové rány byly indukovány post mortem pomocí...
|
|
|
Studium in vivo toxicity vybraných sloučenin s využitím bezobratlého modelu Galleria mellonella
Turinová, Veronika ; Konečná, Klára (vedoucí práce) ; Janďourek, Ondřej (oponent)
Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biologických a lékařských věd Studijní obor: Farmacie Autor: Veronika Záveská Vedoucí práce: RNDr. Klára Konečná, Ph.D. Název diplomové práce: Studium in vivo toxicity vybraných sloučenin s využitím bezobratlého modelu Galleria mellonella Cíl práce: Cílem této diplomové práce bylo sledovat vliv hmotnosti larvy, respektive jejího vývojového stadia, na konečné výsledky po podání vybrané dávky DMSO. V experimentální práci byl toxický dopad DMSO na larvy hodnocen nejen z pohledu mortality. Velká pozornost byla věnována i charakteristickým znakům, které jsou v průběhu testů na larvách Galleria mellonella běžně pozorovány, jako stupeň melanizace, dopad na aktivitu a formování zámotku. Metody: Pro jednotlivé experimenty byly na základě hmotnosti vytvořeny tři testované skupiny, vždy po šesti jedincích, jedna skupina larev s váhou 250 ± 10 mg, druhá skupina s váhou 350 ± 15 mg a třetí skupina o váze 450 ± 15 mg. Pomocí Hamiltonovy stříkačky byl do každé larvy administrován objem 10 µl testovacího roztoku o příslušné koncentraci DMSO přímo do haemocoelu přes poslední levou panožku. Administrována byla čtyři množství DMSO: 12,751 g DMSO/kg váhy larvy; 15,714 g DMSO/kg; 18,850 g DMSO/kg; 22,0 g DMSO/kg. Zahrnuty byly i dvě kontrolní skupiny,...
|
|
|
Comparative Analysis of Silk Proteins and Discovery of Novel Sericin Gene in Lepidopteran Moths
WU, Bulah Chia-Hsiang
This thesis focuses on the silk components of the Mediterranean moth, Ephestia kuehniella, and the discovery of a novel silk gene, P150/ser6, in the silkworm, Bombyx mori. We analyzed and described the cocoon silk components in both species. In the first publication, we combined transcriptomic, genomic, and proteomic approaches to identify silk proteins in E. kuehniella. In the second publication, we described the discovery of gene P150/sericin6 in B. mori based on microsynteny analysis.
|
|
|
Využití bezobratlého zvířecího modelu Galleria mellonella pro tvorbu kvasinkových biofilmových společenství
Doubová, Dominika ; Konečná, Klára (vedoucí práce) ; Janďourek, Ondřej (oponent)
ABSTAKT Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biologických a lékařských věd Studentka: Dominika Doubová Školitel: RNDr. Klára Konečná, Ph.D. Název diplomové práce: Využití bezobratlého zvířecího modelu Galleria mellonella pro tvorbu kvasinkových biofilmových společenství Cíl práce: Cílem této diplomové práce bylo blíže představit bezobratlý organismus, Galleria mellonella (G. mellonella), který lze v rámci vědeckého výzkumu využívat jako alternativní modelový organismus k obratlovcům. Model se jeví ekonomicky výhodnějším a morálně akceptovatelnějším, což je podstatný fakt v současné době, kdy stále roste tlak na upouštění testování zejména na obratlovcích. Experimentální část této práce se pak věnuje optimalizaci využití larvy G. mellonella jakožto modelového organismu v rámci výzkumu popáleninových zranění s fungálním infektem, vyvolaným kvasinkou Candida albicans. V rámci experimentů byly larvy využívány pro přípravu tkáňových explantů, na kterých probíhalo šetření formování monodruhového kvasinkového biofilmu. Metody: Před získáváním tkáňových explantů byly larvy usmrceny dekapitací. Za účelem omezení kontaminace tkáňových vzorků především střevní mikrobiotou larev byl optimalizován přístup odstranění trávicí trubice. Popáleninové rány byly indukovány post mortem pomocí...
|
|
|
Studium in vivo toxicity vybraných sloučenin s využitím bezobratlého modelu Galleria mellonella
Záveská, Veronika ; Konečná, Klára (vedoucí práce) ; Janďourek, Ondřej (oponent)
Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biologických a lékařských věd Studijní obor: Farmacie Autor: Veronika Záveská Vedoucí práce: RNDr. Klára Konečná, Ph.D. Název diplomové práce: Studium in vivo toxicity vybraných sloučenin s využitím bezobratlého modelu Galleria mellonella Cíl práce: Cílem této diplomové práce bylo sledovat vliv hmotnosti larvy, respektive jejího vývojového stadia, na konečné výsledky po podání vybrané dávky DMSO. V experimentální práci byl toxický dopad DMSO na larvy hodnocen nejen z pohledu mortality. Velká pozornost byla věnována i charakteristickým znakům, které jsou v průběhu testů na larvách Galleria mellonella běžně pozorovány, jako stupeň melanizace, dopad na aktivitu a formování zámotku. Metody: Pro jednotlivé experimenty byly na základě hmotnosti vytvořeny tři testované skupiny, vždy po šesti jedincích, jedna skupina larev s váhou 250 ± 10 mg, druhá skupina s váhou 350 ± 15 mg a třetí skupina o váze 450 ± 15 mg. Pomocí Hamiltonovy stříkačky byl do každé larvy administrován objem 10 µl testovacího roztoku o příslušné koncentraci DMSO přímo do haemocoelu přes poslední levou panožku. Administrována byla čtyři množství DMSO: 12,751 g DMSO/kg váhy larvy; 15,714 g DMSO/kg; 18,850 g DMSO/kg; 22,0 g DMSO/kg. Zahrnuty byly i dvě kontrolní skupiny,...
|
|
|
Zavedení bezobratlého zvířecího modelu, Galleria mellonella, pro studium účinnosti in vivo, stávajících a nově syntetizovaných, kandidátních antituberkulotik
Kubíček, Jiří ; Konečná, Klára (vedoucí práce) ; Němečková, Ivana (oponent)
Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biologických a lékařských věd Studijní obor: Farmacie Autor: Jiří Kubíček Vedoucí práce: RNDr. Klára Konečná, Ph.D. Název diplomové práce: Zavedení bezobratlého zvířecího modelu, Galleria mellonella, pro studium účinnosti in vivo, stávajících a nově syntetizovaných, kandidátních antituberkulotik. Cíl práce: Cílem této diplomové práce bylo představit bezobratlý organismus, Galleria mellonella (G. mellonella), Pyralidae, jakožto alternativní, ekonomicky výhodnější a morálně lépe akceptovatelný model pro studie účinnosti antituberkulotických látek in vivo. V experimentální části této práce byla úvodem věnována pozornost optimalizaci metodických kroků, které by měly vést k vyšší reprodukovatelnosti a validitě získaných dat. Byl hodnocen vliv disagregačního suplementu, tyloxapolu, na růst bakterie Mycobacterium aurum (M. aurum). Byl rovněž mapován růst tohoto mikrobiálního kmene v kultivačním médiu, Middlebrook 7H9, za účelem určit exponenciální fázi růstu. V rámci druhé části experimentů byla provedena infekce larev G. mellonella bakteriálním kmenem M. aurum, s následnou administrací vybraných, komerčně dostupných antituberkulotik (anti-TB). Metody: Pro mapování exponenciální fáze růstu bakterie M. aurum byla provedena kultivace...
|
|
|
Dissemination of Cordyceps fumosorosea by entomopathogenic Nematodes
HOPFGARTNER, Miriam
C. fumosorosea is an entomopathogenic fungus that has been used as a biocontrol agent against various insect hosts for some time. Its efficacy as an entomopathogen can be increased by joined application of the fungus with entomopathogenic nematodes. The aims of this thesis are to investigate the impact of the foraging strategy of different nematode species on the spore dispersal of C. fumosorosea and the significance the nematode's 2nd stage cuticle holds for spore dissemination. Additionally, novel approaches for the enhancement of spore transmission in soil environments via adhesives are explored.
|
|
|
Zavedení bezobratlého zvířecího modelu, Galleria mellonella, pro studium účinnosti in vivo, stávajících a nově syntetizovaných, kandidátních antituberkulotik
Kubíček, Jiří ; Konečná, Klára (vedoucí práce) ; Němečková, Ivana (oponent)
Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biologických a lékařských věd Studijní obor: Farmacie Autor: Jiří Kubíček Vedoucí práce: RNDr. Klára Konečná, Ph.D. Název diplomové práce: Zavedení bezobratlého zvířecího modelu, Galleria mellonella, pro studium účinnosti in vivo, stávajících a nově syntetizovaných, kandidátních antituberkulotik. Cíl práce: Cílem této diplomové práce bylo představit bezobratlý organismus, Galleria mellonella (G. mellonella), Pyralidae, jakožto alternativní, ekonomicky výhodnější a morálně lépe akceptovatelný model pro studie účinnosti antituberkulotických látek in vivo. V experimentální části této práce byla úvodem věnována pozornost optimalizaci metodických kroků, které by měly vést k vyšší reprodukovatelnosti a validitě získaných dat. Byl hodnocen vliv disagregačního suplementu, tyloxapolu, na růst bakterie Mycobacterium aurum (M. aurum). Byl rovněž mapován růst tohoto mikrobiálního kmene v kultivačním médiu, Middlebrook 7H9, za účelem určit exponenciální fázi růstu. V rámci druhé části experimentů byla provedena infekce larev G. mellonella bakteriálním kmenem M. aurum, s následnou administrací vybraných, komerčně dostupných antituberkulotik (anti-TB). Metody: Pro mapování exponenciální fáze růstu bakterie M. aurum byla provedena kultivace...
|
|
|
Transformace lilku bramboru genem kódujícím proteázový inhibitor SPI-2
Říhová, Barbora ; Fischer, Lukáš (vedoucí práce) ; Vítámvás, Pavel (oponent)
Předmětem této diplomové práce byla genetická modifikace lilku bramboru za účelem zvýšení jeho rezistence vůči patogenům a škůdcům. Při vývoji rezistence rostlin se často využívá podobných typů molekul, které rostliny samy využívají při svých obranných reakcích. V této práci byl pro genetickou modifikaci použit gen kódující zástupce inhibitorů serinových proteáz SPI-2, pocházející ze zavíječe voskového (Galleria mellonella). Jelikož se v předchozích pokusech týmu protein SPI-2 nepodařilo v transformovaných rostlinách detekovat, byla základní forma genu upravena přidáním Kozakové sekvence do okolí iniciačního kodónu, čímž se měla zvýšit iniciace translace a tím hladina proteinu. Pro transformaci byly připraveny dva konstrukty, kódující proteiny SPI-2-T a SPI-2-Y, které se liší jednou aminokyselinou, a to mírně pozměňuje jejich inhibiční aktivitu. Konstrukt SPI-2-T byl nejprve pomocí infiltrace s Agrobacterium tumefaciens vnesen do listů tabáku Nicotiana benthamiana. Oba konstrukty SPI-2-T a SPI-2-Y byly poté použity pro stabilní transformaci lilku bramboru (Solanum tuberosum cv. Desireé). Přítomnost proteinu se však v rostlinách nepodařilo prokázat, přestože byl vnesený gen transkribován a jeho sekvence v rostlinách byla ověřena sekvenací. Je tedy pravděpodobné, že protein není v cytoplazmě...
|
|
|
The effect of antimicrobial peptides on Saccharomyces cerevisiae and other yeast species
Makarova, Anna-Marie ; Hodek, Petr (vedoucí práce) ; Malcová, Ivana (oponent)
Z důvodu nadměrného užívání antibiotik, antimykotik a dezinfekčních prostředků v posledních desetiletích, byla u patogenních mikroorganismů vyvinuta značná rezistence vůči těmto látkám. Kvasinky rodu Candida představují čtvrtého nejčastějšího původce kvasinkových infekcí u hospitalizovaných pacientů a pro 40% z nich jsou letální. Díky mechanismu účinku rozdílným od zmíněných současně užívaných antimykotik a antibiotik se antimikrobiální peptidy stávají slibnými kandidáty pro vývoj nových léčiv proti kvasinkovým a bakteriálním infekcím. Tato práce se zabývá peptidy izolovanými z divokých včel a jejich syntetickými analogy a identifikuje ty nejefektivnější v boji proti nejčastějším druhům kvasinek Candida a modelové kvasince Saccharomyces cerevisiae. Byl testován a porovnáván antifungální efekt osmi peptidů v různých definovaných podmínkách. Za účelem identifikace případného synergistického působení antimikrobiálních peptidů a současně užívaných antimykotik byla zjišťována citlivost patogenních kvasinek k těmto konvenčním antifungálním látkám, peptidům, a k jejich kombinacím. Odpověď kvasinkových buněk na úrovni plasmatické membrány byla studována měřením relativního membránového potenciálu pomocí fluorescenční sondy (diS-C3(3)). Hyperpolarizační efekt byl pozorován pro každý jednotlivý peptid. Dále...
|
host ::
RSS.