|
|
Assay for testing inhibitors of α-synuclein amyloid fibril formation in cells
Galkin, Maksym ; Yushchenko, Dmytro (vedoucí práce) ; Hudeček, Jiří (oponent) ; Schneider, Bohdan (oponent)
Parkinsonova nemoc (PD) je celosvětově druhým nejčastějším neurodegenerativním onemocněním a dosud není vyléčitelná. Během PD je progresivní ztráta neuronů doprovázena tvorbou Lewyho tělísek - abnormálních intracelulárních agregátů, které jsou většinou tvořeny fibrilami proteinu α- synukleinu (αSyn) neuronech. Bylo zjištěno, že agregace αSyn koreluje s progresí PD. Slibným přístupem k léčbě onemocnění by tedy byla inhibice agregace αSyn a jejího následného patologického šíření. V předchozích letech byla vyvinuta široká škála inhibitorů agregace αSyn, včetně malých molekul, protilátek a proteinů cílících na konce fibril αSyn. Zatímco tyto inhibitory byly důkladně testovány v roztocích, jejich účinnost v testech na buňkách zůstala nejasná. Hlavním důvodem byla absence spolehlivého vysoce účinného testu pro hodnocení agregace αSyn v buňkách. Takový test je zvláště důležitý pro testování molekul cílících na amyloidní fibrily uvnitř buněk kvůli nespecifické a nežádoucí interakci s jinými buňčnými proteiny bohatými na β-list. Kromě toho může být aplikace inhibitorů značně omezena kvůli špatné penetraci přes buněčnou membránu a intracelulární degradaci. Hlavním cílem mé práce byl vývoj testu vhodného pro hodnocení účinnosti inhibitorů agregace αSyn v buněčném prostředí. Tento test by měl být schopen...
|
|
|
Development of inhibitors of amyloid fibril formation
Priss, Anastasiia ; Yushchenko, Dmytro (vedoucí práce) ; Schneider, Bohdan (oponent) ; Hudeček, Jiří (oponent)
α-Synuklein (α-Syn) je malý protein, který je přítomen v synapsích neuronů, kde pravděpodobně reguluje vezikulami zprostředkované uvolňování neurotransmiterů. Chybné poskládání α-Syn do amyloidních fibril je spojeno s progresí tzv. synukleinopatií, včetně Parkinsonovy choroby, což je druhá nejčastější neurodegenerativní porucha. Přes veškeré úsilí není dosud k dispozici léčba Parkinsonovy choroby, která by zastavila nebo zpomalila neurodegeneraci. Při hledání potenciálních kandidátů na léky bylo nalezeno několik přímých a nepřímých postupů jak ovlivnit agregaci α-Syn. Jednou z nejslibnějších strategií je nedávno popsaná inhibice růstu fibril α-Syn blokováním jejich konců. Tento přístup otevřel cestu k návrhu inhibitorů fibrilizace, které by byly efektivní při nízkých koncentracích. Nicméně racionální design takových inhibitorů dosud nebyl proveden. Cílem této práce je vývoj vysoce účinných a specifických inhibitorů fibrilizace α-Syn. Proto byla provedena pečlivá analýza vztahu mezi strukturou a aktivitou inhibitorů blokujících konec fibril. Klíčovým faktorem pro inhibiční aktivitu byla definována afinita inhibitoru ke konci fibrily. Pomocí současných znalostí struktury fibril jsme navrhli inhibitory, které jsou schopné vázat se na konce fibril s afinitou o řád vyšší než má monomer α-Syn. Tyto...
|
|
|
Investigation and inhibition of α-synuclein aggregation
Afitska, Kseniia ; Yushchenko, Dmytro (vedoucí práce) ; Žídek, Lukáš (oponent) ; Bařinka, Cyril (oponent)
Alfa-synuklein (AS) je malý, vnitřně neuspořádaný protein exprimovaný v neuronech a hojně přítomný v synapsích, kde se podílí na regulaci transportu proteinů zprostředkovaném synaptickými vezikuly. Chybné poskládání AS do amyloidních fibril je klíčovým procesem v progresi Parkinsonovy choroby (PD), druhé nejběžnější neurodegenerativní nemoci, která je dosud neléčitelná. Inhibice agregace AS a blokování šíření těchto fibril z buňky do buňky je slibná strategie pro léčbu PD. Racionální design těchto inhibitorů však zůstává komplikovaný vzhledem k nedostatku detailních znalostí o mechanismech agregace. Cílem této práce bylo proto získat hlubší znalosti o agregaci AS a aplikovat je na vývoj inhibitorů fibrilizace. Při studiu mechanismů agregace AS jsem nejprve zjistila, že kritická koncentrace AS pro růst fibril je o řád nižší než kritická koncentrace AS pro počáteční tvorbu fibril z monomerů. Zkoumala jsem rozpad fibril při koncentracích nižších než Kd a charakterizovala jsem agregaci AS při mikromolárních koncentracích. Poté jsem zkoumala, jak různé modifikace C-terminálu AS (zejména extenze o různé velikosti a náboji) ovlivňují růst fibril a ukázala jsem, že fúze AS s proteiny, jako je GFP, potlačují agregaci AS. Na základě těchto zjištění jsem ve spolupráci s kolegy vytvořila první racionálně...
|
host ::
RSS.