|
|
Matrix assisted laser desorption ionization for characterization of higher molecular thiols in biological samples
Merlos Rodrigo, Miguel Ángel
Mezi nejlépe charakterizované kov-vázající ligandy v buňkách patří fytochelatiny (PC) a metalothioneiny (MT). PC a MT jsou rozdílné třídy molekul, které jsou bohaté na obsah cysteinů. PC jsou enzymaticky syntetizované peptidy, zatímco MT jsou geneticky kódované polypeptidy. Pro analýzu PC, MT a komplexů těžkých kovů bylo v rozdílných studiích využito několik analytických metod. V současné době je metoda, spojující matricí asistovanou laserovou desorpci/ionizaci s hmotnostním analyzátorem doby letu (MALDI-TOF MS), známá pro její snadnou obsluhu a pro využívání levných matric a chemikálií pro přípravu vzorků. Mnohem důležitější ale je, že je tuto metodu lze plně automatizovat. V této studii jsme určili vhodné podmínky pro charakterizaci fytochelatinu PC2 a komplexu Cd-PC2 pomocí MALDI-TOF MS. Dále byly exprimovány geny lidských metalothioneinů MT2A a MT3klonováním v heterologních organismech (Escherichia coli). Dále byl izolován MT2 protein z králičích jater. MT byly purifikovány pomocí rychlé proteinové kapalinové chromatografie (FPLC). Předkládaná práce demonstruje využití MALDI-TOF MS pro charakterizaci různých isoforem MT. Bylo využito také elektrochemických metod pro potvrzení vzniku thiolových komplexů s kovovými ionty. Navíc byl navržen snadno použitelný nástroj pro izolaci MT, využívající jednoduchou a plně automatizovanou elektrochemickou detekční techniku
|
|
|
Vliv taurinu na biochemické ukazatele v orgánech laboratorních potkanů
Mrázková, Martina
Cílem diplomové práce bylo zhodnotit vliv různých hladin taurinu na antioxidační status organismu laboratorních potkanů. Sledovat koncentraci taurinu a jednotlivých aminokyselin ve vybraných orgánech. Diplomová práce hodnotí vliv taurinu v játrech a mozku laboratorních potkanů, po jeho aplikaci v krmých směsích. Byl sledován vliv taurinu na poměr GSH/GSSG, koncentraci taurinu a metalothioneinu. Do pokusu bylo použito 48 samců potkanů druhu Wistar, kteří byli rozděleni do osmi skupin (n=6). Během čtyř týdnů, byly potkanům podávány krmné směsi obohaceny o taurin v dávce 0, 1000, 1500, 2000 2500, 3000, 3500 a 4000 mg/kg/diety. Zvířata příjmala dietu a pitnou vodu ad libidum. Průměrná spotřeba krmné směsi za den byla 35 g. Aplikací taurinu došlo ke zvýšení koncentrace taurinu v organismu, což pozitivně působí na antioxidační mechanismy organismu. Ovšem nemůžeme potvrdit, že doplnění taurinu do diety ovlivňuje koncentrace metalothioneinu a glutathionu v organismu. V mozku byla zjištěn zvýšený poměru GSH/GSSG a snížení koncentrace metalothioneinu. Naopak tomu bylo v játrech, kdy došlo ke snížení poměru GSH/GSSG a zvýšení koncentrace metalothioneinu.
|
|
|
Čipová a kapilární elektroforéza pro výzkum rakoviny
Hájková, Tereza ; Babula, Petr (oponent) ; Provazník, Ivo (vedoucí práce)
Práce se zabývá problematikou nádorového onemocnění a jeho vznikem. Karcinom prostaty je druhý nejzávažnější karcinom u mužů, je důležité zaměřit se na včasnou detekci. Tato práce pojednává o proteinech, které jsou nebo by mohly být využity jako potenciální nádorové markery. Například v současnosti běžně používaný prostatický specifický antigen, ale nově i metalothionein. Metalothionein je protein vyskytující se v rostlinné i v živočišné říši ve čtyřech základních isoformách. Existuje předpoklad, že obsah jednotlivých isoforem, případně jejich vzájemný poměr, má určitý diagnostický potenciál, který by mohl být využitelný v praxi. Z tohoto důvodu jsou vyvíjeny a studovány metody pro specifickou a citlivou analýzu jednotlivých isoforem. V této práci je pro separaci isoforem využita kapilární elektroforéza a jsou diskutovány vlivy jednotlivých parametrů (druh základního elektrolytu, jeho pH, velikost separačního napětí a tak dále) na výslednou separaci.
|
|
|
Diferenční pulzní voltametrie pro detekci metallothioneinu
Postránecká, Tereza ; Prášek, Jan (oponent) ; Provazník, Ivo (vedoucí práce)
Metalothionein (MT) je protein s charakteristickým aminokyselinovým složením, který díky svým thiolovým skupinám dokáže vázat ionty kovů a zapojovat se tak do homeostázy těchto iontů v organismu. Protein má svůj význam i v procesu karcinogeneze, mohl by být vhodným markerem u některých typů nádorů. MT má v organismech mnoho specifických funkcí. Může být zkoumán několikerými technikami. Běžně používanou metodou stanovení koncentrace MT je elektroanalýza. Konkrétněji se v této práci zaměřuji na diferenční pulzní voltametrii za využití Brdičkovy reakce.
|
|
|
Zpracování elektrochemických signálů metalotioneinu z Brdičkovy reakce
Dvořáček, Jiří ; Hynek, David (oponent) ; Valla, Martin (vedoucí práce)
Tato práce se zabývá problematikou průběhu Brdičkovy elektrochemické reakce a možnostmi jejího popisu a zpracování naměřeného katalytického signálu. První část práce se zabývá úvodem do problematiky, samostatným vznikem této reakce, objevení vlastností metalotioneinu, funkcí v lidském těle, možnostmi popisu a aplikací shlukové analýzy na naměřený elektrochemický signál metalotioneinu z Brdičkovy reakce a detekci zvoleného vrcholu. V druhé části je na základě požadavků zhotoven program umožňující vyhodnocení Brdičkovy reakce pracující na základě dvou detekcí z načteného signálu.
|
|
| |
|
|
Studium vlivu těžkých kovů na biochemický profil u vodních živočichů
Šanda, Radek
Tato práce se zabývá studiem thiolové sloučeniny (metalothionein) a stanovení jejího množství ve tkáních pstruha duhového (Oncorhynchus mykiss). Tkáně této ryby byly vystaveny několika koncentracím arsenu. Koncentrace metalothioneinu byla měřena elektrochemicky pomocí diferenční pulzní voltametrie (DPV) s využitím Brdičkovy reakce. Metalothionein, patřící mezi nízkomolekulární thioly, má velmi výrazné detoxikační účinky. Stanovení koncentrace tohoto proteinu by mohlo být využito ke stanovení kvality, ale především zdravotní nezávadnosti rybího masa.
|
|
|
Detekce prionových proteinů a jejich interakce s kovy a metalothioneinem
Cardová, Alžběta
Prionová onemocnění vznikají konformační změnou buněčného prionového proteinu(PrPC) struktury alfa-helixu na jeho patologickou isoformu (PrPSc), která nabývá konformace beta-skládaného listu. Vlastnosti PrPC v mozku stále nejsou dostatečně prozkoumány, ale předpokládá se jeho afinita k iontům kovů. Dalším proteinem, který má kov-vázající vlastnosti je i metalothionein (MT). Mozkově specifická isoforma MT se nazývá MT-III a předpokládá se její účast na udržování koncentrace kovových iontů v mozku. Cílem této práce byla příprava rekombinantního buněčného prionového proteinu v E. coli. Dále využití tohoto proteinu k odhalení interakcí mezi ionty kovů(Cu, Zn), MT a PrPC pomocí metody diferenční pulzní voltametrie. Poslední část pak byla věnována stanovení hladiny MT-III v prion-infekčních a neinfekčních myších mozkových tkáních různých genotypů.
|
|
| |
|
| |
host ::
RSS.