|
|
Structural insights into 14-3-3 dependent regulation of ubiquitin ligase Nedd4-2
Tekel, Andrej ; Obšilová, Veronika (vedoucí práce) ; Bouřa, Evžen (oponent)
Cesta eukaryotického proteinu obvykle začíná v ribozomu a končí v proteazomu. To, co se odehrává mezi tím, představuje velkou rozmanitost funkcí, které umožňují život, ale osudem většiny proteinů je, že jsou nakonec rozloženy. Klíčovou součástí tohoto procesu jsou ubikvitinové ligázy. Cílem této práce je poskytnout bližší vhled do molekulární podstaty regulace jednoho takového proteinu, Nedd4-2. Nedd4-2 je členem podrodiny Nedd4 v rámci rodiny ubikvitinových ligáz HECT. Jeho nejznámějším cílem ubikvitinace je epitelový sodíkový kanál ENaC. Bylo zjištěno, že 14-3-3 protein a vápník modulují tuto a další interakce Nedd4-2, ale stále zbývá zodpovědět mnoho otázek týkající se strukturní podstaty této regulace. S cílem přinést více poznatků na molekulární úrovni jsme provedli měření pomocí maloúhlového rozptylu rentgenového záření, analytické ultracentrifugace a vodíko- deuteriové výměny. Naše závěry přinášejí nové poznatky v oblasti ubikvitinových ligáz a lze je například uplatnit v nové perspektivní oblasti návrhu léčiv typu PRO- TAC. Klíčová slova: Nedd4-2, protein 14-3-3, vápník, interakce proteinů
|
|
|
Investigation of HSP70 oligomerization by structural mass spectrometry
Melikov, Aleksandr ; Novák, Petr (vedoucí práce) ; Jeřábek, Petr (oponent)
Příbuzný protein teplotního šoku (HSC70) je 71 kDa chaperon patřící ke všudypřítomné rodině proteinů teplotního šoku 70 (Hsp70). Zástupci této proteinové rodiny jsou považováni za molekulární stroje s ATPázovou aktivitou, které usnadňují správné sbalování prostorové struktury proteinů jak za normálních, tak i za stresových podmínek (hypoxie, tepelný šok, či kolísání pH). HSC70 navíc funguje jako enzym rozbalující vrstvu triskelionu na povrchu klatrinových váčků. Další rolí HSC70 je např. zamezení agregace proteinů, asistence při maturaci polypeptidového řetězce a usnadnění transportu proteinů do organel, jako jsou endoplazmatické retikulum a mitochondrie. HSC70 se účastní směrování proteinů určených k degradaci do lysosomů a v mnoha dalších kriticky důležitých buněčných procesech spojených s homeostází proteinů. Tudíž, regulace HSC70 a jiných proteinů HSP70 je považována za velmi důležitou, obzvlášť v kontextu buněčného stresu. Na základě experimentálních pozorování byl navržen mechanismus inaktivace za pomoci oligomerizace. Dimery a trimery proteinů Hsp70 byly identifikovány jak u prokaryotických, tak u eukaryotických homologů. Byla také diskutována role proteinového kofaktoru Hsp40 ve stimulaci oligomerizaci Hsp70 do vyšších oligomerů. Tento a jiné možné modely oligomerizace "divoké" varianty...
|
|
|
Interaction of proteins Clock and Cycle, Preparation of constructs for subsequent expression in S2 cells
FIŠEROVÁ, Simona
Cílem práce byla příprava konstruktů skládajících se z aktinového nebo Hsp70 promotoru, kompletní kódovací DNA sekvence genů Clock a cycle z ploštice (Pyrrhocoris apterus) a ze zeleného nebo červeného fluorescenčního proteinu, pomocí kterých byly sekvence označeny. Takto připravené konstrukty budou v budoucnu použity pro studium interakcí proteinů Clock a Cycle in vivo v Schneider S2 buňkách. Dodatečným cílem práce bylo zkoumání efektivity, spolehlivosti a aplikovatelnosti použité metody "Gateway cloning".
|
|
| |
host ::
RSS.