|
|
Polymethakrylátové monolitické kolony v kapilární kapalinové chromatografii
Grafnetter, Jan ; Coufal, Pavel (vedoucí práce) ; Pacáková, Věra (oponent) ; Ventura, Karel (oponent) ; Sýkora, David (oponent)
3 Conclusions This Thesis gives chromatographic and structural characteristics of the butyl methacrylate monolithic columns prepared for the capillary liquid chromatography. Results of this Thesis clearly demonstrate the possibility of preparation of capillary monolithic columns with a good repeatability of the principal chromatographic parameters. A completely new technique for preparation of the monolithic columns for use in the on-column detection mode was introduced. Different photometric detection modes were applied to monolithic capillary columns in CLC. The advantages and disadvantages of the on-column detection mode in comparison to the additional detection capillary were studied and described. It was shown that the best separation and the most sensitive quantification in the short analysis time could be reached by using the monolithic columns with detection window placed directry on the separation capillary, just after the stationary phase or within the monolith. The attempts leading to preparation of chiral monolithic stationary phases, which would allow enantioseparation of selected chiral analýes' were not totally successful. No time was left to find the suitable chromatographic conditions for enantioseparations. \ I
|
|
|
Nové postupy v metabolomické analýze biotekutin
Řimnáčová, Lucie ; Čabala, Radomír (vedoucí práce) ; Feltl, Ladislav (oponent) ; Sýkora, David (oponent)
Předmětem této práce bylo studium reaktivity protických metabolitů s chlormravenčany a jejich využití v metabolomické GC-MS analýze biotekutin. Tento výzkum byl veden ve třech samostatných studiích a jeho výsledkem jsou tři nové, originální metody pro GC-MS stanovení protických nízkomolekulárních metabolitů v biologickém materiálu, především biotekutinách. První studie zkoumá objev rychlé derivatizace alicyklických hydroxylových skupin fluoralkylchlormravenčany (FCF) v bezvodém prostředí [1]. Působením FCF dochází k okamžité přeměně této hydroxylové skupiny na karbonát a tento krok lze snadno spojit s mikroextrakcí kapalina- kapalina (LLME) vznikajících derivátů do organické fáze. Reakce alicyklické hydroxy skupiny s FCF byla testována celkem na 12 klinicky významných steroidech a 4 tokoferolech. Byly popsány analytické vlastnosti zkoumaných analytů a metoda byla validována pro stanovení 6 diagnostických sterolů a 4 tokoferolů v lidském séru a plodové vodě. Nová metoda byla dále úspěšně použita k identifikaci a stanovení sterolů a tokoferolů ve tkáních hmyzu, ruměnice pospolné (Pyrrhocoris apterus) [2]. Druhá studie byla zaměřena na zkoumání reaktivity protických, zejména kyselých močových metabolitů s FCF, především s heptafluorbutylchlormravenčanem (HFBCF). Technikami GC-MS a LC- HRMS byly...
|
|
|
Aplikace solvatačního modelu k popisu retence vybraných látek v kapalinové a plynové chromatografii
Jirkal, Štěpán ; Čabala, Radomír (vedoucí práce) ; Feltl, Ladislav (oponent) ; Sýkora, David (oponent)
(CZ) Solvatační model (LSER) byl použit ke studiu retenčního chování látek v kapalinové a plynové chromatografii. V první kapitole byl studován popis retence 21 látek solvatačním modelem na reverzní stacionární fázi, v širokém rozmezí složení mobilní fáze methanol- voda a acetonitril-voda. Retence aromatických sloučenin byla obecně lépe popsána solvatačním modelem, než alifatických sloučenin. Byl sledován vliv jednotlivých analytů, použitých pro formulaci LSER modelu, na celkovou schopnost popisu retence modelem. Odlišných výsledků v odhadu retence bylo dosaženo použitím regresního souboru látek obsahujícím pouze sloučeniny aromatické, nebo naopak jen alifatické. Rozdílné výsledky také poskytoval solvatační model formulovaný pouze z kyslíkatých derivátů, nebo naopak dusíkatých derivátů organických látek. Druhá kapitola práce, tematicky zaměřená na plynovou chromatografii, se zabývala popisem retence 152 izomerů C5-C8 alkenů LSER modelem. Solvatační deskriptor L alkenů byl získán odhadovými metodami Havelec-Ševčík (HS) a Platts-Butina (PB), deskriptor E byl přímo vypočten podle jeho definice. Na základě použitých metod k odhadu deskriptorů byly sestaveny dva modely k popisu retence alkenů, model HS a model PB. Byla zjištěna vyšší chyba odhadu retence pro cis izomery alkenů, počítané modelem HS. Po...
|
|
|
Charakterizace nových chirálních separačních systémů pro použití v HPLC
Vozka, Jiří ; Tesařová, Eva (vedoucí práce) ; Sýkora, David (oponent) ; Petr, Jan (oponent)
Souhrn Dizertační práce je zaměřena na fyzikálně-chemickou charakterizaci interakčních mechanizmů chirálních stacionárních fází na bázi derivatizovaných cyklofruktanů. Správná interpretace retenčních a enantiodiskriminačních interakcí usnadní vývoj, validaci a optimalizaci enantioselektivních metod využívajících tyto fáze. Nejdříve byly studovány interakční mechanizmy tří komerčně dostupných chirálních stacionárních fází na bázi derivatizovaných cyklofruktanů v podmínkách normálního separačního módu kapalinové chromatografie. Jednalo se o stacionární fáze na bázi dimethylfenyl karbamátu cyklofruktanu 7, R-naftylethyl karbamátu cyklofruktanu 6 a izopropyl karbamátu cyklofruktanu 6. Jako výchozí přístup byl zvolen model lineárních vztahů volných energií. Na základě tohoto modelu byly jako hlavní interakce přispívající v různé míře k retenci ve všech separačních systémech s cyklofruktanovými stacionárními fázemi určeny: schopnost poskytovat vodík pro tvorbu vodíkové interakce a dipolarita/polarizibilita, disperzní interakce pak retenci v různé míře snižují. Pro objasnění vlivu sacharidového skeletu na chirální separace byly následně cyklofruktanové stacionární fáze porovnány s cyklodextrinovými analogy. Cyklofruktanové chirální stacionární fáze prokázaly v podmínkách normálního módu mimořádnou...
|
|
|
Liquid chromatography methods for analysis of microbial secondary metabolites of bioactive nature
Tylová, Tereza ; Olšovská, Jana (vedoucí práce) ; Cvačka, Josef (oponent) ; Sýkora, David (oponent)
(CZ) Tato disertační práce je zaměřena na vývoj nových analytických metod sestávajících z extrakce tuhou fází (SPE) použité pro purifikaci a zkoncentrování analytů a jejich stanovení pomocí ultra-vysokoúčinné kapalinové chromatografie (UHPLC) s detektorem diodového pole (DAD) a/nebo hmotnostní detekcí za použití analyzátoru doby letu (ToFMS). Většina předkládaných výsledků byla publikována v prestižních mezinárodních časopisech. Součástí práce jsou také významná dosud nepublikovaná data. Kromě modelových srovnání různých typů kolonových materiálů pro ultra-vysokoúčinné separace představuje práce také významné aplikace vyvinutých metod. Zatímco první část práce je věnovaná stanovení antibiotik jakožto kontaminantů životního prostředí zodpovědných za vývoj a šíření bakteriální rezistence, druhá část se věnuje analýze a hledání biologicky aktivních sekundárních metabolitů z přírodních zdrojů, které mohou být v budoucnu využity jako nová antibiotika. První část disertační práce je zaměřena na stanovení reziduálních antibiotik v různých matricích (prasečí mrva, odpadní voda, povrchová voda). Jako analyty byla vybrána nejpoužívanější humánní a veterinární antibiotika. Metody sestávající z UHPLC-DAD a UHPLC-ToFMS a dále z SPE nebo extrakce kapalina-kapalina (LLE) byly validovány a pro kvantifikaci byly...
|
|
|
Využití moderních separačních a spektrometrických metod k identifikaci lipidomu z biologického vzorku
Havelková, Eva ; Bosáková, Zuzana (vedoucí práce) ; Sýkora, David (oponent)
Lipidomika je jedna z oblastí metabolomiky, která se v poslední době, díky rozvoji chemicko-analytických metod hlavně pak spektrometrických, těší velké pozornosti. Tato práce se věnuje testování extrakčních technik lipidů, optimalizaci preseparace lipidů a jejich chromatografie pro hmotnostní spektrometrii. Byly získány fragmentační vzory zástupců čtyř nejvíce zastoupených tříd glycerolipidů (PC, PE, TG, DG) v navrhovaném systému a srovnány s dostupnou literaturou. Pro extrakci byla určena jako vhodnější Folchova metoda využívající směs chloroformu a methanolu. Preseparační technika SPE napomáhá k identifikaci lipidů. Optimalizace této metody proběhla ve smyslu zvýšení její výtěžnosti a to zejména ve frakci polárních lipidů. HPLC metoda je založena na mobilních fázích methanolu s amonným pufrem, vodě a isopropanolu. Separace byla testována na třech kolonách založených na různých typech sorbentů (Gemini, Syncronis a Kinetex) a byla hodnocena z hlediska opakovatelnosti, tvaru a šířky peaků jednotlivých analytů. Jako nejlepší byla vybrána varianta, která využívala vmíchání 20% vody do systému. Kolona Kinetex se osvědčila jako nejlepší. Robustnost navržené metody a kolony byla testována na vzorcích rybího masa se zaměřením na detekci omega-3 nenasycených mastných kyselin. Hlavním výsledkem bylo zjištění, že...
|
host ::
RSS.