|
|
Characterization of human warfarin reductase
Sokolová, Simona ; Malátková, Petra (vedoucí práce) ; Skarka, Adam (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Simona Sokolová Školiteľ: PharmDr. Petra Malátková, Ph.D. Názov diplomovej práce: Charakterizácia ľudskej warfarin reduktázy Warfarin je v súčasnosti terapeuticky široko používané antikoagulačné liečivo. Vzhľadom na úzke terapeutické okno warfarinu je dôležité kompletne poznať jeho metabolizmus v ľudskom tele. Na metabolizme warfarinu sa podieľajú oxidačné, redukčné a konjugačné reakcie. Redukčný metabolizmus warfarinu zatiaľ nebol podrobne študovaný. Premenou postrannej karbonylovej skupiny warfarinu vzniká redukovaný metabolit warfarin-alkohol. Je známe, že ľudské cytosolické a mikrozomálne frakcie vykazujú redukčnú aktivitu voči warfarinu, ale konkrétne enzýmy katalyzujúce redukciu nie sú zatiaľ známe. Cieľom tejto práce bolo identifikovať enzým/enzýmy podieľajúce sa na redukcii warfarinu a stanoviť kinetiku redukčných premien. Ľudká cytosolická a mikrozomálna pečeňová frakcia a rekombinantné enzýmy AKR1A1, AKR1B1, AKR1B10, AKR1C1, AKR1C2, AKR1C3, AKR1C4, CBR1 a CBR3 boli inkubované s warfarinom o rôznych koncentráciách. UHPLC kvantifikáciou vzniknutého warfarin-alkoholu boli stanovené špecifické aktivity jednotlivých enzýmov a frakcií. Bola potvrdená aktivita cytosolickej a mikrozomálnej...
|
|
|
Analýza významu genetických faktorů pro prognózu a predikci léčby nádorových onemocnění.
Šůsová, Karolína ; Wsól, Vladimír (vedoucí práce) ; Malátková, Petra (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Karolína Šůsová Školitel: Prof. Ing. Vladimír Wsól, Ph.D. Název diplomové práce: Analýza významu genetických faktorů pro prognózu a predikci léčby nádorových onemocnění Kolorektální karcinom (KRK) je jedním z nejčastějších nádorových onemocnění ve světě a v ČR. Existuje mnoho příčin tak vysoké prevalence a mortality. Obecně se dá říct, že úroveň povědomí o rizikových faktorech či primární prevenci je velice nízká. Léčbu KRK ztěžuje inoperabilita nádoru zapříčiněná diagnostikou v pozdním stádiu, což také snižuje dobu přežití. V chemoterapii KRK je zlatým standardem 5 - fluorouracil s leukovorinem. Velký úspěch má v paliativní terapii také cílená léčba, která prodlužuje dobu přežití. Avšak mnoho pacientů na indikovanou adjuvantní nebo paliativní chemoterapii nereaguje optimálně. Příčinou je léková rezistence. Jedním z mnoha faktorů způsobujících lékovou rezistenci je transport cytostatik z buňky ven, za což jsou odpovědny transportní proteiny nádorových buněk, tzv. ABC transportéry. V souvislosti s jinými typy nádoru se podařilo zjistit odlišné hladiny exprese genů ABC transportérů v nádorových tkáních. Cílem této studie je nalézt markery u kolorektálního karcinomu, které by zlepšili prognózu a léčbu...
|
|
|
In vitro biotransformation study of fenofibric acid
Kanavi, Matthildi ; Malátková, Petra (vedoucí práce) ; Navrátilová, Hana (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Student: Matthildi Kanavi Školitel: Pharm.Dr. Petra Malátková, Ph.D. Název diplomové práce: In vitro biotransformační studie fenofibrové kyseliny Fenofibrová kyselina je hypolipidemikum, které působí prostřednictvím PPARα, a používá se k léčbě různých typů dyslipidemií. Je to aktivní metabolit fenofibrátu, ale může být také podáván přímo. Co se týče metabolismu, většina fenofibrové kyseliny je konjugována s glukuronovou kyselinou zatímco malé množství je přeměněno na redukovaný metabolit. Redukovaná fenofibrová kyselina je také aktivní látka. Enzymy účastnící se tohoto redukčního metabolického procesu nebyly dosud identifikovány. Předkládaná studie zkoumala karbonylovou redukci v subcelulárních frakcích z lidských jater a za použití cytosolických karbonyl-redukujících enzymů z nadrodiny AKR a SDR. Enzymatickou aktivitu způsobující redukci fenofibrové kyseliny vykazoval jak cytosol tak mikrosomy a bylo zjištěno, že cytosol má větší afinitu zatímco rychlost redukce je větší v mikrosomech. Z devíti testovaných enzymů byla u pěti reduktas nalezena aktivita k redukci fenofibrové kyseliny. Největší aktivitu vykazoval CBR1 následován AKR1C3, AKR1C2, AKR1C1 a AKR1B1. Naše zjištění o významném přispění mikrosomální...
|
|
|
Klonování, exprese a purifikace mykobakteriální dihydrofolátreduktasy
Šedivá, Kateřina ; Novotná, Eva (vedoucí práce) ; Malátková, Petra (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Řešitel: Kateřina Šedivá Školitel: Mgr. Eva Novotná, Ph.D. Název diplomové práce: Klonování, exprese a purifikace mykobakteriální dihydrofolátreduktasy Dihydrofolátreduktasa je enzym nezbytný pro metabolismus kyseliny listové - katalyzuje redukci dihydrofolátu na tetrahydrofolát. Tetrahydrofolát je důležitým kofaktorem při reakcích přenášejících jednouhlíkaté zbytky. Hraje klíčovou roli v syntéze DNA, RNA a proteinů. Dihydrofolátreduktasa se nachází také u M. tuberculosis. Tato bakterie je nejčastějším původcem tuberkulózy u lidí. Právě dihydrofolátreduktasa by mohla být potenciálním cílem pro vývoj nových antituberkulotik. Rekombinantní protein dihydrofolátreduktasa byl připraven v několika krocích. Sekvence kódující protein byla nejprve amplifikována polymerásovou řetězovou reakcí. Ligací namnoženého úseku DNA a plazmidu pET-28b(+) vznikl rekombinantní plazmid, který byl metodou tepelného šoku transformován do kompetentních buněk E. coli kmen HB101. K expresi proteinu byly použity buňky E. coli kmen BL21(DE3). Samotná exprese byla indukována přidáním isopropyl-β-D-thiogalaktopyranosidu (IPTG). Získaný rekombinantní protein byl izolován a purifikován metodou afinitní chromatografie. Metodou dle Bradfordové...
|
|
|
Characterization of human warfarin reductase
Sokolová, Simona ; Malátková, Petra (vedoucí práce) ; Skarka, Adam (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Simona Sokolová Školiteľ: PharmDr. Petra Malátková, Ph.D. Názov diplomovej práce: Charakterizácia ľudskej warfarin reduktázy Warfarin je v súčasnosti terapeuticky široko používané antikoagulačné liečivo. Vzhľadom na úzke terapeutické okno warfarinu je dôležité kompletne poznať jeho metabolizmus v ľudskom tele. Na metabolizme warfarinu sa podieľajú oxidačné, redukčné a konjugačné reakcie. Redukčný metabolizmus warfarinu zatiaľ nebol podrobne študovaný. Premenou postrannej karbonylovej skupiny warfarinu vzniká redukovaný metabolit warfarin-alkohol. Je známe, že ľudské cytosolické a mikrozomálne frakcie vykazujú redukčnú aktivitu voči warfarinu, ale konkrétne enzýmy katalyzujúce redukciu nie sú zatiaľ známe. Cieľom tejto práce bolo identifikovať enzým/enzýmy podieľajúce sa na redukcii warfarinu a stanoviť kinetiku redukčných premien. Ľudká cytosolická a mikrozomálna pečeňová frakcia a rekombinantné enzýmy AKR1A1, AKR1B1, AKR1B10, AKR1C1, AKR1C2, AKR1C3, AKR1C4, CBR1 a CBR3 boli inkubované s warfarinom o rôznych koncentráciách. UHPLC kvantifikáciou vzniknutého warfarin-alkoholu boli stanovené špecifické aktivity jednotlivých enzýmov a frakcií. Bola potvrdená aktivita cytosolickej a mikrozomálnej...
|
|
|
Role karbonylreduktas v biotransformaci léčiva bupropionu
Tomanová, Radana ; Zemanová, Lucie (vedoucí práce) ; Malátková, Petra (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Mgr. Radana Tomanová Školitel: RNDr. Lucie Škarydová, Ph.D. Název rigorózní práce: Role karbonylreduktas v biotransformaci léčiva bupropionu Bupropion je antidepresivum druhé generace, které se v nižších dávkách užívá také při odvykání kouření. Strukturně se jedná o monocyklický aminoketon, který je metabolizován v lidských játrech na tři hlavní farmakologicky aktivní metabolity. Hydroxylací bupropionu vzniká hydroxybupropion, redukcí se tvoří threohydrobupropion a minoritní metabolit erythrohydrobupropion. Cílem této práce bylo určit in vitro aktivitu lidských jaterních subcelulárních frakcí a lidských enzymů redukujících karbonylové sloučeniny vůči bupropionu a stanovit účast enzymů v jaterním metabolizmu bupropionu. Na počátku in vitro biotransformační studie bupropionu byla otestována role všech jaterních subcelulárních frakcí a rekombinantně připravených enzymů redukujících karbonylové sloučeniny z nadrodiny AKR, rodiny CBR a 11β-HSD 1. Posouzením vzniku metabolitů bylo zjištěno, že všechny jaterní subcelulární frakce a enzymy 11β-HSD 1, AKR1C1, AKR1C2, AKR1C3 a CBR1 jsou aktivní v redukci bupropionu. Hlavní in vitro jaterní metabolit byl threohydrobupropion, který se v nejvyšší míře tvořil...
|
|
| |
|
|
Regulation of Human Carbonyl Reductase 3 (CBR3) Expression
Malátková, Petra ; Wsól, Vladimír (vedoucí práce) ; Pávek, Petr (oponent) ; Machala, Miroslav (oponent)
Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát Mgr. Petra Malátková Školitel Prof. Ing. Vladimír Wsól, Ph.D. Název disertační práce Regulace exprese lidské karbonylreduktasy 3 (CBR3) Regulace exprese lidské karbonylreduktasy 3 (CBR3) byla až donedávna zcela neznámá a stále není plně objasněna. Transkripční regulace genu úzce souvisí s funkcí proteinu, který kóduje. Proto lze očekávat, že objasnění regulace CBR3 pomůže porozumět fyziologické funkci tohoto enzymu, která dodnes zůstává záhadou. Promotor genu CBR3 byl popsán v roce 2009. CBR3 promotor obsahuje několik potenciálních vazebných míst pro různé transkripční faktory. V roce 2010 jsme prokázali, že exprese CBR3 je regulována signální dráhou Nrf2/ARE. Šlo o první studii popisující transkripční regulaci CBR3. Zapojení Nrf2 do regulace CBR3 bylo nedávno potvrzeno studií jiného výzkumného týmu. Funkční antioxidační responzivní element (ARE) se nachází 2698 párů bází proti směru iniciace translace CBR3 (−2698ARE). Analýza promotoru CBR3 o délce 2500 párů bází nicméně naznačila přítomnost cis- regulačního elementu v sekvenci mezi 2500 a 500 párů bází proti směru transkripce. Zdá se tedy, že i jiný responzivní element než −2698ARE může regulovat CBR3. Protože promotor genu CBR3 obsahuje...
|
|
| |
host ::
RSS.