|
|
Vývoj extrakčního postupu pro stanovení tokoferolů v lidském séru
Klabačková, Sáva ; Kujovská Krčmová, Lenka (vedoucí práce) ; Sklenářová, Hana (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Bc. Sáva Klabačková Školitel: RNDr. Lenka Kujovská Krčmová, Ph.D. Název diplomové práce: Vývoj extrakčního postupu pro stanovení tokoferolů v lidském séru V předkládané práci byl vypracován miniaturizovaný postup extrakce do kapaliny pro stanovení alfa, beta, gama a delta tokoferolu z lidského séra. Byly optimalizovány jednotlivé kroky extrakce: deproteinace, centrifugace, odpařování a závěrečná filtrace. Pro stanovení tokoferolů byla také testována extrakce do kapaliny podpořená tuhou fází (SLE), která se jeví jako velmi slibná pro využití v bioanalýze. V průběhu vývoje nového extrakčního postupu byl kladen důraz na jednoduchost, rychlost a malou spotřebu vzorků i rozpouštědel. Byla provedena také částečná validace metodiky. Nový extrakční postup je součástí již zavedené UHPLC metody pro stanovení jednotlivých forem tokoferolů a bude sloužit ke stanovení antioxidační kapacity onkologických pacientů během chemoterapeutické léčby. Klíčová slova: tokoferoly, LLE, SLE, biologický materiál
|
|
|
Analytické a bioanalytické hodnocení nových potencionálních léčiv ze skupiny chelátorů železa
Bureš, Jan ; Štěrbová, Petra (vedoucí práce) ; Kujovská Krčmová, Lenka (oponent) ; Hroch, Miloš (oponent)
Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmaceutické chemie a farmaceutické analýzy Kandidát: Mgr. Jan Bureš Školitel: doc. PharmDr. Petra Štěrbová, Ph.D. Název práce: Analytické a bioanalytické hodnocení nových potencionálních léčiv ze skupiny chelátorů železa Vysokoúčinná kapalinová chromatografie (HPLC) díky svým kvalitám získala důležitou pozici v analýze léčiv v biologickém materiálu. Umožňuje za vhodně zvolených podmínek separovat téměř jakoukoliv směs látek, provádět kvalitativní i kvantitativní analýzu, a to obvykle ve velmi krátkém čase. Díky moderním stacionárním fázím a detekčním technikám lze detekovat i látky ve stopovém množství a v rámci jedné analýzy je možné kromě koncentrace získat i informace o struktuře analytů. Spolehlivost používaných HPLC metod je garantována jejich validací na základě přijatých norem. Chelatace železa se jeví jako efektivní přístup v léčbě celé řady patologických stavů od přetížení organismu železem, přes rakovinu až po neurodegenerativní choroby. Pro vývoj chelátorů pro tyto indikace je však klíčové nejprve jasně charakterizovat jejich vlastnosti (vztah struktura-aktivita, metabolismus, toxicita atd.), k čemuž je mimo jiné zapotřebí i spolehlivých analytických metod. V rámci této disertační práce byly vyvinuty a validovány LC-UV...
|
|
|
Vývoj HPLC metody pro stanovení vitaminu B1 v klinickém výzkumu
Chadtová, Anežka ; Kujovská Krčmová, Lenka (vedoucí práce) ; Matysová, Ludmila (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Anežka Chadtová Školitel: RNDr. Lenka Kujovská Krčmová Ph.D. Název diplomové práce: Vývoj HPLC metody pro stanovení vitaminu B1 v klinickém výzkumu Předkládaná diplomová práce popisuje vývoj a částečnou validaci nové HPLC metody pro stanovení vitaminu B1 (thiamin hydrochloridu) a jeho fosforylovaných derivátů (thiamin monofosfátu, thiamin pyrofosfátu). Tato metoda je založena na využití kapalinové chromatografie s nepřímou fluorescenční detekcí. Separace bylo dosaženo využitím moderní monolitní stacionární fáze druhé generace Chromolith® High Resolution RP-18e 100 x 4,6 mm (Merck, Německo) v kombinaci s gradientovou elucí mobilní fáze, kterou tvoří směs 95% fosfátového pufru 10 mmol/l o pH 6,5 a 5% acetonitrilu (ACN), průtoková rychlost mobilní fáze byla 2,5 ml/min, od 2,1. min 4 ml/min. Pro fluorescenční detekci thiamin hydrochloridu (TH), thiamin monofosfátu (TMP) a thiamin pyrofosfátu (TPP, thiamin difosfátu) byla nutná jejich chemická oxidace hexakynoželezitanem draselným na thiochrom a jeho adekvátní estery, které mají fotoluminiscenční aktivitu. Chromatografická metoda byla částečně validována, byl stanoven faktor symetrie, účinnost kolony, rozlišení chromatografických píků, limit detekce a...
|
|
|
Metabolomic analysis of plasma samples using ultra performance liquid chromatography and high resolution mass spectrometry
Machová, Karolína ; Solich, Petr (vedoucí práce) ; Kujovská Krčmová, Lenka (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Karolína Machová Konzultant: Prof. RNDr. Petr Solich, CSc. Název diplomové práce: Využití ultraúčinné kapalinové chromatografie ve spojení s hmotností spektrometrií v metabolomické analýze plasmy Metabolomika je nová věda popisující komplexní metody pro určování a měření metabolitů v biologických vzorcích především tělních tekutinách jako je plasma, moč, sérum, sliny, cerebrospinální tekutina, sperma. Popisuje děje probíhající v buňkách a nachází široké uplatnění v diagnostice onemocnění, určování biomarkerů, patofyziologii nemocí a klinické praxi. Hladiny metabolitů jsou v nízkých koncentračních rozmezích, a proto je kladen důraz na vysokou citlivost metody. Důležitá je reprodukovatelnost analytické metody a také příprava vzorku. Metabolomická analýza využívá pro stanovení metabolitů především vysokoúčinnou kapalinovou chromatografii v kombinaci s hmotnostním detektorem. Další běžné analytické metody jsou nukleární magnetické rezonance a plynová chromatografie. Následující projekt je zaměřen na standardizaci metody identifikace nalezených metabolitů pomocí ultra-účinné kapalinové chromatografie v kombinaci s hmotnostním spektrometrem s využitím počítačového vyhodnocení pomocí databáze známých látek.
|
|
|
Analytické a bioanalytické hodnocení nových potencionálních léčiv ze skupiny chelátorů železa
Bureš, Jan ; Štěrbová, Petra (vedoucí práce) ; Kujovská Krčmová, Lenka (oponent) ; Hroch, Miloš (oponent)
Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmaceutické chemie a farmaceutické analýzy Kandidát: Mgr. Jan Bureš Školitel: doc. PharmDr. Petra Štěrbová, Ph.D. Název práce: Analytické a bioanalytické hodnocení nových potencionálních léčiv ze skupiny chelátorů železa Vysokoúčinná kapalinová chromatografie (HPLC) díky svým kvalitám získala důležitou pozici v analýze léčiv v biologickém materiálu. Umožňuje za vhodně zvolených podmínek separovat téměř jakoukoliv směs látek, provádět kvalitativní i kvantitativní analýzu, a to obvykle ve velmi krátkém čase. Díky moderním stacionárním fázím a detekčním technikám lze detekovat i látky ve stopovém množství a v rámci jedné analýzy je možné kromě koncentrace získat i informace o struktuře analytů. Spolehlivost používaných HPLC metod je garantována jejich validací na základě přijatých norem. Chelatace železa se jeví jako efektivní přístup v léčbě celé řady patologických stavů od přetížení organismu železem, přes rakovinu až po neurodegenerativní choroby. Pro vývoj chelátorů pro tyto indikace je však klíčové nejprve jasně charakterizovat jejich vlastnosti (vztah struktura-aktivita, metabolismus, toxicita atd.), k čemuž je mimo jiné zapotřebí i spolehlivých analytických metod. V rámci této disertační práce byly vyvinuty a validovány LC-UV...
|
|
|
Vývoj HPLC metody pro stanoveni vankomycinu v klinickém výzkumu
Kučerová, Kateřina ; Kujovská Krčmová, Lenka (vedoucí práce) ; Matysová, Ludmila (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Kateřina Kučerová Školitel: RNDr. Lenka Kujovská Krčmová, Ph.D. Název diplomové práce: Vývoj HPLC metody pro stanovení vankomycinu v klinickém výzkumu Cílem této diplomové práce bylo vytvořit optimální chromatografické podmínky pro stanovení vankomycinu pro klinický výzkum. K separaci byla využita kolona KinetexTM C18 o rozměrech 50 × 4,6 mm (Phenomenex, USA) s povrchově porézními částicemi o velikosti 2,6 μm. Mobilní fázi tvořil fosfátový pufr o pH 4,5 a acetonitril v poměru 90 : 10. Jako vnitřní standard byl zvolen cefuroxim, který byl spolu s vankomycinem detekován při 220 nm. Po optimalizaci separačních podmínek byla metoda aplikována na biologický materiál. Vzorky byly jednoduše upraveny pouze pomocí precipitačního činidla. Metoda byla částečně validována. Klíčová slova: vankomycin, HPLC-UV, plasma
|
|
|
Stanovení neopterinu v biologickém materiálu - rešeržní práce
Arnoštová, Veronika ; Kujovská Krčmová, Lenka (vedoucí práce) ; Matysová, Ludmila (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Veronika Arnoštová Školitel: RNDr. Lenka Kujovská Krčmová, Ph.D. Název diplomové práce: Stanovení neopterinu v biologickém materiálu - rešeršní práce Hlavní náplní této diplomové práce je vytvoření přehledu současných metod používaných ke stanovení neopterinu v biologickém materiálu. Neopterin je derivát pteridinu, konkrétně patří do skupiny nekonjugovaných pteridinů. Jeho biosyntéza vychází z guanosintrifosfátu a je stimulována působením IF-γ. Neopterin představuje užitečný marker aktivace imunitního systému, je také významným prognostickým ukazatelem např. při maligních onemocněních, u HIV pozitivních pacientů či u pacientů po transplantacích. Zvýšené hladiny neopterinu se vyskytují u řady patologických stavů, jako např. u akutních i chronických virových onemocnění, u nádorových onemocnění, u pacientů s HIV, u pacientů po transplantaci při rejekci, ale i u některých neurologických, kardiovaskulárních a autoimunitních chorob. Podstatnou součástí stanovení neopterinu v biologickém materiálu je úprava vzorku před vlastním stanovením, na kterém velkou měrou závisí samotný výsledek. Proto je tomuto tématu v předkládané práci také věnována pozornost. Hlavními metodami stanovení jsou metody...
|
|
|
Optimalizace HPLC metody pro stanovení propranololu v tekutých léčivých přípravcích
Koval, Tomáš ; Matysová, Ludmila (vedoucí práce) ; Kujovská Krčmová, Lenka (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Tomáš Koval Školitel: doc. PharmDr. Ludmila Matysová, Ph.D. Název diplomové práce: Optimalizace HPLC metody pro stanovení propranololu v tekutých léčivých přípravcích. Obsahem diplomové práce je optimalizace a následná validace HPLC metody pro stanovení propranolol-hydrochloridu v tekutých léčivých přípravcích. Léčivé přípravky s obsahem propranolol-hydrochloridu se používají při terapii infantilních hemangiomů jako magistraliter připravený roztok. Při optimalizaci této metody byly zkoušeny dvě stacionární a různé mobilní fáze. Pro vlastní měření byla vybrána kolona Kinetex® C18 (150x4,6 mm, velikost částic 5 μm) a izokratické eluce s mobilní fází fosfátového pufru (c=17,7mM) a acetonitrilu v poměru 30:70, přičemž pH této směsi bylo upraveno na 2,2. Průtok kolonou byl ponechán na hodnotě 1,2 ml/min. Validací bylo dokázáno, že je metoda vhodná a poskytuje přesné a správné výsledky. Klíčová slova: propranolol, HPLC, optimalizace, tekuté léčivé přípravky, benzoan sodný
|
|
|
Testování antioxidační aktivity pomocí luminolového chemiluminiscenčního systému
Chládková, Gabriela ; Sklenářová, Hana (vedoucí práce) ; Kujovská Krčmová, Lenka (oponent)
Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Gabriela Chládková Školitel: Doc. PharmDr. Hana Sklenářová, Ph.D. Konzultant: Doc. RNDr. Miroslav Polášek, Csc. Název diplomové práce: Testování antioxidační aktivity pomocí luminolového chemiluminiscenčního systému Úkolem této diplomové práce bylo porovnání různých podmínek pro testování antioxidační aktivity pomocí luminolového chemiluminiscenčního systém v průtokovém systému a zhodnocení závislosti antioxidační účinnosti na koncentraci. Antioxidační účinnost byla popisována jako závislost zhášení chemiluminiscenčního signálu na použité koncentraci antioxidantu. Byla pozorována antioxidační účinnost tří látek - resveratrol, kyselina p- kumarová a trolox. Trolox se používá jako standard při hodnocení antioxidační aktivity. Chemiluminiscenční systém byl tvořen chemiluminiscenčním činidlem, zde byl použit luminol v roztoku hydroxidu sodného popř. v roztoku uhličitanu sodného s úpravou pH na 10, nebo bez úpravy. Luminol vykazoval chemiluminiscenční záření následně po oxidaci peroxidem vodíku v přítomnosti katalyzátorů. Jako katalyzátor zde byl použit hexakyanoželezitan draselný popř. hexakyanoželeznatan draselný. Během měření bylo nastaveno pracovní napětí 435 mV popř. 750 mV. Celá analýza probíhala...
|
|
|
Využití UHPLC v analýze rozkladných produktů tertrakain-hydrochloridu
Horáková, Michaela ; Matysová, Ludmila (vedoucí práce) ; Kujovská Krčmová, Lenka (oponent)
Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Michaela Horáková Školitel: PharmDr. Ludmila Matysová, Ph.D Název diplomové práce: Využití UHPLC v analýze rozkladných produktů tetrakain- hydrochloridu Tato diplomová práce se zabývá využitím UHPLC pro analýzu tetrakain-hydrochloridu a jeho rozkladných produktů, kyseliny 4-aminobenzoové a 4-(butylamino)benzoové. Analýza probíhala na koloně Kinetex 5 µ XB-C18 100A za využití mobilní fáze acetonitril-pufr, kdy pufr obsahoval vodu upravenou kyselinou fosforečnou na pH=2,2, při průtoku 1,7 ml/min. Byla zvolena gradientová eluce, která začínala na 35% acetonitrilu, ve druhé minutě stoupla na 90% organické fáze a poté opět klesla na 35% ve čtvrté minutě. Jako vnitřní standard byl využit ethylparaben. Pro detekci byla zvolena vlnová délka 300 nm pro tetrakain a nečistoty a 240 nm pro vnitřní standard. Validace dokázala, že metoda poskytuje přesné a správné výsledky.
|
host ::
RSS.