|
|
Lipidomic analysis of vernix caseosa
Harazim, Eva ; Cvačka, Josef (vedoucí práce) ; Lísa, Miroslav (oponent) ; Kuda, Ondřej (oponent)
Metody analytické chemie jsou v lipidomice široce používané, a to zejména chromatografie ve spojení s hmotnostní spektrometrií či nukleární magnetická rezonance. Díky těmto technikám je možné identifikovat i lipidy vyskytující se v matrici ve velice malém množství. Tato práce shrnuje využití moderních analytických metod a instrumentace při zjišťování identity a charakterizace lipidů obsažených v novorozeneckém mázku. Ukazuje také, jakým dílem jsem v průběhu studia přispěla k rozpoznání struktury a charakterizaci neznámých lipidových tříd a k detailnějšímu popisu již těch identifikovaných v novorozeneckém mázku. Nedílnou součástí mé práce byla aplikace metody umožňující lokalizaci dvojných vazeb vyvinutou naší laboratoří u triacylglycerolů a 1,2-diesterů diolů novorozeneckého mázku. Tato analytická metoda je založena na tvorbě acetonitrilového aduktu v iontovém zdroji hmotnostního spektrometru s chemickou ionizací za atmosférického tlaku. Složitost třídy triacylglycerolů neumožnila kompletní charakterizaci dvojných vazeb. Fragmentace však ukázala přítomnost dvojných vazeb až do polohy n-12, ale byly rovněž identifikovány malé píky naznačující dvojné vazby ve vzdálených pozicích od koncových řetězců. Spolupracovala jsem také na charakterizaci větvení řetězců a polohy dvojných vazeb mastných kyselin...
|
|
|
Regulation of lipogenesis in human adipose tissue: Effect of metabolic stress, dietary intervention and aging.
Šrámková, Veronika ; Rossmeislová, Lenka (vedoucí práce) ; Cahová, Monika (oponent) ; Kuda, Ondřej (oponent) ; Tanti, Jean-Francois (oponent)
Shrnutí Tuková tkáň (TT) je komplexní orgán specializovaný pro bezpečné skladování a uvolňování energie ve formě lipidů. TT je tedy nezbytná pro udržování energetické homeostázi. Základní funkční jednotky TT se nazývají adipocyty a vznikající z prekurzorových buněk procesem adipogeneze. Adipogeneze jako taková je velmi úzce spojena s lipogenezí, neboli syntézou mastných kyselin a triglyceridů. Nejrůznější faktory mohou ovšem narušit diferenciaci a lipogenezi adipocytů a přispívat tak k dysfunkci TT a rozvoji metabolických onemocnění. Proto byla tato dizertační práce zaměřena na zkoumání lipogeneze v kontextu stresu v endoplasmatickém retikulu (ER), kalorické restrikce a stárnutí. V projektu A jsme ukázali, že vystavení adipocytů silnému akutnímu stresu ER snižuje expresi lipogenních genů a inkorporaci glukózy do lipidů. Chronický stres ER negativně ovlivňoval jak lipogenezi, tak vlastní diferenciaci preadipocytů, i když v již maturovaných adipocytech neměl chronický stres ER na lipogenezi zjevný efekt. Tyto efekty stresu ER na lipogenezi a adipogenezi tak mohou přispívat ke zhoršení funkce TT pozorované u obézních jedinců. Kapacita TT skladovat lipidy se snižuje s věkem, pravděpodobně kvůli akumulaci senescentních buněk nebo zvýšenému stresu v ER. V projektu B jsme zkoumali lipogenní kapacitu lidské TT ve...
|
|
|
Úloha fosfolipáz A2 v mechanismu kardioprotekce indukované adaptací na chronickou hypoxii
Míčová, Petra ; Novotný, Jiří (vedoucí práce) ; Kuda, Ondřej (oponent) ; Kazdová, Ludmila (oponent)
Kardiovaskulární onemocnění, především akutní infarkt myokardu, jsou jednou z hlavních příčin úmrtí ve vyspělých zemích světa včetně České republiky. Jednou z možností, jak zvýšit odolnost myokardu proti akutnímu ischemicko-reperfúznímu (I/R) poškození, je adaptace na chronickou hypoxii. Molekulární mechanismus tohoto jevu však není podrobně znám. Je zřejmé, že funkce srdce závisí na zachování membránové integrity a buněčné homeostáze kardiomyocytů. Z tohoto pohledu jsou životně důležitými enzymy fosfolipázy A2 (PLA2), které se uplatňují při remodelaci a obnově buněčných membrán. Svou činností také generují lipidové signální molekuly - volné mastné kyseliny (FA) a také 2-lyzofosfolipidy. V srdci se vyskytují zástupci tří skupin PLA2 - cytosolické PLA2 (cPLA2), na kalciu nezávislé PLA2 (iPLA2) a sekretorické PLA2 (sPLA2). Cílem práce bylo sledovat v myokardu levé komory dospělých potkanů kmene Wistar následující: 1) Vliv intermitentní hypobarické hypoxie (IHH; 8 hodin/den, 5 dnů/týden, 5 týdnů, ~ 7000 m) na zastoupení celkové a fosforylované cPLA2α (p-cPLA2α, Ser505 ) a dále iPLA2 a sPLA2IIA, jakož i signálních proteinů aktivujících cPLA2α a rovněž cílů tohoto enzymu. 2) Vliv reaktivních forem kyslíku (ROS) za podmínek IHH na expresi celkové a fosforylované cPLA2 a dále iPLA2, sPLA2IIA a složení FA...
|
|
|
Cílená analýza větvených esterů mastných kyselin pomocí LC/MS
Březinová, Marie ; Kuda, Ondřej (vedoucí práce) ; Vrkoslav, Vladimír (oponent)
Lipidomika je jedna z oblastí metabolomiky, která se v poslední době, díky rozvoji analytických metod, těší velké pozornosti. Tato práce se věnuje optimalizaci extrakce lipidů z biologických vzorků, pre-separaci pomocí extrakce kapalina kapalina, extrakci na pevné fázi, následné separaci a identifikaci větvených esterů hydroxylovaných mastných kyselin (FAHFA - branched-chain Fatty Acid esters of Hydroxy Fatty Acids) pomocí ultra účinné kapalinové chromatografie spojené s hmotnostní spektrometrií. Tato třída lipidových molekul souvisí se sekrecí insulinu, schopností působit na metabolismus glukosy a poskytuje potenciál v léčbě diabetu druhého typu. Extrakce na pevné fázi byla testována na kolonkách reverzní fáze obsahujících sorbent modifikovaný styren divinylbenzenovým polymerem nebo polymerem s vázaným oktadecylem a silikagelových kolonkách pro normální fázi. Zvolená kolonka Strata SI-1 Silica byla použitapro separaci FAHFA z komplexních biologických vzorků. FAHFA analýza byla optimalizována na sestavě UPLC Ultimate 3000 RSLC vybavené chromatografickou kolonou Kinetex C18 1,7 µm, 2,1 x 150 mm v gradientovém programu. UPLC byla spojena s hmotnostním spektrometrem QTRAP 5500/SelexION pracujícím v nastavení hybridní trojitý kvadrupól/lineární iontová past a přidanou iontovou mobilitní celou....
|
|
|
Structural and Functional Interactions of Mitochondrial ADP-Phosphorylating Apparatus
Nůsková, Hana ; Houštěk, Josef (vedoucí práce) ; Kolarov, Jordan (oponent) ; Kuda, Ondřej (oponent) ; Panicucci Zíková, Alena (oponent)
Komplexy oxidativní fosforylace (OXPHOS) se ve vnitřní mitochondriální membráně sdružují ve vyšší strukturní a funkční celky, tzv. superkomplexy. Jejich význam spočívá v cíleném směrování substrátu z jednoho komplexu na druhý. V případě ATP syntázy byly popsány její dimery i vyšší oligomery a také ATP syntazom, v rámci nějž dochází k seskupení ATP syntázy s přenašečem adeninových nukleotidů (ANT), zajišťujícím výměnu syntetizovaného ATP za cytosolické ADP, a fosfátovým přenašečem (PiC), umožňujícím import fosfátu do matrix mitochondrie. I když je existence tohoto superkomplexu obecně přijímána, experimentální důkazy nejsou dostatečné. V rámci této práce byly detailně zkoumány strukturní interakce ATP syntázy, ANT a PiC. Jejich vzájemné vztahy byly sledovány nejprve na úrovni exprese jednotlivých komponent ATP syntazomu, ať již za fyziologických podmínek v různých tkáních potkana, nebo na modelu deficiencí ATP syntázy v buňkách pacientů s různými genetickými defekty ATP syntázy. Konkrétně se jednalo o mutace v jaderných genech ATP5E a TMEM70, které kódují podjednotku ε, respektive pomocný faktor v biogenezi ATP syntázy TMEM70, a o mikrodeleci na rozhraní genů MT-ATP6 a MT-COX3, která negativně ovlivňuje mitochondriální translaci podjednotek a ATP syntázy a Cox3 cytochrom c oxidázy. Funkční a...
|
|
|
Cílená analýza eikosanoidů pomocí LC/MS
Moravcová, Marie ; Kuda, Ondřej (vedoucí práce) ; Kozlík, Petr (oponent)
Eikosanoidy představují velkou třídu biologicky aktivních metabolitů polynenasy- cených mastných kyselin, které hrají důležitou roli v mnoha fyziologických procesech. Metabolismus těchto látek je velice složitý a pro jeho pochopení byly použity metody analýzy zahrnující preseparaci z biologického vzorku pomocí extrakce na pevné fázi a kapalinovou chromatografii ve spojení s detekcí na hmotnostním spektrometru. V rámci této bakalářské práce byly porovnány způsoby preseparace eikosanoidů z biologických vzorků na kolonkách pro extrakci na pevné fázi rozdělené podle typu sorbentu. Extrakce na pevné fázi byla testována na čtyřech kolonkách pro reverzní fázi, která se prokázala jako nejúčinnější metoda za použití kolonky Strata X 60 mg/3 ml, 33 µm (Phenomenex, USA). Extrakce na pevné fázi byla optimalizována také pomocí alternativních metod za použití dvou kolonek s iontovou výměnou a jedné s normální fází, které se ukázaly jako nevhodné pro cílenou analýzu eikosanoidů. Zvolená metoda extrakce na kolonkách Strata X 60 mg/3 ml, 33 µm (Phenomenex, USA) byla použita pro separaci frakce eikosanoidů ve vzorku gonadálního tuku myši. Eikosanoidy byly analyzovány pomocí kapalinové chromatografie, kde byly testovány mechanismy separace pomocí tří kolonek Kinetex o různých délkách (50 mm, 100 mm, 150 mm), účinná...
|
|
|
Obezita její příčiny a následky
Ondráčková, Anna ; Vybíral, Stanislav (vedoucí práce) ; Kuda, Ondřej (oponent)
Obezita je jedním z nejrozšířenějších zdravotních problémů na světě. Trpí jí přes 500 milionů dospělých a přes 40 milionů dětí. Cílem této práce je shrnout poznatky o příčinách a následcích tohoto problému. I přesto, že v některých případech jsou za její rozvoj zodpovědné pouze genetické mutace, jako mutace v ob genu, nebo Prader-Willi syndrom, převážná většina případů je způsobena životním stylem lidí - nadměrný příjem potravy a nedostatečná fyzická aktivita. Zdravotních problémů, které doprovázejí obezitu, je mnoho. Mezi nejzávažnější můžeme zařadit metabolický syndrom, diabetes mellitus, kardiovaskulární onemocnění a rakovinu. Následky obesity se ovšem netýkají jen zdraví. Můžeme pozorovat také ekonomické následky. Finanční náklady na léčbu obezity a s ní spojených nemocí se pohybují ve stovkách miliard dolarů. Farmakologická léčba se prozatím prokázala jako neúčinná. Pokud jsou léky účinné, vedlejší účinky jsou natolik závažné, že jejich využití není možné. Zatím největší naději dávají hormony tukové tkáně, které regulují příjem potravy.
|
|
|
Effects of n-3 polyunsaturated fatty acids, rosiglitazone, low caloric diet and environmental pollutants: obesity and related disorders
Kuda, Ondřej ; Kopecký, Jan (vedoucí práce) ; Bendlová, Běla (oponent) ; Pravenec, Michal (oponent)
4. zÁvÉF{y V souvislosti se specificlcými cíIi práce lze formulovat ýto závěry: 1. Aditivrrí berrefičníefekty kombinované léěby pomoci n-3 polynenasycených mastných kyse|in z mořských ryb a antidiabetického léčivarosiglitazonu na obeátu a souvisejícímetabolické poruchy byly prokrízány na myších krnrerrých vysokotukovou dietou. Ve srovnání s jednotlivýni složkami, kombinovaný pfistup byl účinnějšípři omezováni nežádoucífenotypických projevů: a. tělesná hmotrost, přírůstek hmotnosti a obsah tuku v těle: b. dyslipidaemie; c. svalová citlivost k inzulinu projeveuájako zvýšená synteza glykogenu; d. s obezitou asociovaný zánět tukové tlaáně; e. a dríle aditivní indukce adiponektinu, zvláště pak jeho multimerní formy indikující zvýšenou citlivost k inzulinu. Tyto Yýsledky na myšímmodelu by mohly bý vwžity fléčenípacienhů, kdy by koncerrtiít rybích olejůmohl zlepšit účinkyterapie pomocí thiazolidindionů, a tím snížitriziko nežádoucích veďejších efekni TZD terapie. Byla nalezela specifická indukce oxidace lipidů v tenkém střevě pomocí n-3 PUFA, což je důležitépro studování antiobezitrích a h1polipidemiclcých účinloitěchto lipidů. 3. Byly prokázány změny v koncentraci a distribuci multimemích forem aďponektinu v plazmě ob,émichpacientri po n2kokalorické dietě. 4. By|aptokáaána negativní asociace mezi hladinami...
|
|
|
Effects of n-3 polyunsaturated fatty acids, rosiglitazone, low caloric diet and environmental pollutants: obesity and related disorders
Kuda, Ondřej
4. zÁvÉF{y V souvislosti se specificlcými cíIi práce lze formulovat ýto závěry: 1. Aditivrrí berrefičníefekty kombinované léěby pomoci n-3 polynenasycených mastných kyse|in z mořských ryb a antidiabetického léčivarosiglitazonu na obeátu a souvisejícímetabolické poruchy byly prokrízány na myších krnrerrých vysokotukovou dietou. Ve srovnání s jednotlivýni složkami, kombinovaný pfistup byl účinnějšípři omezováni nežádoucífenotypických projevů: a. tělesná hmotrost, přírůstek hmotnosti a obsah tuku v těle: b. dyslipidaemie; c. svalová citlivost k inzulinu projeveuájako zvýšená synteza glykogenu; d. s obezitou asociovaný zánět tukové tlaáně; e. a dríle aditivní indukce adiponektinu, zvláště pak jeho multimerní formy indikující zvýšenou citlivost k inzulinu. Tyto Yýsledky na myšímmodelu by mohly bý vwžity fléčenípacienhů, kdy by koncerrtiít rybích olejůmohl zlepšit účinkyterapie pomocí thiazolidindionů, a tím snížitriziko nežádoucích veďejších efekni TZD terapie. Byla nalezela specifická indukce oxidace lipidů v tenkém střevě pomocí n-3 PUFA, což je důležitépro studování antiobezitrích a h1polipidemiclcých účinloitěchto lipidů. 3. Byly prokázány změny v koncentraci a distribuci multimemích forem aďponektinu v plazmě ob,émichpacientri po n2kokalorické dietě. 4. By|aptokáaána negativní asociace mezi hladinami...
|
|
|
Analysis of novel members of FAHFA lipid class derived from omega 3-PUFA by LC-MS/MS and LC-MS/MS/MS
Rombaldová, Martina ; Kuda, Ondřej ; Březinová, Marie ; Slavíková, Barbora ; Pošta, Martin ; Beier, Petr ; Janovská, Petra ; Veleba, J. ; Kopecký Jr., J. ; Kudová, Eva ; Pelikánová, T. ; Kopecký, Jan
White adipose tissue (WAT) is a complex organ with both metabolic and endocrine functions. Dysregulation of all of these functions of WAT, together with low-grade inflammation of the tissue in obesity, contributes to the development of insulin resistance and type 2 diabetes. Omega-3 polyunsaturated fatty acids (PUFA) of marine origin play an important role in resolution of inflammation and exert beneficial metabolic effects. Using LC-MS/MS method, we elucidated the structures of novel members of fatty acid esters of hydroxy fatty acids (FAHFA), which were present in murine and human serum and WAT after omega-3 PUFA supplementation in diet. These compounds contained DHA esterified to 9- and 13-hydroxyoctadecadienoic acid (HLA) termed 9-DHAHLA and 13-DHAHLA, and were synthesized in WAT. Our results document the existence of novel lipid mediators, which are involved in the beneficial anti-inflammatory effects attributed toomega-3 PUFA, in both miceandhumans.
|
host ::
RSS.