|
|
Analytické hodnocení účinných látek kapalinovou chromatografií II
Raška, Martin ; Sochor, Jaroslav (vedoucí práce) ; Kovaříková, Petra (oponent)
ANALYTICKÉ HODNOCENÍ ÚČINNÝCH LÁTEK KAPALINOVOU CHROMATOGRAFIÍ II. Úvodní studie do problematiky SPME Diplomová práce Martin Raška Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové, Katedra farmaceutické chemie a kontroly léčiv, Heyrovského 1203, Hradec Králové Tato diplomová práce se zabývá problematikou analytického hodnocení účinných látek kapalinovou chromatografií. Konkrétně je zaměřena na hodnocení benzodiazepinů obsažených v biologickém materiálu za užití mikroextrakce tuhou fází (SPME) a vysokoúčinné kapalinové chromatografie (HPLC). HPLC zaujímá mezi dnes používanými chromatografickými metodami velmi důležitou pozici. Jejími hlavními přednostmi jsou citlivost, selektivita a rychlost provedení separace a vytvoření reprodukovatelného záznamu. Mikroextrakci tuhou fází lze popsat jako jednoduchou a účinnou techniku přípravy vzorku, která v sobě integruje sorpci, desorpci a zkoncentrování analytu. Tato technika nevyžaduje užití rozpouštědel a složitých aparatur a její podstatou je vystavení kapalného či plynného vzorku malému množství extrakční fáze. Během prováděných pokusů byly jako optimální stanoveny následující chromatografické podmínky. Za mobilní fázi byla užita směs methanol:voda (80:20) o hodnotě pH = 7,5 za průtoku 0,8 ml/min a detekce pak byla provedena při 254 nm....
|
|
|
Analytické a bioanalytické hodnocení potenciálních léčiv odvozených od aroylhydrazonu
Kresová, Jana ; Kovaříková, Petra (vedoucí práce) ; Stariat, Ján (oponent)
Vysokoúčinná kapalinová chromatografie (HPLC) patří mezi progresivní analytické metody používané pro kvalitativní i kvantitativní analýzu léčiv. Tato práce popisuje různé možnosti upravení chromatografické metody pro stanovení BSIH ([2-(4,4,5,5-tetramethyl-[1,3,2]dioxaborolan-2-yl)-benzyliden]-hydrazid kyseliny isonikotinové) a SIH(salicylaldehyd isonikotinoyl hydrazon) v králičí plazmě. BSIH se řadí mezi prochelátory, které se selektivně aktivují v přítomnosti peroxidu vodíku na chelátor železa SIH. Výhodou BSIH je vyšší stabilita v plazmě a nízká toxicita i při opakovaném podání. Separace BSIH, SIH a vnitřního standardu (o-108) byla zkoušena na několika kolonách za různých chromatografických podmínek. Žádná z vyzkoušených modifikací však nebyla vhodnější než ta, ze které se vycházelo. Analýza probíhala na chromatografické koloně Zorbax Bonus-RP (150 mm x 3,0 mm, částice 3,5 µm,) s předkolonou se stejným sorbentem; průtok 0,3 ml/min. Jako mobilní fáze sloužil fosfátový pufr (10mM dihydrogenfosforečnan sodný, pH6, upraveno hydroxidem sodným) : acetonitril s methanolem (60:40) (v/v) v poměru 60:40 (v/v). Odezva detektoru byla zaznamenána při vlnové délce 297 nm. Byla ověřena linearita metody v rozmezí koncentrací od 10 µM do 100 µM pro BSIH a SIH. Stabilita BSIH a SIH v králičí plazmě byla sledována...
|
|
|
Studium úlohy pyridoxal isonikotinoyl hydrazonu při intoxikaci isoniazidem s využitím HPLC
Gladziszová, Marcela ; Kovaříková, Petra (vedoucí práce) ; Kučera, Radim (oponent)
Vysokoúčinná kapalinová chromatografie patří v současné době mezi nejvíce využívané analytické metody ve všech oblastech analýzy léčiv. Umožňuje jak kvalitativní tak kvantitativní hodnocení. Isoniazid je užíván k léčbě a prevenci tuberkulózy. Patří mezi antituberkulotika první volby. Mezi nejzávažnější projevy toxicity v souvislosti s jeho podáváním patří neurotoxicita, která je spojena s nedostatkem vitamínu B6. Neurotoxicita pravděpodobně souvisí s tvorbou hydrazonových kondenzačních produktů isoniazidu a pyridoxinu - jako je pyridoxal isonikotinoyl hydrazonu (PIH). Konkrétní důkazy o probíhajících mechanismech a dějích týkajících se této problematiky nejsou dostupné. Cílem této práce bylo optimalizovat podmínky chromatografické separace 8 analytů (isoniazidu, acetylisoniazidu, pyridoxalu, pyridoxolu, pyridoxaminu, pyridoxal-5-fosfátu, PIHu a vnitřního standardu o-108). Následně byly potřeba optimalizovat podmínky úpravy vzorku plasmy precipitací. Pro chromatografickou analýzu byla zvolena chromatografická kolona LiChroCART 250 × 4 mm I.D.,náplň Lichrospher 100 RP-18, 5 µm, s předkolonou Purospher RP-18, 5µm. Jako mobilní fáze A byl použit vodný roztok NaH2PO4 (0,01 mol/l), s přídavkem EDTA (0,001 mol/l) a kyseliny heptansulfonové (0,005 mol/l) s upraveným pH mobilní fáze pomocí H3PO4 na hodnotu...
|
|
|
Studium bioaktivace vybraných proléčiv
Vernerová, Monika ; Kovaříková, Petra (vedoucí práce) ; Kastner, Petr (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmaceutické chemie a kontroly léčiv Student: Monika Vernerová Školitel: Doc. PharmDr. Petra Kovaříková, Ph.D. Konzultant: Kristiina Huttunen, Ph.D., Katedra farmaceutické chemie, Fakulta lékařských věd, Ita-Suomen Yliopisto Název diplomové práce: Studium bioaktivace vybraných proléčiv Tato diplomová práce se zabývá studiem enzymatické bioaktivace proléčiva kyseliny valproové. Vyhodnocování bylo prováděno na základě dat získaných během HPLC analýzy pomocí vhodně zvolené metody. Inkubační reakce probíhala za přítomnosti vzorků různých biologických tkání, stejně tak i vybraných izolovaných enzymových frakcí. Ze zjištěných dat byl u každé proběhlé bioaktivace vypočítán její poločas. Bylo pozorováno, zda proběhla biokonverze proléčiva na parentní léčivo, kyselinu valproovou. Výsledky těchto in vitro testů budou dále využity pro posouzení výsledků in vivo experimentů a v budoucnosti pomohou k návrhům lepších proléčiv.
|
|
|
HPLC analýza léčiv a potenciálních léčiv v biologickém materiálu
Luňáková, Veronika ; Kovaříková, Petra (vedoucí práce) ; Mokrý, Milan (oponent)
Vysokoúčinná kapalinová chromatografie (HPLC) je v současnosti jednou z nejprogresivnějších separačních metod umožňující současně kvantitativní i kvalitativní analýzu. Významnou oblastí užití HPLC je stanovení léčiv a jejich metabolitů v biologickém materiálu. Tato práce byla zaměřena na vývoj chromatografických podmínek vhodných pro HPLC analýzu dvou nových potenciálních léčiv odvozených od aroylhydrazonu, HNAF-INH a 4,6DAR-INH, v biologickém materiálu a jejich následnou aplikaci při hodnocení stability těchto látek v plasmě. Analyzované chelátory byly připraveny obměnou struktury salicylaldehyd isonikotinoyl hydrazonu (SIH) s cílem zlepšit stabilitu látky v plasmě. Jako vhodná stacionární fáze byla vybrána HPLC kolona LiChroCART® HPLC - cartridge LiChrospher® 100 RP - 18e (15μm) s předkolonou LiChroCART® 4-4 Purospher® RP - 18 (5μm). Mobilní fází byla v případě HNAF-INH směs: fosfátový pufr (0,01 mol/l vodný roztok NaH2PO4 · 2 H2O s 2 mmol/l EDTA, pH 3): methanol, 42:58 (v/v). Teplota na koloně byla 25 ◦C, průtok 1,0 ml/min a UV detekce 288 nm, jako vnitřní standard byl použit SIH. Mobilní fáze pro hodnocení 4,6DAR-INH: fosfátový pufr (0,01 mol/l vodný roztok NaH2PO4 · 2 H2O) s 2 mmol/l EDTA, pH 6), směs (methanol - acetonitril, 1:1), 50:50 (v/v). Teplota na koloně 25 ◦C, průtok 1,0 ml/min, UV...
|
|
|
Bioanalytické hodnocení nových potenciálních léčiv odvozených od thiosemikarbazonu I.
Šesták, Vít ; Kovaříková, Petra (vedoucí práce) ; Kučera, Radim (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra kontroly léčiv a farmaceutické chémie Kandidát: Vít Šesták Školitel: PharmDr. Petra Kovaříková, PhD. Název diplomové práce: Bioanalytické hodnocení nových potenciálnych léčiv odvozených od thiosemikarbazonu I. Abstrakt Mezi dynamická odvětví farmaceutického výzkumu patří bezesporu snaha o objevení nových antineoplastik, která by rozšířila paletu protinádorové léčby a/nebo zvýšila citlivost nádorů refrakterních na současnou terapii. Bylo prokázáno, že selektivní chelatace nitrobuněčného železa (Fe) způsobuje selektivní toxický efekt na nádorové buňky. Biokompatabilní chelátory Fe odvozené od thiosemikarbazonu jsou v současnosti v centru pozornosti farmaceutického výzkumu. Mimo Triapinu, toho času ve 2. fázi klinického zkoušení, vedl systematický výzkum k objevu další generace chelátorů železa - di-(2- pyridyl)keton-3-thiosemikarbazony (DpTs). Na základě mnohých in vitro a in vivo experimentů, byl za vedoucí sloučeninu, vhodnou pro další výzkum, vybrán di-(2- pyridyl)keton-4,4-dimethyl-3-thiosemikarbazon (Dp44mT). Cílem této studie bylo vyvinout LC-MS metodu pro analýzu Dp44mT a jeho hlavních metabolitů 1. fáze v biologických materiálech (plasma, moč a feces). Pilotní in vivo experiment prokázal přítomnost dvou jeho metabolitů -...
|
|
|
Development of an LC-MS method for determination of new antimalarial drugs in biological matrices.
Klimeš, Jiří ; Kovaříková, Petra (vedoucí práce) ; Kučera, Radim (oponent)
Artemisin a jeho deriváty, především artesunat, jsou nejdůležitější skupinou léků používaných v klinické praxi v léčbě malárie. Významná a charakteristická je pro ně endoperoxidická skupina. WHO doporučuje tyto látky v kombinaci s jinými déle působícími antimalariky (lumefantrinem, piperaquinem) jako léky volby. Jelikož ve struktuře těchto látek chybí UV nebo fluorescentně detekovatelné chromofory, dřívější metody pro stanovení těchto látek využívaly post-column on line derivatizaci nebo elektrochemickou detekci v redukujícím módu. Tyto metody ovšem vykazovaly malou selektivitu a sensitivitu. V rámci této práce byl proveden kompletní vývoj LC-MS metody pro stanovení artesunatu a jeho hlavního metabolitu dihydroartemisinu v biologických vzorcích. Vývoj zahrnoval tyto části: ladění ESI - triple quadrupole hmotového spektrometru a optimalizaci chromatografických podmínek, především pak pH a složení mobilní fáze. Artesunat (ARST) a dihydroartemisin (DHA) byly stanovovány v lidské plasmě za použití artemisinu jako vnitřního standardu. Různé úpravy vzorků plasmy, a to liquid-liquid extrakce a protein precipitace, byly optimalizovány a porovnány. Na základě prevalidačních údajů byl zjištěn spodní limit kvantifikace při úpravě liqud-liquid extrakcí 2,5 a 3,0 ng/ml pro DHA a ARST za použití 400 μl plasmy....
|
|
|
Studium retenčního chování polárních analytů na nových typech stacionárních fází
Buková, Jana ; Kovaříková, Petra (vedoucí práce) ; Pilařová, Pavla (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmaceutické chemie a kontroly léčiv Kandidát: Jana Buková Školitel: PharmDr. Petra Kovaříková, Ph.D. Název diplomové práce: Studium retenčního chování polárních analytů na nových typech stacionárních fází. V této diplomové práci bylo zkoumáno retenční chování vybraných polárních analytů (kyselina sulfanilová, kyselina p-hydroxybenzoová, kyselina p-aminobenzoová, kyselina 3,4- aminobenzoová, 3-nitrofenol, 3-aminofenol) na dvou různých typech stacionárních fází v HILIC modu. Byly použity následující stacionární fáze: kolona s náplní z čistého silikagelu Atlantis HILIC Silica, která se hojně používá na separace v HILIC modu a zirkoniová kolona s náplní ZirChrom® - PHASE, která je v HILIC možnou alternativou silikagelových kolon zejména díky své vysoké termické a chemické stabilitě v celém rozmezí pH. Na obou kolonách bylo testováno, jak je ovlivněna retence vybraných analytů změnou eluční síly mobilní fáze. Jen na zirkoniové koloně (díky její stabilitě) byl zkoušen vliv změny síly pufru, změny pH mobilní fáze a změny teploty při analýze na retenci analytů. Po počátečním hledání vhodných chromatografických podmínek pro jednotlivé kolony bylo vybráno několik mobilních fází, které byly v práci použity.
|
|
|
Analytické hodnocení nových potenciálních léčiv ze skupiny chelátorů železa s využitím HPLC II.
Tomalová, Kateřina ; Kovaříková, Petra (vedoucí práce) ; Kučera, Radim (oponent)
Vysokoúčinná kapalinová chromatografie (HPLC) zaujímá dominantní postavení mezi moderními technikami užívanými pro kvalitativní i kvantitativní analýzu léčiv. Po adekvátní úpravě vzorků je HPLC také běžně používána pro stanovení léčiv a metabolitů v biologickém materiálu. Tato práce popisuje vývoj a validaci chromatografické metody pro analýzu 2',4'- dihydroxyacetofenon isonikotinoyl hydrazonu (DHAP-INH) - nového biokompatibilního chelátoru železa, a její použití pro hodnocení stability tohoto potenciálního léčiva v králičí plasmě in vitro. DHAP-INH patří do série nově nasyntetizovaných analogů salicylaldehyd isonikotinoyl hydrazonu (SIH), která byla připravena s cílem zlepšit stabilitu látky v plasmě a přispět tak ke zlepšení farmakokinetických vlastností chelátorů odvozených od aromatických hydrazonů. Dostatečné separace DHAP-INH, jeho syntetických prekurzorů/rozkladných produktů (2,4-dihydroxyacetofenonu a isoniazidu) a vnitřního standardu (SIH) bylo dosaženo na koloně s náplní LiChrospher 100, RP-18 (250 mm × 4,6 mm I.D., 5 µm) s použitím mobilní fáze složené ze směsi fosfátového pufru (0,01 M NaH2PO4.2H2O; 2 mM EDTA; pH 6,0) a methanolu v poměru 54:46 (v/v). UV detekce byla prováděna při vlnových délkách 254 a 326 nm. Z testovaných rozpouštědel pro precipitační deproteinaci plasmy byl vybrán...
|
|
| |
host ::
RSS.