Název:
Vývoj LC-MS metody pro stanovení nových antimalarik v biologickém materiálu
Překlad názvu:
Development of an LC-MS method for determination of new antimalarial drugs in biological matrices.
Autoři:
Klimeš, Jiří ; Kovaříková, Petra (vedoucí práce) ; Kučera, Radim (oponent) Typ dokumentu: Diplomové práce
Rok:
2009
Jazyk:
eng
Abstrakt: [eng][cze] Artemisinin a representative of Endoperoxide class of drugs and its derivatives particularly artesunate are the most important class of antimalarial drugs used in clinical practice. They are recommended as the first-line treatment of malaria in combination with other longer-acting antimalarial drugs (lumefantrine, piperaquine). As the main skeleton of these compounds lacks UV visible or fluorescent chromophore, earlier methods of detection have used post-column on-line derivatisation or electrochemical detection in the reductive mode. However, these methods suffer from poor sensitivity and selectivity. Within this thesis the whole LC-MS method development for the analysis of artesunate and its major metabolite dihydroartemisin in biological samples from the very beginning was performed. It included tuning of ESI - triple quadrupole MS detector and optimization of chromatographic conditions, particularly mobile phase pH. Artesunate (ARST) and dihydroartemisin (DHA) were assayed in human plasma using artemisisnin as an internal standard. Different approaches of plasma sample treatment, (protein precipitation and liquid- liquid extraction) were optimized and compared. Pre-validation data for liquid-liquid extraction revealed LLOQ as 2.5 and 3.0 ng/ml for DHA and ARST, respectively using 400 μl of...Artemisin a jeho deriváty, především artesunat, jsou nejdůležitější skupinou léků používaných v klinické praxi v léčbě malárie. Významná a charakteristická je pro ně endoperoxidická skupina. WHO doporučuje tyto látky v kombinaci s jinými déle působícími antimalariky (lumefantrinem, piperaquinem) jako léky volby. Jelikož ve struktuře těchto látek chybí UV nebo fluorescentně detekovatelné chromofory, dřívější metody pro stanovení těchto látek využívaly post-column on line derivatizaci nebo elektrochemickou detekci v redukujícím módu. Tyto metody ovšem vykazovaly malou selektivitu a sensitivitu. V rámci této práce byl proveden kompletní vývoj LC-MS metody pro stanovení artesunatu a jeho hlavního metabolitu dihydroartemisinu v biologických vzorcích. Vývoj zahrnoval tyto části: ladění ESI - triple quadrupole hmotového spektrometru a optimalizaci chromatografických podmínek, především pak pH a složení mobilní fáze. Artesunat (ARST) a dihydroartemisin (DHA) byly stanovovány v lidské plasmě za použití artemisinu jako vnitřního standardu. Různé úpravy vzorků plasmy, a to liquid-liquid extrakce a protein precipitace, byly optimalizovány a porovnány. Na základě prevalidačních údajů byl zjištěn spodní limit kvantifikace při úpravě liqud-liquid extrakcí 2,5 a 3,0 ng/ml pro DHA a ARST za použití 400 μl plasmy....