|
|
Využití LC-MS/MS v in vitro transportních experimentech
Salvová, Šárka ; Váňová, Nela (vedoucí práce) ; Kastner, Petr (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra: Katedra farmaceutické chemie a farmaceutické analýzy Autor: Šárka Salvová Vedoucí diplomové práce: PharmDr. Nela Váňová, Ph.D. Název diplomové práce: Využití LC-MS/MS v in vitro transportních experimentech Gilteritinib, léčivo ze skupiny antineoplastik, se využívá k cílené protinádorové terapii. Řadí se k inhibitorům tyrosinkinázových receptorů. Jeho struktura je založena na pyrazinkarboxamidovém skeletu. Doposud byl chromatograficky stanovován v biologickém materiálu pouze z plazmy. V této diplomové práci byl gilteritinib stanovován z buněčného média Opti-MEM za účelem využití pro in vitro transportní experimenty a následně byla optimalizovaná a validovaná metoda LC-MS/MS. V průběhu vývoje a optimalizace LC- MS/MS metody byla u hmotnostního spektrometru Thermo Finnigan LCQ Advantage Max Ion Trap s narůstajícím počtem nástřiků pozorována zvyšující se suprese signálu pro gilteritinib i jeho vnitřní standard (maravirok), která dosahovala až 75 % po pouhých 30 nástřicích. Také byla viditelná kontaminace vstupu na iontransferovou kapiláru, ke které je iontový zdroj (elektrosprej) umístěn diagonálně. Dále bylo testováno, zdali jiná konstrukce iontového zdroje (ortogonální poloha elektrospreje) problém nevyřeší. Po transferu metody na...
|
|
|
Validation of chromatographic methods in pharmaceutical analysis
Kegkeroglou, Iokasti ; Kučera, Radim (vedoucí práce) ; Kastner, Petr (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta Hradec Králové Katedra farmaceutické chemie a farmaceutické analýzy Student: Iokasti Kegkeroglou Školitel: doc. PharmDr. Radim Kučera, Ph.D. Název diplomové práce: Validace chromatografických metod ve farmaceutické analýze Validace představuje nedílnou součást každé analytické metody. Jejím cílem je prokázat, že daná metoda je vhodná pro zamýšlené použití. Tato práce přináší přehled a porovnání dokumentů týkajících se validace bioanalytických metod. Do práce jsou zahrnuty pokyny, které jsou v současnosti platné v Evropě, v USA nebo mají obecnou platnost. Nejprve je pozornost věnována historii a vývoji v této oblasti. Následně jsou popsány parametry, které je nutné při validační studii testovat a jsou rozděleny podle regulačních orgánů. V následující kapitole je provedeno srovnání nejnovějších verzí pokynů vydaných EMA, FDA, a ICH týkajících se validace separačních bioanalytických metod. Ačkoliv v mnohém jsou si jednotlivé metodiky podobné, stále ještě existují mezi nimi rozdíly, které by mohly být v rámci harmonizace odstraněny a mohl by tak být využíván celosvětově jen jeden metodický pokyn. Na závěr následuje statistické vyhodnocení využití EMA a FDA doporučení pro validaci bioanalytických separačních metod v průběhu let 2016─2020 ve čtyřech vědeckých...
|
|
|
HPLC evaluation of tyrosine and its metabolites
Michailellis, Panagiotis ; Kastner, Petr (vedoucí práce) ; Kučera, Radim (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmaceutické chemie a farmaceutické analýzy Autor: Panagiotis Michailellis Vedoucí diplomové práce: PharmDr. Petr Kastner, Ph.D. Název diplomové práce: HPLC hodnocení tyrosinu a jeho metabolite Tyrosin je důležitým prekurzorem katecholaminů, tedy dopaminu, norepinefrinu (noradrenalin) a adrenalinu (adrenalin). Jsou to neurotransmitery a hormony, klíčové pro každý živý organismus. Proto je pro přesnější pochopení jejich funkce a chování důležitý jejich identifikace a hodnocení v biologickém materiálu. Tato diplomová práce tedy představuje přehled o způsobech hodnocení katecholaminů a jejich metabolitů v biologickém materiálu metodami používanými ve farmaceutické analýze, zejména HPLC. První kapitoly podávají teoretické poznatky o metabolismu tyrosinu a jeho metabolitů, o úpravě vzorku před analýzou a informace o přístrojích pro HPLC, CE, GC a hlavních detektorech používaných při analýze těchto sloučenin. V literárním přehledu jsou uvedeny tabulky týkající se různých metod přípravy vzorků, podrobnosti o HPLC podmínkách a nakonec souhrn všech analytických metod studovaných v této diplomové práci. Do tabulek byly zahrnuty články vybrané z mnoha dalších, poskytující nejlepší výsledky, a tedy považované za nejvhodnější. Většina těchto...
|
|
|
Vývoj a validace HPLC metody pro stanovení 3-hydroxykynureninu v biologickém materiálu
Knoblochová, Dominika ; Kastner, Petr (vedoucí práce) ; Váňová, Nela (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmaceutické chemie a farmaceutické analýzy Kandidát: Dominika Knoblochová Vedoucí diplomové práce: PharmDr. Petr Kastner, Ph.D. Název diplomové práce: Vývoj a validace HPLC metody pro stanovení 3-hydroxykynureninu v biologickém materiálu 3-hydroxykynurenin je jedním z metabolitů tryptofanu a je studován zvláště pro svoji oxidačně modulační aktivitu, díky které má schopnost chránit buňky před oxidačním stresem. Je tvořen z kynureninu katalýzou enzymu kynurenin 3-monooxygenasa, jehož aktivita je sledována na Katedře farmakologie a toxikologie. Pro její studování je třeba kvantitativně stanovit 3-hydroxykynurenin v biologické matrici. Cílem této diplomové práce bylo vyvinout HPLC metodu pro stanovení 3-hydroxykynureninu v biologickém materiálu s použitím vysokoúčinné kapalinové chromatografie a následně metodu validovat. Během vývoje bylo testováno několik mobilních fází s různými hodnotami pH. Výsledná mobilní fáze byla tvořena 100mM kyselinou mravenčí (pH = 2,25) a methanolem (95:5). Byly také zkoušeny různé typy stacionárních fází, z nichž byla nakonec zvolena kolona YMC TRIART PFP s rozměry 15 × 3 mm a rozměrem částic 5 µm. K detekci 3-hydroxykynureninu byl zvolen UV-VIS detektor, na němž byla nastavena vlnová délka 370 nm. Byla...
|
|
| |
|
|
Studie retenčních vlastností vybraných metabolitů tyrosinu v podmínkách HPLC
Gieslerová, Michaela ; Kastner, Petr (vedoucí práce) ; Pilařová, Pavla (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmaceutické chemie a farmaceutické analýzy Kandidát: Michaela Gieslerová Vedoucí diplomová práce: PharmDr. Petr Kastner, Ph.D. Název diplomové práce: Studie retenčních vlastností vybraných metabolitů tyrosinu v podmínkách HPLC Tématem diplomová práce bylo studium retenčních vlastností vybraných metabolitů tyrosinu v podmínkách vysokoúčinné kapalinové chromatografie s použitím spektrofotometrické (285 nm) a fluorimetrické detekce (emisní 279, excitační 320). Celkem bylo zkoumáno 8 analytů - tyrosin, L-DOPA, dopamin, adrenalin, noradrenalin, kyselina homovanilová a vanilmandlová. Nejprve byl zkoumán vliv složení mobilní fáze, koncentrace pufru a pH na separaci daných analytů. Analýza proběhla na referenční koloně KINETEX 5 μm EVO C18 (150 mm x 3 mm, 5 μm; PHENOMENEX). Jako nejlépe hodnocená mobilní fáze byla methanol:100 mM kyselina octové (pH bylo upraveno hydroxidem sodným na 4,5); 5:95. Poté byl studován vliv složení stacionární fáze na separaci s použitím mobilní fáze, která je popsaná dříve. Celkem bylo studováno 7 různých kolon, a to SF s modifikovaným silikagel C18 skupinou, PFP skupinou, dále kombinované SF (C18 skupina s aromatickým jádrem, kombinace C18 skupina s PFP) a na závěr dvě kolony se skupinou C18 a dále...
|
|
|
HPLC Analysis of Vitamines Soluble in Water Using Electrochemical Detector
Jesenský, Ivan ; Kastner, Petr (vedoucí práce) ; Mokrý, Milan (oponent)
Vysokoúčinná kvapalinová chromatografia je v súčastnosti cennou analytickou metódou často využívanou vo farmácii. Biotín je vo vode rozpustný vitamín, ktorý je dôležitou zložkou mnohých enzýmov, látok potrebných pri trávení a látkovej výmene. Podieľa sa taktiež na látkovej výmene cukrov, tukov a bielkovín. Nachádza sa v rôznych druhoch potravy, najmä v pečeni, arašidovom masle, vaječnom žĺtku, mrkve, hrachu, sóji, pšeničných klíčkoch a ovsených vločkách. Táto práca sa zaoberá optimalizáciou chromatografických podmienok na stanovenie biotínu. Jej cieľom je nájsť vhodnú mobilnú fázu, pri ktorej dochádza k najlepšej separácii biotínu od ostatných zložiek roztoku, nájsť vhodný vnútorný štandard a zostaviť hydrodynamické voltamogramy jednotlivých vo vode rozpustných vitamínov. Na stanovenie bol použitý coulometrický detektor Coulochem III. Analýza prebiehala na kolóne Lichrospher 60, RP - select B (240 x 4,0 mm i.d., 5 μm), od firmy Merck. Mobilná fáza na stanovenie biotínu bola v zložení kyselina octová : acetonitril (CH3COOH 0,2410 mol/l; pH 3,0) 85: 15. Prietoková rýchlosť bola nastavená na 1ml/min, pri teplote 30žC. Vložené napätie na pracovné elektródu bolo 900 mV, pri citlivosti 200 nA.
|
|
|
HILIC separace acikloviru a jeho degradačního produktu II
Teplá, Lenka ; Pilařová, Pavla (vedoucí práce) ; Kastner, Petr (oponent)
Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra: Farmaceutické chemie a kontroly léčiv Kandidát: Lenka Teplá Školitel: PharmDr. Pavla Pilařová, Ph.D. Název diplomové práce: HILIC separace acikloviru a jeho degradačního produktu II V rámci diplomové práce bylo testováno retenční chování acikloviru a jeho degradačního produktu guaninu na zirkoniové koloně modifikované elementárním uhlíkem ZirChrom® - CARB s využitím hydrofilní interakční kapalinové chromatografie (HILIC) a byly doplněny již získané poznatky vycházející z diplomové práce Lucie Bouzkové (2016), ve které se zabývala nalezením vhodných podmínek pro separaci analytů. V této práci byl zkoumán vliv koncentrace kyseliny fosforečné, fluoridu amonného, fluoridu sodného, triethylaminu a fosforečnanových pufrů v mobilních fázích na eluci analytů. Také byl sledován vliv složení mobilních fází s různými poměry organické a vodné složky a vliv rostoucí teploty na retenci acikloviru a guaninu. Vyšší obsah organické složky v mobilní fázi vede ke zkrácení retence acikloviru i guaninu. Na separaci se podílí zadržování hydrofilních analytů ve vodné části mobilní fáze. Se stoupající teplotou klesá retence analytů a zlepšuje se symetrie jejich píků. Fluoridy a fosforečnany se v mobilní fázi chovají jako Lewisovy baze a dochází ke...
|
|
|
Validace HPLC metody stanovení piroxikamu v plasmě s využitím SPME a deproteinace
Kuželová, Kristýna ; Pilařová, Pavla (vedoucí práce) ; Kastner, Petr (oponent)
Validace HPLC metody stanovení piroxikamu z plasmy s využitím SPME a deproteinace Rigorózní práce Mgr. Kristýna Kuželová Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové, Katedra farmaceutické chemie a kontroly léčiv, Heyrovského 1203, Hradec Králové Tématem této rigorózní práce bylo bioanalytické hodnocení piroxikamu pomocí vysokoúčinné kapalinové chromatografie (HPLC). Piroxikam byl izolován z plasmy pomocí SPME a deproteinace. Plasma byla vždy upravena na hodnotu pH 2,5. SPME se skládala z 20 minut sorpce na PDMS/DVB vlákno a 20 minut desorpce do 200 μl methanolu. U druhé metody byl vzorek plasmy deproteinován acetonitrilem, 30 vteřin třepán a následně 5 minut centrifugován při 5 000 G. Poté byl odebrán supernatant, který byl analyzován pomocí HPLC. HPLC analýza probíhala na koloně s reverzní fází C18. Mobilní fáze se skládala z roztoku čištěné vody a acetonitrilu (60:40 v/v), který byl okyselený kyselinou mravenčí na pH 2,5. Průtok mobilní fáze kolonou byl 1 ml/min, teplota byla nastavena na 40řC. Detekce analytu probíhala při 333 nm. SPME i deproteinace byly validovány dle FDA. Sledována byla selektivita, správnost, přesnost, extrakční účinnost, linearita, detekční a kvantitativní limit a stabilita.
|
|
|
Validace HPLC metody stanovení některých vitamínů v multivitamínovém přípravku
Stehlíková, Kristýna ; Mokrý, Milan (vedoucí práce) ; Kastner, Petr (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmaceutické chemie a kontroly léčiv Kandidát: Mgr. Kristýna Stehlíková Konzultant: RNDr. Milan Mokrý, CSc. Název rigorózní práce: Validace HPLC metody stanovení některých vitamínů v multivitamínovém přípravku Byla validována metoda pro simultánní stanovení vitamínů B1 (thiamin), B3 (nikotinamid), B6 (pyridoxin) a vitamínu C (kys. askorbová) pomocí vysokoúčinné kapalinové chromatografie v komerčně vyráběných multivitamínových tabletách. Z valida- čních parametrů byla použita linearita, přesnost (provedena jako opakovatelnost), správnost, selektivita a robustnost. Linearita metody byla potvrzena analýzou vzorků standardů v rozsahu 50 - 150 % očekávané koncentrace jednotlivých vitamínů. Při provedení přesnosti byl šestkrát připraven roztok multivitamínu a následně byla vypočítána relativní směrodatná odchylka, která se u jednotlivých vitamínů pohybovala v rozmezí 0,9 - 1,61%. Správnost byla ověřena analýzou modelových vzorků, připravených přidáním známého množství jednotlivých vitamínů k placebu. Výtěžnost se pohybovala cca od 97 - 105 %. Během selektivity bylo zjištěno, že ostatní látky přítomné v přípravku vzájemně neinterferují. Při zkoušení robustnosti bylo zjištěno, že je třeba dodržovat složení i pH mobilní fáze. Na...
|
host ::
RSS.