|
|
Evaluation of antiproliferative effect of selected tyrosine kinase inhibitors in MDCKII cell lines
Vagiannis, Dimitrios ; Hofman, Jakub (vedoucí práce) ; Čečková, Martina (oponent)
5 ABSTRAKT Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmakologie a toxikologie Kandidát: Dimitrios Vagiannis Školitel: RNDr. Jakub Hofman, Ph.D. Název diplomové práce: Hodnocení antiproliferačního efektu vybraných inhibitorů tyrosinkinas na buněčných liniích MDCKII Tyrosinkinasy jsou důležité enzymy regulující esenciální buněčné procesy jako např. diferenciaci, proliferaci, apoptózu, transkripci, metabolismus a mezibuněčnou komunikaci. Abnormální aktivita těchto enzymů je příčinou vzniku různých typů nádorových onemocnění. Blokáda jejich funkce prostřednictvím inhibitorů tyrosinkinas (TKis) se stala slibnou strategií zejména v protinádorové terapii. "ATP-binding cassette" (ABC) lékové efluxní transportéry jsou rodinou transmembránových proteinů, které aktivně pumpují celou řadu strukturně nesouvisejících látek ven z buňky. Hrají významnou roli ve farmakokinetice (ovlivňují absorpci, distribuci i eliminaci), ale zároveň svou aktivitou negativně ovlivňují účinnost chemoterapie (účastní se fenoménu mnohočetné lékové rezistence). V rámci našeho výzkumu jsme hodnotili antiproliferační vlastnosti čtyř vybraných TKis, jmenovitě alektinibu, brivanibu, osimertinibu a selumetinibu, v MDCKII buněčných liniích (v parentní a v liniích transdukovaných lidskými transportéry ABCB1, ABCG2 a ABCC1)....
|
|
|
Analysis of genomic regions bound and regulated by Ataxin-3
Svoreň, Martin ; Čečková, Martina (vedoucí práce) ; Hofman, Jakub (oponent)
Karlova Univerzita Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmakológie a toxikológie Študent: Martin Svoreň Školiteľ: PharmDr. Martina Čečková, Ph.D. Školiteľ-špecialista: Doc. Bernd Evert, Ph.D. Názov diplomovej práce: Analýza oblastí genómu viazaných a regulovaných ataxínom 3 Spinocerebelárna ataxia typu 3 (SCA3), známa tiež ako Machado-Josephova choroba, je dominantne dedičné neurodegeneratívne ochorenie. Je spôsobené mutantným proteínom ataxínom 3 (ATXN3), ktorý obsahuje abnormálne dlhý polyglutamínový segment kódovaný opakujúcim sa CAG kodónom. ATXN3 je schopný viazať DNA a interaguje s celým radom transkripčných faktorov. Tieto fakty poukazujú na priamu rolu ataxínu 3 v transkripcii. Je pravdepodobné, že mutantný ATXN3 spúšťa mnohé, vzájomne prepojené patogénne kaskády, vedúce k neuronálnej toxicite, no hlavný patomechanizmus zodpovedný za rozvoj tejto neurodegenratívnej choroby na molekulárnej úrovni ostáva neznámy. Nedávno sa sekvenovaním imunoprecipitovaných chromatínových fragmentov viazaných ataxínom 3 podarilo identifikovať 16 genómových oblastí, ktoré boli za účelom potvrdenia prítomnosti väzby ataxínu 3 na DNA ďalej analyzované pomocou PCR. Zvýšenú väzbovosť špecifickú pre ATXN3 vykázalo 5 oblastí v blízkosti týchto génov: CCAAT/enhancer viažúci proteín delta (CEBPD),...
|
|
|
Studium role nukleosidových transportéru v intestinální absorpci s využitím in vitro transportního modelu založeném na buněčné linii Caco-2
Ďurišová, Markéta ; Červený, Lukáš (vedoucí práce) ; Hofman, Jakub (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmakologie a toxikologie Student: Mgr. Markéta Ďurišová Konzultant: PharmDr. Lukáš Červený, Ph.D. Název rigorózní práce: Studium role nukleosidových transportéru v intestinální absorpci s využitím in vitro transportního modelu založeném na buněčné linii Caco-2. Primárním místem absorpce je u perorálně podávaných léčiv tenké střevo. Enterocyty, tvořící střevní bariéru, exprimují značné množství transportérů, a to zástupce jak ATP-vázajících (ABC) tak i "solute carrier" (SLC) transportérů, které mohou významně ovlivnit farmakokinetiku léčiv, které jsou jimi přenášeny. I z toho důvodu je v současnosti FDA a EMA kladen důraz na studium těchto interakcí a jejich vlivu na permeabilitu léčiv. Cílem předkládané práce bylo studium, zda se ekvilibrační nukleosidové transportéry (ENTs), patřící mezi SLC transportéry, podílejí na absorpci nukleosidů (adenosinu a thymidinu) a následně i nukleosidového antiretrovirotika abakaviru (ABC). K experimentu byla využita in vitro transportní metoda, která byla provedena na monovrstvě polarizovaných Caco-2 buněk, jež byly kultivovány na mikrporózních membránových filtrech. Statistickou analýzou námi naměřených hodnot bylo zjištěno, že ačkoliv exprese ENTs byla na apikální straně membrány Caco-2 buněk...
|
|
|
Reporter gene studies for nanoparticle mediated DNA and siRNA delivery.
Kovářová, Barbora ; Jirkovská, Anna (vedoucí práce) ; Hofman, Jakub (oponent)
Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové, Katedra biochemických věd University of Vienna, Faculty center for Pharmacy, Department of Pharmaceutical Chemistry, Laboratory of MacroMolecular Cancer Therapeutics Kandidát: Barbora Kovářová Školitel (Univerzita Karlova): PharmDr. Anna Jirkovská, Ph.D. Školitel (University of Vienna): Univ. Prof. Dipl. Ing. Dr. Manfred Ogris Konzultant (University of Vienna): Dr. Haider Sami, Ph.D. Název diplomové práce: Studie nanočásticemi zprostředkovaného dopravování DNA a siRNA založené na reportérovém genu Klíčová slova: transfekce, plasmidová DNA, siRNA, nanočástice Genová terapie je nadějný obor, který nabízí potenciál k léčbě mnoha nevyléčitelných chorob. Je zprostředkována modulací genové exprese ve specifických buňkách pomocí dopravení exogenní nukleové kyseliny do těchto buněk. Jednou ze současných výzev dopravování nukleových kyselin je výzkum syntetických vektorů, které mají potenciál překonat nevýhody běžně používaných vektorů virových. Tato práce je zaměřena na různé typy nanočástic založených na polyethyleniminu pro dopravování plasmidové DNA (pDNA) a small interfering RNA (siRNA). Spojení kontrastních zobrazovacích činidel se systémy pro dopravování genů nabízí mnoho výhod pro sledování procesu dopravování genů jak in vivo tak i in...
|
|
|
Studium vlivu subchronického podávání antiretrovirotika emtricitabinu na expresi efluxních lékových transportérů v orgánech matky a plodu
Havlová, Ivana ; Červený, Lukáš (vedoucí práce) ; Hofman, Jakub (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmakologie a toxikologie Studentka: Ivana Havlová Školitel: PharmDr. Lukáš Červený, Ph.D. Název diplomové práce: Studium vlivu subchronického podávání antiretrovirotika emtricitabinu na expresi efluxních lékových transportérů v orgánech matky a plodu Cílem této diplomové práce bylo zhodnotit vliv dlouhodobého podávání antiretrovirotika emtricitabinu (FTC) na expresi efluxních lékových ATP-vázajících (ABC) transportérů v placentě, orgánech matky a plodu (mozek, játra, ledviny, tenké střevo) samic potkana kmene Wistar. V práci jsme se zaměřili na dva jejich nejvýznamnější zástupce, P-glykoprotein (MDR1) a breast cancer resistance protein (BCRP). Znalost změn v expresi těchto transportérů má klíčový význam zejména při užití FTC v kombinační terapii, tzv. HAART, Highly Active Antiretroviral Therapy, kde by tyto změny mohly zásadně ovlivnit kinetiku současně podávaných léčiv. Nejdříve byla u potkanů sledována biodostupnost FTC (3,5 mg/kg) po i.m. podání, která byla vyhodnocena jako srovnatelná s biodostupností po i.v. podání. Poté byla provedena kvantitativní analýza exprese mRNA potkaních ortologů Mdr1a, Mdr1b a Bcrp pomocí reverzní transkriptázové polymerázové řetězové reakce v reálném čase (qRT-PCR). Celý experiment byl...
|
|
|
Effect of cadmium chloride on P-glycoprotein in the blood-brain barrier
Zahradníková, Tereza ; Štaud, František (vedoucí práce) ; Hofman, Jakub (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmakologie a toxikologie Studentka: Tereza Zahradníková Školitel: Prof. PharmDr. František Štaud, Ph.D. Konzultant: Alexander Zaremba, Institute of Pharmacy and Molecular Biotechnology, Heidelberg University, Německo Název diplomové práce: Vliv chloridu kademnatého na P-glykoprotein v hematoencefalické bariéře Hematoencefalická bariéra (HEB) rozděluje centrální nervový systém (CNS) a periferní krevní oběh. Díky její specializované struktuře a buněčnému uspořádání reguluje transport látek mezi těmito kompartmenty. Endoteliální buňky tvořící HEB jsou charakteristické expresí různých multidrug resistentních proteinů, které patří do rodiny ATP-vázajících transportérů (ABC). Tyto transmembránové ABC exportní proteiny aktivně transportují molekuly z endotelu HEB do krevního řečiště a chrání mozek před škodlivými xenobiotiky, toxiny a metabolity. Na druhou stranu, ABC exportní proteiny představují překážku pro mnoho léčiv, které prostupují HEB do CNS, čímž je omezena účinnost CNS farmakoterapie. Jeden z nejdůležitějších efluxních transportérů je P-glykoprotein (P-gp). Kadmium je těžký kov, který je nebezpečný pro lidské zdraví. Jako průmyslový kontaminant se dostává do životního prostředí a následně do lidského těla...
|
|
| |
|
|
Příprava savčích vektorů kódujících vybrané mikrosomální SDR enzymy
Slezák, Jan ; Hofman, Jakub (vedoucí práce) ; Novotná, Eva (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických v d Kandidát: Jan Slezák kolitel: RNDr. Jakub Hofman, Ph.D. Název diplomové práce: P íprava sav ích vektor kódujících vybrané mikrosomální SDR enzymy Mikrosomální dehydrogenasy/reduktasy s krátkým et zcem DHRS1, DHRS7 a HSD11b1 (SDR19C1, SDR34C1, SDR26C1) jsou membránov vázané NAD(P)H-dependentní enzymy metabolizující iroké spektrum substrát nesoucích karbonylovou skupinu. Tyto enzymy z nadrodiny dehydrogenas/reduktas s krátkým et zcem zprost edkovávají metabolismus endogenních látek, jako jsou glukokortikoidy, retinoidy, sfingolipidy stejn jako r zná xenobiotika. Mimo jejich biologické role se podílejí na rozvoji záva ných onemocn ní (nap . nádorová onemocn ní, Alzheimerova choroba, obesita aj.). Znalost inhibi ní a substrátové specifity m e vést k lep ímu pochopení funkcí t chto enzym v organismu a k novým terapeutickým p ístup m. Cílem této práce bylo p ipravit sav í vektory kódující DHRS1, DHRS7 a HSD11b1. Prvním krokem byl návrh primer a amplifikace cDNA. Primery nesly sekvence rozeznávané restrik ními endonukleasami sou asn obsa ené v mnoho etném klonovacím míst pCI plasmidu, co umo nilo vytvo ení lepivých konc a následné spojení insertu s plasmidem pomocí ligace. Takto p ipravené vektory byly...
|
|
|
Příprava savčích vektorů kódujících vybrané aldo-ketoreduktasy
Herbolt, Daniel ; Hofman, Jakub (vedoucí práce) ; Novotná, Eva (oponent)
1 Abstrakt Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Daniel Herbolt Školitel: RNDr. Jakub Hofman, Ph.D. Název diplomové práce: Příprava savčích vektorů kódujících vybrané aldo-ketoreduktasy Aldo-ketoreduktasy 1B1, 1B10 a 1C1 (AKR1B1, AKR1B10, AKR1C1) jsou NADPH-dependentní enzymy metabolizující celou řadu substrátů obsahujících karbonylovou skupinu. Tyto enzymy z nadrodiny aldo-ketoreduktas zprostředkovávají redukci endogenních látek, jako např. steroidních hormonů a cukrů, stejně tak jako mnoha různých xenobiotik a léčiv. Mimo svých fyziologických rolí se významnou měrou podílí na genezi několika závažných onemocnění (např. rakovina, diabetes aj.). Inhibice AKR1B1, AKR1B10 a AKR1C1 je považována za slibný terapeutický přístup pro léčbu těchto onemocnění. Cílem předkládané práce bylo připravit savčí vektory kódující AKR1B1, AKR1B10 a AKR1C1. Prvními kroky bylo navržení primerů a amplifikace cDNA klonovaných enzymů. Primery nesly sekvenci rozpoznávanou restrikčními endonukleasami přítomnými v multiklonovacím místě pCI plasmidu, což umožnilo vytvoření lepivých konců pomocí restrikce a následné spojení insertu a plasmidu za využití ligace. Připravené vektory byly transformovány do bakterií Escherichia coli HB101. U vybraných kolonií byla ověřena...
|
|
|
Interakce inhibitorů cyklin-dependentních kinas s ABC lékovými transportéry in vitro a in situ
Hofman, Jakub ; Štaud, František (vedoucí práce) ; Wsól, Vladimír (oponent) ; Kryštof, Vladimír (oponent)
Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmakologie a toxikologie Kandidát: Mgr. Jakub Hofman Školitel: Prof. PharmDr. František Štaud, Ph.D. Název dizertační práce: Interakce inhibitorů cyklin-dependentních kináz s ABC lékovými transportéry in vitro a in situ V této práci jsme se zaměřili na studium farmakokinetických interakcí inhibitorů cyklin-dependentních kináz (CDKi) s lékovými efluxními transportéry breast cancer resistance proteinem (BCRP) a P-glykoproteinem (P-gp). Pomocí akumulačních a transportních metod jsme na buněčném modelu MDCKII-ABCG2 prokázali, že purinové CDKi purvalanol A, olomoucin II, bohemin a roskovitin inhibují BCRP. S využitím akumulačních metod a buněk MDCKII-ABCB1 jsme dále ukázali, že purvalanol A silně inhibuje P-gp a částečná inhibice byla zaznamenána i u ostatních studovaných CDKi (olomoucin II, roskovitin, flavopiridol, SNS-032). Stejné buněčné modely jsme použili pro studium substrátové afinity vybraných CDKi a pomocí transportní metody jsme určili olomoucin II jako duální substrát P-gp a BCRP. Substrátová afinita purvalanolu A k P-gp ani k BCRP nebyla prokázána. Tato zjištění jsme potvrdili s využitím stanovení ATPázové aktivity P-gp, které dále odhalilo skutečnost, že roskovitin je substrátem P-gp a flavopiridol a SNS-032...
|
host ::
RSS.