|
|
Vzájemná závislost základních biochemických parametrů u pacientů s diabetes mellitus II. typu
Mazurová, Monika ; Boušová, Iva (oponent) ; Mladěnka, Přemysl (vedoucí práce)
Diabetes mellitus 2. typu je závažné a v naší populaci velmi časté civilizační onemocnění charakterizované zvýšenou glykémií v krvi (hyperglykémií) a přítomností dalších metabolických abnormalit. K diagnostice onemocnění se využívá stanovení glykémie v plazmě (séru). Ukazatelem dlouhodobé kompenzace diabetu je glykovaný hemoglobin. V této práci byly sledovány případné závislosti mezi biochemickými ukazateli běžně stanovovanými u diabetických pacientů. Byla zpětně vyhodnocena data od 54 diabetických pacientů ve věku od 40 - 82 let pravidelně kontrolovaných v diabetické poradně. Vzorky byly analyzovány na Analyzátoru Cobas integra 800 od firmy Roche (Německo). Pro měření glukózy v séru i v moči byla použita enzymatická metoda s hexokinázou a pro stanovení HbA1c imunochemická metoda založená na turbidimetrické inhibici v hemolyzované plné krvi. Pro zhodnocení závislostí mezi veličinami byl použit Pearsonův korelační koeficient. Nejvyšší korelační koeficient byl nalezen mezi glukózou měřenou v ranní moči a jejími ztrátami močí za 24 hodin. Statisticky významné korelace byly zjištěny také mezi glukózou v séru a glukózou v moči, či ztrátami glukózy močí za 24 hodin a mezi glukózou v séru a glykovaným hemoglobinem. Byla stanovena lineární závislost mezi glykémií a glykovaným hemoglobinem. Asi vzhledem k...
|
|
|
Optimalizace elektroforetických metod pro studium glykace a aspartátaminotransferasy methylglyoxalem
Bacílková, Eliška ; Szotáková, Barbora (oponent) ; Boušová, Iva (vedoucí práce)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Mgr. Eliška Bacílková Školitel: PharmDr. Iva Boušová, Ph.D. Název práce: Optimalizace elektroforetických metod pro studium glykace aspartátaminotransferasy methylglyoxalem Hlavní náplní této práce byla optimalizace podmínek několika elektroforetických metod pro sledování průběhu glykace aspartátaminotransferasy (AST) methylglyoxalem a vlivu vybraných antioxidantů na tento proces. Za použití denaturující elektroforézy (SDS-PAGE) a Western blottingu jsem sledovala vznik vysokomolekulárních agregátů proteinu a pomocí nativní PAGE změny v náboji molekuly AST během glykace. U obou typů elektroforézy jsem hledala vhodnou koncentraci separačního gelu a množství nanášené bílkoviny. Dále jsem porovnávala tři běžně používané barvící metody (Silver Staining, Coomassie Blue R- 250 a G-250). Zjistila jsem, že se stoupající koncentrací methylglyoxalu dochází k tvorbě vysokomolekulárních agregátů s molekulovou hmotností kolem 130 a 160 kDa, což odpovídá tri- a tetramerům AST. Při imunochemické detekci jsem detekovala glykační produkty především s molekulovou hmotností kolem 70 a 130 kDa, při vyšších koncentracích methylglyoxalu s molekulovou hmotností kolem 160 kDa. Glykace methylglyoxalem způsobila progresivní...
|
|
|
OCT activity and glycation damage in rat liver mitochondria
Merhautová, Lucie ; Dršata, Jaroslav (vedoucí práce) ; Boušová, Iva (oponent)
AKTIVITA OCT A GLYKAČNÍ POŠKOZENÍ V MITOCHONDRIÍCH JATER KRYSY Lucie Merhutová Diplomová práce. Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové. 2007 Tato práce byla vytvořena na základě pokusů provedených v LBBCV (Laboratoři buněčné biologie a biochemie stárnutí) v rámci Univerzity Paris Diderot - Paris 7. Tým této laboratoře studuje mechanismy posttranslačních neenzymatických modifikací proteinů, zahrnutých v patofyziologii stárnutí. Glykace je jedním z mechanismů odpovědných za modifikaci nitrobuněčných makromolekul, které vedou ke ztrátě jejich struktury a funkce. Ornitin karbamoyltransferáza (OCT), druhý enzym močovinového cyklu, byl v předchozím výzkumu identifikován jako jeden z enzymů, které jsou významně glykovány uvnitř mitochondrií jater stárnoucích krys. Cílem této práce bylo sledovat glykaci OCT in vitro a ex vivo a její vliv na funkci tohoto enzymu. Vzorky purifikované OCT a extraktů mitochondriální matrix byly inkubovány s methylglyoxalem, jedním z nejreaktivnějších fyziologických glykačních činidel. U vzorků byla změřena enzymatická aktivita a byly podrobeny imunochemické analýze. Podařilo se nám prokázat, že methylglyoxal modifikuje OCT jak in vitro, tak ex vivo, a způsobuje velice rychlý a rozsáhlý pokles jeho enzymatické aktivity. Podle výsledků této studie vznikají...
|
|
|
Účinky antioxidantů přírodního původu v modelu glykace proteinů
Švehlová, Klára ; Dršata, Jaroslav (vedoucí práce) ; Boušová, Iva (oponent)
Účinky antioxidantů přírodního původu v modelu glykace proteinů V diplomové práci jsem se zabývala přímým a nepřímým vlivem antioxidantů přírodního původu (hydroxyskořicových kyselin) na aktivitu enzymu aspartátaminotransferázy a vztahy mezi strukturou jednotlivých kyselin a jejich účinkem. Používala jsem nový model glykace aspartátaminotransferázy methylglyoxalem, který na katedře biochemických věd FaF UK HK dosud nebyl zkoušen. Zjistila jsem vztah mezi strukturou vybraných hydroxyskořicových kyselin a jejich účinkem. Se zvyšujícím se počtem hydroxylových skupin se zvyšoval antiglykační účinek. Methylglyoxalový model glykace se osvědčil a lze jej využívat i při dalších experimentech s jinými látkami. Dále jsem pozorovala interakce mezi kyselinami a samotným enzymem pomocí absorpční a fluorescenční spektroskopie. Ze získaných spekter je patrná interakce jednotlivých kyselin s enzymem, pravděpodobně se váží pouze na jeho proteinovou část, nikoli na koenzym. Účinek všech hydroxyskořicových kyselin byl závislý na jejich koncentraci.
|
|
|
Study of antioxidant and cytoprotective effects of intracellular iron chelators in catecholamine-induced cardiomyocyte injury
Koubková, Lucie ; Šimůnek, Tomáš (vedoucí práce) ; Boušová, Iva (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Hrálové Katedra biochemických věd Kandidát: Lucie Koubková Školitel: Profa . Dra . Natércia Teixeira Profa . Dra . Georgina Correia da Silva Doc. Pharm.Dr. Tomáš Šimůnek, Ph.D. Název diplomové práce: Hodnocení antiaromatázové aktivity isoflavonoidů obsažených v biotransformované soji Rakovina prsu patří u žen mezi nejčastěji diagnostikované nádory. Přibližně 60% nádorů prsu je tzv. hormon dependentní, mající na svém povrchu estrogenní receptory a vyžadující estrogeny ke svému růstu. Estrogeny jsou schopné podporovat transkripci genů účastnících se buněčné proliferace. Aromatáza je enzym katalyzující poslední krok biosyntézy estrogenů a její inhibice je považována za důležitý cíl v léčbě na estrogenu závislých nádorů prsu. Sója je zdrojem tzv. fytoestrogenů jako jsou genistein a daidzein. O těchto látkách se předpokládá, že by mohly být účinné v prevenci karcinomu prsu, avšak mechanismus jejich působení není plně pochopen. Tato práce je zaměřena na zhodnocení efektu extraktu sóji obsahující genistein a daidzein na aktivitu výše zmíněného enzymu. Výsledky ukázaly, že tento extrakt inhibuje aromatázu na dávce závislým způsobem, jednak v pokusech s placentálními mikrozomy, tak i v případě buněčné linie MCF-7aro. V pokusech s placentálními...
|
|
|
Vliv hydroxyskořicových kyselin na glykaci proteinů methylglyoxalem
Vejvalková, Hana ; Boušová, Iva (vedoucí práce) ; Trnková, Lucie (oponent)
Vypracovala: Hana Vejvalková Místo vypracování: Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Název: Vliv hydroxyskořicových kyselin na glykaci proteinů methylglyoxalem Školitel: PharmDr. Iva Boušová, Ph.D. Diplomová práce byla zaměřená na potenciální antiglykační vliv antioxidantů přírodního původu (hydroxyskořicových kyselin) na modifikaci bovinního sérového albuminu a aspartátaminotransferasy vlivem methylglyoxalu jako glykačního činidla. Vliv hydroxyskořicových kyselin na vznik glykačních produktů jsem sledovala pomocí fluorescenčních, absorpčních a elektroforetických metod. Hydroxyskořicové kyseliny neměly jednoznačný účinek na glykaci modelových bílkovin. Jediným derivátem, u kterého byl prokázán antiglykační účinek na tvorbu nespecifických glykačních produktů a pentosidinu měřených fluorescenčně a spektrofotometricky, byla kyselina p-kumarová ve 100 μM koncentraci. Naproti tomu 100 μM kyselina chlorogenová projevovala silné proglykační účinky ve všech použitých metodách detekce glykačních produktů. Účinek všech testovaných látek byl závislý na použité koncentraci. Z výsledků vyplývá, že čím více substituentů daná kyselina ve své molekule obsahovala, tím silnější proglykační účinek tato látka vykazovala.
|
|
|
Vznik karbonylových skupin vlivem neenzymové glykace proteinů
Krautová, Lenka ; Boušová, Iva (vedoucí práce) ; Dršata, Jaroslav (oponent)
Vypracovala: Lenka Krautová Místo vypracování: Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Název: Vznik karbonylových skupin vlivem neenzymové glykace proteinů Školitel: PharmDr. Iva Boušová, Ph.D. Tato diplomová práce byla zaměřena na optimalizaci stanovení množství karbonylových skupin v biologickém materiálu. Karbonylové skupiny vznikají vlivem oxidace nebo glykace proteinů. Jako modelovou bílkovinu pro spektrofotometrickou metodu stanovení jsem použila bovinní sérový albumin a pro elektroforetickou metodu aspartátaminotransferázu, které jsem glykovala několika glykačními činidly (glukóza, glukóza + měď, fruktóza, fruktóza + měď, metylglyoxal). U spektrofotometrického stanovení jsem optimalizovala různé parametry: rozpouštědlo, koncentraci činidla, množství bílkoviny a délku inkubace. Podařilo se mi nalézt vhodné podmínky stanovení, které jsem používala v dalších experimentech s různými glykačními činidly. U elektroforetického stanovení jsem prováděla SDS-PAGE s následným barvením stříbrem nebo imunobloting s chemiluminiscenční detekcí. Výsledky spektrofotometrického stanovení ukázaly, že nejvyšší glykační schopnost má metylglyoxal, následuje fruktóza s přídavkem měďnatých iontů, samotná fruktóza, glukóza s přídavkem měďnatých iontů a nejpomalejším glykačním činidlem je...
|
|
| |
|
|
Vliv flavonoidů na metabolismus xenobiotik
Smetanová, Anna ; Szotáková, Barbora (vedoucí práce) ; Boušová, Iva (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Titul, jméno, příjmení kandidáta: Mgr. Anna Smetanová Titul, jméno, příjmení školitele: Doc. Ing. Barbora Szotáková, Ph.D. Název rigorózní práce: Vliv flavonoidů na metabolismus xenobiotik Flavonoidy jsou široce rozšířené sekundární metabolity rostlin s protektivním účinkem proti rakovině. Jedním z protektivních mechanismů účinku je modulace biotransformačních enzymů. Xenobiotika - heterocyklické aromatické aminy jsou látky potenciálně karcinogenní, které vznikají při běžné domácí přípravě masa a ryb. Prvním biotransformačním krokem heterocyklických aromatických aminů je aktivace prokarcinogenů na aktivní N-hydroxy metabolity cytochromem P4501A2 (CYP1A2). Bylo by žádoucí, kdyby flavonoidy vhodným způsobem modulovaly enzymovou aktivitu, aby byly eliminovány nežádoucí účinky heterocyklických aromatických aminů. V této práci jsme zjišťovali vliv flavonoidů rutinu a kvercetinu a heterocyklických aromatických aminů 2-amino-3-methylimidazo[4,5-f]chinolinu (IQ) a 2-amino-3,8-dimethylimidazo[4,5-f]chinoxalinu (MeIQx) na aktivitu CYP1A v buněčné linii LS174T a HCT-8. Rutin, kvercetin, IQ a MeIQx nebyly pro buňky cytotoxické do koncentrace 50 µM. Kvercetin byl ve vyšších koncentracích cytotoxický. Kvercetin je...
|
|
|
Natural compounds with potential antioxidant activity; in vitro study in a model of protein glycoxidation
Boušová, Iva ; Dršata, Jaroslav (vedoucí práce) ; Stoklasová, Alena (oponent) ; Patočka, Jiří (oponent)
1. SUMMARY IN CZECH (ABSTRACT) Reaktivní formy kyslíku a dusíku (RONS) a volné radikály se staly v posledním desetiletí významným předmětem studia v mnoha oborech včetně medicínských. Stav, při němž je rovnováha mezi vznikem a odbouráváním volných radikálů v organismu posunuta ve prospěch jejich vzniku, se nazývá oxidační stres. Při nadbytku volných radikálů v organismu dochází k poškození biomolekul a tkání, což může vést až ke vzniku onemocnění. Oxidační stres se podílí na vzniku celé řady onemocnění, např. diabetu mellitu, aterosklerózy, revmatoidní artritidy, Alzheimerovy choroby a dalších, ale také na fyziologickém procesu stárnutí. Ve snaze pozastavit průběh stárnutí a odvrátit vznik onemocnění se začala používat různá potravní aditiva s obsahem vitamínů a antioxidantů přírodního původu. Diabetes mellitus je onemocnění charakterizované hyperglykémií a je vždy provázeno oxidačním stresem. Glukóza a různé intracelulární cukry (fruktóza, ribóza, glyceraldehyd a další) se kovalentně váží na volné aminoskupiny proteinů a způsobují poškození jejich struktury. Tento proces se nazývá neenzymová glykace. Sledem následných reakcí vznikají pozdní produkty pokročilé glykace (AGEs), které se podílí na tvorbě kovalentních vazeb mezi sousedními molekulami proteinů (crosslinks). Mezi nejvýznamnější AGEs patří N--...
|
host ::
RSS.