|
Stanovení vitamínů A, D a E metodou sekvenční injekční chromatografie
Trefilová, Kateřina ; Chocholouš, Petr (oponent) ; Sklenářová, Hana (vedoucí práce)
Byl vypracován postup separace vitamínů A, D a E pomocí monolitických kolon zapojených v systému sekvenční injekční analýzy. Po provedené optimalizaci byly vybrány následující podmínky separace: analýza na: monolitické koloně 25 mm dlouhé Chromolith Flash RP-18e kolony, 4,6 mm I.D. (Merck, Germany), při rychlosti (10 µl/s) za použití mobilní fáze acetonitril metanol (1:1, v/v). Monolitická kolona byla v SIA systému zapojena mezi vícecestný ventil a průtokovou Z celu. Spektrofotometrická detekce byla provedena při vlnových délkách absorpčních maxim pro vitamín A - 324 nm, D - 265 nm, E - 285. Celková délka SIA analýzy byla 400 s (z toho 230 s trvala vlastní separace). Ze základních chromatografických validačních parametrů byly vyhodnoceny faktor symetrie AS, rozlišení RS, počet teoretických pater a opakovatelnost. Faktor symetrie pro vitamín A - 1,309, pro vitamín D2 - 1,302, pro D3 - 1,286 , pro vitamín E - 1,158. Rozlišení píků pro vitamíny A-D2 je 3,607, D2-D3 4,232, D-E 1,532. Počet teoretických pater pro vitamín A 998, pro vitamín D2 1621, pro vitamín D3 2091 a vitamín E 2376. Opakovatelnost byla vypočítána z 6 nástřiků, kdy z výšky píků jednotlivých látek byla vypočítaná relativní směrodatná odchylka. Opakovatelnost je pro vitamín A - 0,53 %, pro vitamín D2 - 0,35 %, pro vitamín D3 - 0,81 % a...
|
|
Vliv salmonelového lipopolysacharidu na genový přepis a sekreci inferferonu gama
Machovská, Jana ; Celer, Vladimír (oponent) ; Jílek, Petr (vedoucí práce)
Autor: Bc. Jana Machovská Název: Vliv salmonelového lipopolysacharidu na genový přepis a sekreci interferonu gama Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biologických a lékařských věd (KBLV) studijní obor: Odborný pracovník v laboratorních metodách Cíl práce: Cílem diplomové práce je posoudiv vliv typu salmonelového lipopolysacharidu na aktivaci genového přepisu a produkci interferonu gama (IFN-) jako ústředního cytokinu imunitní reakce proti intracelulárním bakteriálním patogenům. Studie byla provedena na infekčním modelu gnotobiotického prasete infikovaného gramnegativní bakterií Salmonella enterica serovar Typhimurium kmen LT2 nebo jejím rfaL- mutantem. Metody: 1) Vytvoření čtyř skupin selat: kontrolní bezmikrobní skupina (GF), skupina konvenčních selat a skupiny selat infikovaných kmenem LT2 a rfaL- 2) stanovení počtu CFU v krvi a výplachu tenkého střeva kultivací na bakteriologických půdách 3) Izolace celkové RNA z ilea, stanovení její koncentrace (spektrofotometricky) a odhad čistoty (A280/A260). 4) reverzní transkripce 5) kvantifikce specifické vzniklé cDNA (real-time PCR s LNA sondami) 6) normalizace a relativizace dat z real-time PCR 7) stanovení cytokinů jako proteinů v krvi a výplachu tenkého střeva metodou ELISA Výsledky: 1) Počet bakterií v tenkém...
|
|
Stanovení septonexu ve farmaceutických přípravcích metodou kapilární zónové elektroforézy s vodivostní detekcí
Šindelková, Martina ; Polášek, Miroslav (vedoucí práce) ; Pospíšilová, Marie (oponent)
STANOVENÍ SEPTONEXU VE FARMACEUTICKÝCH PŘÍPRAVCÍCH METODOU KAPILÁRNÍ ZÓNOVÉ ELEKTROFORÉZY S VODIVOSTNÍ DETEKCÍ Byla vyvinuta nová metoda kapilární zónové elektroforézy s bezkontaktní vodivostní detekcí pro stanovení septonexu ve farmaceutických přípravcích. Optimální podmínky pro separaci a stanovení septonexu byly následující: základní elektrolyt 30mM MES upravený 20mM TRISem na pH = 7,0, který obsahuje (2-hydroxypropyl)-β-cyklodextrin o koncentraci 12,5mg/ml, 25kV, 25řC, nástřik 15 sekund při tlaku 50mbar. Jako vnitřní standard byl použit N,N-dimethylethanolamin (200µg/ml). Pík septonexu byl dostatečně separován od píku vnitřního standardu i od EOF. Analýza byla provedena v křemenné kapiláře (vnitřní průměr 50µm, celková délka 75cm a délka k detektoru 45cm). Analýza trvala méně než 4 minuty, s promýváním kapiláry méně než 16 minut. Kalibrační závislost byla pro septonex lineární 75µg/ml - 300µg/ml, korelační koeficient r = 0,9976. LOD byl 9μg/ml a LOQ byl 30μg/ml. Při stanovení septonexu v reálném farmaceutickém přípravku byla pozorována špatná opakovatelnost ploch analytu, způsobená patrně nedokonalým potlačením adsorpce septonexu na vnitřní stěnu křemenné kapiláry. Tento problém bude moci být pravděpodobně vyřešen přídavkem organických rozpouštědel do elektrolytu nebo použitím modifikovaných...
|
|
Optimalizace chromatografické separace pro stanovení 4-aminofenolu a účinných látek v léčivém přípravku Valetol
Daňková, Jana ; Šatínský, Dalibor (vedoucí práce) ; Sklenářová, Hana (oponent)
Tato rigorózní práce se zabývá optimalizací separačních podmínek stanovení paracetamolu, kofeinu, propyfenazonu a 4-aminofenolu v hromadně vyráběném léčivém přípravku Valetol. Jako analytická metoda byla zvolena HPLC s UV detekcí hlavně z těchto důvodů: tablety obsahují mnoho dalších pomocných látek, které jsou během analýzy ze vzorku separovány a neznemožňují stanovení samotných účinných látek možnost sledování stability léčivých látek Práce byla pojata jako původní, a je kladen důraz na co možná největší jednoduchost a časovou nenáročnost optimalizované separace při zachování vysoké přesnosti a spolehlivosti dané metody. Optimální podmínky vhodné pro finální validaci byly nalezeny při separaci na koloně C-18 RP-amide. Celkový čas analýzy nepřesahuje 13 minut i s ekvilibrací kolony po gradientové eluci na původní podmínky. Všechny látky jsou rozdělené s rozlišením větším než 1,5. Píky látek jsou díky gradientu symetrické a nevykazují kromě píku AMF výrazné chvostování. Nulová linie je i přes gradientovou eluci stabilní.
|
|
Stanovení obsahu residuí kofeinu v povrchových vodách metodou HPLC s UV detekcí
Glosová, Ivana ; Solich, Petr (vedoucí práce) ; Chocholoušová Havlíková, Lucie (oponent)
Životní prostředí je stále více zatěžováno residuii medikamentů a pravidelně konzumovaných látek. Cílem tohoto projektu bylo stanovit obsah kofeinu v povrchových vodách ( Mondego River, Coimbra, Portugaslko). Koncentrace kofeinu a jeho metabolitů v povrchových vodách mohou být ukazatelem nakolik se lidský faktor podílí na znečištění povrchových vod. Kofein je sloučenina obsažená v rostlinách, jídle, různých nápojích a také jako účinná látka v kombinovaných léčivých přípravních. Dobrá rozpustnost ve vodě (13,5 g/l), netěkavost a pravidelná konzumace propůjčuje kofeinu profil kvalitního a stabilního ukazatele lidského faktoru znečištění povrchových vod. Cíl této studie bylo získat data o jejich výskytu v povrchových vodách Portugalska ( řeka Mondego). SPE ( Solid Phase Extraction) extrakce přes polymerní Oasis HLB kolonu byla použita k extrahovaní kofeinu a kvantifikace a detekce byla provedena pomocí HPLC systému s UV detekcí ( vlnová délka 280 nm). Všechny vzorky byly negativní, neobsahovaly residua kofeinu.
|
|
Srovnání webových stránek vybraných velkých evropských měst
Korous, Petr ; Toman, Prokop (vedoucí práce) ; Sigmund, Tomáš (oponent)
Předmětem této bakalářské práce je analýza a srovnání tří webových stránek vybraných velkých evropských měst: Berlína, Vídně a Curychu. Nejprve jsou popsány okolnosti internetových stránek, jako internet a jazyk HTML. Následuje popis webových stránek měst, jejich základní legislativní úpravy a teoretická část je zakončena stručným popsáním způsobů hodnocení webových stránek. V první části analýzy je navržena metodika hodnocení obsahující několik skupin kritérií, jimž jsou přiřazeny různé váhy. V části druhé je potom provedeno samotné vyhodnocení výsledků celkových i v jednotlivých kategoriích. Nakonec jsou tyto výsledky vzájemně porovnány, stanoveny kritické nedostatky a doporučen způsob jejich odstranění.
|
|
Vyšetření významu peptidů regulujících příjem potravy a nutriční stav u dětí a adolescentů
Bronský, Jiří ; Průša, Richard (vedoucí práce) ; Pelouch, Václav (oponent) ; Hyánek, Josef (oponent)
Úvod: Regulace příjmu potravy a nutričního stavu je komplexní děj zprostředkovaný vzájemnou souhrou řady regulačních peptidů centrálního nervového systému, gastrointestinálního traktu a tukové tkáně. Tyto systémy jsou propojeny zpětnými vazbami, které informují o příjmu potravy a množství energetických zásob v organismu. Porucha v některé z těchto oblastí může vést ke změně nutričního stavu organismu. Metody: Radioimunoanalýzou byly stanoveny plazmatické hladiny orexinu A, celkového ghrelinu a sérové hladiny leptinu a enzymovou imunoanalýzou byly stanoveny sérové hladiny adiponektinu u zdravých jedinců a u dětských pacientů s obezitou, mentální anorexií, Crohnovou nemocí a celiakální sprue a byl popsán vliv nutriční intervence na tyto hladiny. Dále byl zhodnocen vztah jednotlivých regulačních peptidů k základním biochemickým a antropometrickým ukazatelům nutričního stavu. Metodou enzymové imunoanalýzy s imunofluorescenční detekcí jsme stanovili plazmatické hladiny celkového a neredukovaného amylinu u dospělých pacientů s osteoporózou, diabetem II. typu a u kontrolní skupiny. Výsledky: Během redukce tělesné hmotnosti u dětských a adolescentních pacientů s obezitou došlo ke statisticky významným změnám plazmatických hladin orexinu A a celkového ghrelinu, zatímco sérové hladiny adiponektinu se významně...
|
|
Asociace utilizace nutričních substrátů a prediktorů morbidity a mortality u pacientů s CHOPN
Poláková, Terezie ; Kovařík, Miroslav (vedoucí práce) ; Hronek, Miloslav (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biologických a lékařských věd Student: Mgr. Terezie Poláková Konzultant: PharmDr. Miroslav Kovařík, Ph.D. Název práce: Asociace utilizace nutričních substrátů a prediktorů morbidity a mortality u pacientů s CHOPN Chronická obstrukční plicní nemoc (CHOPN) není onemocněním pouze respiračního systému, ale ovlivňuje celkový zdravotní stav pacienta. Mezi jeho závažné důsledky patří hlavně změny v metabolismu živin, které mohou být pro pacienta nebezpečné. Typickým systémovým problémem pacientů s CHOPN je ztráta svalové hmoty. Tato studie se zabývala souvislostmi mezi utilizací nutričních substrátů a indexů, které jsou využívány k predikci morbidity a mortality, u 51 pacientů ve všech stádiích CHOPN (38 mužů a 13 žen ve věkovém průměru 67 ± 7 let) v porovnání s kontrolní skupinou zdravých dobrovolníků (4 muži a 5 žen ve věkovém průměru 62 ± 4). Měření probíhala ambulantně s využitím metody nepřímé kalorimetrie a stanovení množství močoviny v moči. Statisticky významné rozdíly v utilizaci substrátů jsme vyhodnotili pouze v případě relativní utilizace proteinů u pacientů s CHOPN, která měla medián hodnot nižší o 5 % než kontrolní skupina. Utilizace sacharidů a lipidů nebyla významně rozdílná mezi pacienty s CHOPN a zdravými...
|
|
Vyhledání referenčních genů pro relativní kvantifikaci mRNA z Haemonchus contortus
Růžičková, Michaela ; Matoušková, Petra (vedoucí práce) ; Zemanová, Lucie (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Michaela Růžičková Školitel: Ing. Petra Matoušková, Ph.D. Název diplomové práce: Vyhledání referenčních genů pro relativní kvantifikaci mRNA z Haemonchus contortus Haemonchus contortus je parazitická hlístice, jejíž multirezistence k anthelminti- kům je celosvětovým problémem ohrožujícím hlavně chovy malých přežvý- kavců. V roce 2013 byl publikován její genom a transkriptom, což umožnilo rozsáhlý výzkum genové exprese. Referenční geny pro tyto studie prozatím ne- byly stanoveny. Použití vhodných referenčních genů je nezbytné pro správnou normalizaci hladin exprese genů. Cílem této práce bylo navrhnout a zhodnotit potenciální referenční geny pro studie genové exprese u dospělců H. contortus. Navrženo bylo 11 genů, stabilita jejich exprese byla hodnocena na samcích a sa- micích dvou kmenů H. contortus, jednoho na anthelmintika vnímavého (ISE) a druhého multirezistentního (WR). Z jedinců byla extrahována RNA, přepsána reverzní transkripcí do cDNA. Tato byla zředěna a analyzována kvantitativní real-time PCR s detekcí pomocí SYBR Green I. Stabilita exprese byla hodnocena počítačovými programy BestKeeper, geNorm, NormFinder a komparativní CT metodou. Nejstabilnějšími geny se jeví ncbp, ama, sodc, gapdh a...
|
|
Čistá pozice zaměstnance a podnikatele vůči veřejným rozpočtům
Kvízová, Kateřina ; Klazar, Stanislav (vedoucí práce) ; Brabcová, Pavlína (oponent)
Tato diplomová práce je zaměřena na analýzu odvodových povinností a z nich plynoucích nároků na benefity u zaměstnanců a osob samostatně výdělečně činných v dlouhodobém časovém horizontu. Hlavním cílem práce je stanovení celkové čisté pozice zaměstnance a OSVČ vůči veřejným rozpočtům. Diplomová práce je rozdělena na teoretickou a praktickou část. V rámci teoretické části je analyzováno odvodové zatížení modelových subjektů a jím plynoucí benefity z účasti na daných subsystémech sociálního pojistného. V praktické části práce jsou nejprve stanoveny předpoklady modelu a na základě nich poté dochází ke komparaci v odvodovém zatížení a přijatých benefitech modelových subjektů a ke stanovení jejich čisté pozice v rámci zkoumaného subsystému. Poslední podkapitola praktické části shrnuje celkovou čistou pozici zaměstnance a OSVČ vůči veřejným rozpočtům.
|
host ::
