|
CD46 and β1integrin interaction in mouse sperm head
Šebková, Nataša ; Frolíková, Michaela ; Dvořáková-Hortová, Kateřina
CD46 protein plays an important role during fertilization and its role is associated with acrosome stability. CD46 is probably involved in signalling pathways triggering the acrosome reaction. Integrins interact with many cytoskeletal proteins such as actin, therefore changes in the actin cytoskeleton before and after AR may lead to changes in the association and localization of CD46 and β1integrin. Our aim was to monitor mutual CD46 and β1integrin interaction detected by the proximity ligation assay. It generates a localized signal in a form of spots revealing the exact position of the recognition event. Proteins interaction was study in freshly released sperm and sperm during the acrosome reaction, during which there is a gradual relocation of these proteins towards the equatorial segment and the whole sperm head. Proteins α and β tubulin were used as a positive control, α tubulin and β1 integrin as a negative control. In situ PLA showed a distinct spotted signal indicating the mutual interaction of CD46 and β1integrin. A positive response was demonstrated not only in freshly released sperm but also in sperm during the acrosome reaction. Freshly released sperm were distinctively labelled in the acrosome region and the neck, similarly to the positive control. Sperm during the acrosome reaction showed the signal across the whole sperm head region. No signal or sporadic nonspecific staining was detected in the case of the negative control. In summary, our results deliver new information that proteins CD46 and β1 integrin interact with each other. These results suppose the theory that β1 integrin can mediate a connection between CD46 and sperm cytoskeleton thereby molecules of signalling pathways leading to activation of the acrosome reaction.
|
|
Fluorescent analysis of the differential protein expression in normozoospermic and asthenozoospermic sperm samples
Děd, Lukáš ; Čapková, Jana ; Kubátová, Alena ; Teplá, O. ; Pěknicová, Jana
Asthenozoospermia is one of the main seminal pathologies underlying male infertility. Previous proteomic studies have demonstrated the significant differences in the protein profiles between normozoospermic and asthenozoospermic sperm samples. Since these studies were primarily focused on the identification of differentially expressed proteins by mass spectrometry, we aimed to evaluate the ability of our diagnostic antibodies to detect the differential expression of selected protein markers by fluorescent microscopy and flow cytometry techniques. Therefore, we analyzed sperm samples from 30 men with normal and 30 men with astheno spermiograms, average by the panel of our diagnostic anti-human sperm (Hs) antibodies. Fluorescent microscopy and flow cytometry analysis revealed quantitative differences in the protein abundances between normo and astheno sperm samples, namely, in GAPDHs, evaluated with Hs-8 MoAb, VCP, evaluated with Hs-14 MoAb, and ATP synthase, evaluated with MoAb Hs-36. From the methodological point of view, we observed very high correlation between the data obtained by fluorescent microscopy and flow cytometry techniques and therefore both methods are useful for evaluation of protein differences associated with asthenozoospermia. From the clinical point of view, we observed the strong association of the low sperm motility in the sample with the expression of proteins, playing an important role in sperm energy metabolism (expected), but also with the expression of all tested intra-acrosomal proteins. These findings further demonstrate asthenozoospermia as a complex semen disorder frequently associated with other semen pathologies, which are not diagnosed by basic semen analysis, and the possibility to use monoclonal antibodies as a tool for diagnosis of protein associated sperm pathologies in the semen with the low sperm motility.
|
|
Revealing phosphoproteins playing role in tobacco pollen activated in vitro
Fíla, Jan ; Honys, David (vedoucí práce) ; Fischer, Lukáš (oponent)
6 Abstract in Czech Po dopadu na bliznu se zralý pyl tabáku rehydratuje, aktivuje a klíčí z něj pylová láčka. Rehydratace je doprovázena de-represí skladovaných mRNA, z nichž se syntetizují nové proteiny. Při vývoji zralého pylu v rychle rostoucí pylovou láčku se velmi pravděpodobně uplatňují také posttranslační modifikace proteinů, konkrétně fosforylace, jež se podílí na regulaci celé řady buněčných procesů. Vzhledem k tomu, že pouze malý podíl proteinů je v daném okamžiku v buňce fosforylován, bývá nevyhnutelné využít nejrůznější obohacovací techniky. Pro obohacení fosfoproteinů z celkového proteinového extraktu zralého pylu a pylu aktivovaného in vitro 30 minut byla v této diplomové práci aplikována afinitní chromatografie s využitím kovového oxidu/hydroxidu (MOAC), kde byl matricí hydroxid hlinitý. Získaná obohacená frakce byla rozdělena nezávisle dvěma metodami; klasickou dvojrozměrnou elektroforézou (2D-GE) a kapalinovou chromatografií (LC). Hmotnostní spektrometrií (MS) byly analyzovány vzorky získané oběma způsoby dělení, a celkem tak bylo identifikováno 139 fosfoproteinových kandidátů. Fosfopeptidové obohacení využívající oxid titaničitý vedlo k lokalizaci 51 fosforylačních míst, a tak rozšířilo počet přesně identifikovaných fosforylačních míst na celkových 52. Klíčová slova: samčí gametofyt, zralý...
|
| |
|
Vliv stísnění na vývoj úplavu za příčně obtékanými impaktními proudy
Dvořák, Rudolf ; Vogel, J.
Příspěvek se zabývá fenomenologií vícenásobných stísněných proudů, a to především charakterem a vývojem úplavů mezi jednotlivými proudy. Ten se podílí nejvýrazněji na výměně tepla a hmoty od protistěny. Rozbor je proveden na základě experimentu (měřen IV) a numerické simulace (FLUENT). Jsou zdůrazněny rozdíly mezi tímto případem a úplavy za jednotlivými, popř. nestísněnými proudy.
|
|
EF-Tu Protein Domains:Functions and Thermostability
Šanderová, Hana
Univerzita Karlova v Praze Přírodovědecká fakulta Katedra genetiky a mikrobiologie Elongační faktor EF-Tu Funkce a termostabilita domén Disertační práce Hana Šanderová Specializace: Molekulární a buněčná biologie, genetika a virologie Školitel: Prof. MUDr. Jiří Jonák, DrSc. Oddělění genové exprese, Ústav molekulární genetiky AV ČR Praha 2008 Souhrn disertační práce Bakteriální elongační faktor Tu (EF-Tu) je již po desetiletí podrobně studován pro svou klíčovou roli v proteosyntéze. Je to modelová multifunkční GTP-bílkovina. Tato bílkovina je též v centru zájmu, protože představuje vhodný cíl pro nová antibiotika. Kromě toho jsou bílkoviny EF-Tu díky vysoké homologii ve struktuře a funkci vhodné pro studium evolučních vztahů mezi organismy a pro zkoumání strukturních vlastností, které podmiňují adaptační mechanismy k různým životním podmínkám. Všechny známé bílkoviny EF-Tu jsou složeny ze tří domén, a proto jsou vhodnými modelovými bílkovinami pro zkoumání architektury uspořádní domén v bílkovinách. Jedním z hlavních výzkumných projektů na Oddělení genové exprese v Ústavu molekulární genetiky AV ČR, kde jsem vypracovala svou disertační práci, bylo studium primární struktury, regulace transkripce a regulace funkcí bakteriálního elongačního faktoru Tu z Gram pozitivní termofilní bakterie Bacillus...
|
|
Hemoprotein Nitric Oxide Synthase in Aplysia Californica
Buganová, Michaela ; Martásek, Pavel (vedoucí práce) ; Pelouch, Václav (oponent) ; Druga, Rastislav (oponent)
Oxid dusnatý (NO) má nezastupitelnou roli v neuronálni signalizaci v řadě eukaryotických a prokaryotických organizmů. NO-syntázy (NOS) jsou hem-obsahujicí monooxygenázy, které v přítomnosti kyslíku katalyzují oxidaci L-argininu na NO a L-citrulin. NO produkovaný NOsyntázou je plynná molekula, která lehce difunduje přes membrány a zprostředkovává jak mezibuněčnou, tak i vnitrobuněčnou komunikaci. NO aktivuje enzymy vážici kovy včetně solubilni guanylátcyklázy (sGC), a tím zvyšuje hladinu druhého posla cyklického guanosinmonofosfátu (cGMP) (1, 2), který dále zprostředkovává řadu fyziologických a patologických procesů v neuronech. Nicméně, detailní charakteristika nitrergních neuronů a funkce NO v centrální nervové soustavě (CNS) není zcela objasněna. Cílem dizertační práce bylo charakterizovat neuronálni NOS, proteiny spojené s metabolismem neuronálni NOS a signální dráhu NO v CNS zeje kalifornského (Aplysia cali/ornica), populárního experimentálního modelu buněčných a systémových neurověd. Na biochemické úrovni byla zjištěná závislost NOS Aplysie (/IcNOS) na kalciu- kalmodulinu (Ca-CaM) a NADPH. Řada reprezentativních inhibitorů savčích NOS isoforem též snížila NOS aktivitu u Aplysie. Polyklonálni protilátky vytvořené proti krysí NOS hybridizovaly na Western blotu s purifikovanou /IcNOS (160 kDa protein) z...
|
|
Two Essays on the Modeling of Monetary Policy Transmission Mechanism
Rusnák, Marek ; Horváth, Roman (vedoucí práce) ; Svoboda, Svatopluk (oponent)
V první eseji se zabýváme vývojem transmisního mechanismu měnové politiky v České republice za období 1993:1 - 2009:9. Používame Bayesovský vektorový autoregresní model se stochastickou volatilitou a s parametry měnícími se v čase. Výsledky naznačují, že transmisní mechanismus měnové politiky byl stabilní po dobu většiny sledovaného období. Výjimku tvoří období krize, které se vyznačuje oslabením transmise do cen. Nicméně další výsledky ukazují, že transmise do cen se vrátila zpět do své předkrizové síly již ve druhé polovině roku 2009. Dále rozšiřujeme odhadovaný model o finanční proměnné, abychom mohli kvantifikovat důležitost finančních šoků pro měnovou transmisi. Výsledky naznačují, že finanční šoky skutečně hrají nemalou roli ve vysvětlování fluktuací výstupů a cen. Druhá esej představuje meta-analýzu efektů šoků měnové politiky na cenovou hladinu. Nejdříve představujeme souhrnné statistiky, které poukazují na všudypřítomnost cenové hádanky, kterou je označován nárůst cenové hladiny způsobený restriktivním šokem měnové politiky, ve výsledcích empirických studií. Dále, užitím meta-analytických metod, konkrétně testu asymetrie trychtýřového grafu, ukazujeme, že publikační zaujatost narůstá s časovým horizontem. Nakonec odhadujeme vysvětlující meta-regresi. Výsledky naznačují, že strukturální...
|
|
Zotavovací procesy v disperzně a precipitačně zpevněných Al slitinách
Uhlíř, Jaromír
Práce se zabývá rozborem vlivu přítomnosti částic jiných fází na procesy zotavení a rekrystalizace ve spojitě odlévaných pásech hliníkové slitiny AA 8011 na bázi Al-Fe-Si, a to v závislosti na uspořádání příměsových atomů a na způsobu termomechanického zpracování. Nerovnovážná krystalizace tuhého roztoku, ke které dochází během spojitého odlévání vlivem rychlého chlazení, vnáší do materiálu složitou strukturu jiných fází, která je zpravidla nehomogenně rozmístěna v objemu. Za těchto okolností dochází k výraznému zhoršení mechanických vlastností slitin. Důležitým úkolem, který v posledních letech řeší vědci zabývající se materiálovým výzkumem, je nalezení takových postupů termomechanického zpracování, které by vedly k dosažení vyváženého fázového složení a optimálních mechanických vlastností srovnatelných s vlastnostmi výrobků vyráběných konvenčními metodami. Takovými vlastnostmi jsou především vysoká tvárnost v kombinaci s dostatečnou pevností. Ke studiu fyzikálních vlastností slitiny bylo použito měření elektrické rezistivity během lineárního ohřevu, měření termoelektrické síly a měření tvrdosti materiálu. Vývoj struktury a mikrostruktury ve slitině v průběhu tepelného zpracování byl studován pomocí optické mikroskopie a transmisní a řádkovací elektronové mikroskopie.
|
|
Hodnocení příjmu nutričních substrátů a vybraných nutrientů v graviditě
Sovišová, Petra ; Hronek, Miloslav (vedoucí práce) ; Vejsová, Marcela (oponent)
HODNOCENÍ PŘÍJMŮ NUTRIČNÍCH SUBSTRÁTŮ A VYBRANÝCH NUTRIENTŮ V GRAVIDITĚ Katedra biologických a lékařských věd Petra Sovišová Správná výživa v období gravidity sehrává významnou roli nejen pro zdravý vývoj plodu, ale i pro celkový zdravotní stav matky, a to jak v průběhu gravidity, tak i po porodu. Cílem studie bylo zjistit vyhodnocením výživy kontrolní skupiny těhotných žen konkrétní nutriční příjem energie, živin, vybraných vitaminů a minerálních látek v současné době v našich českých podmínkách. Testování probíhalo formou týdenních záznamů veškeré přijaté potravy u skupiny náhodně vybraných těhotných žen od druhého trimestru těhotenství, různého věku a rozdílného vzdělání, u nichž byl i předpoklad rozdílnosti stravovacích návyků. Studie probíhala v období od března do října 2006. Data byla zpracována pomocí počítačového programu NutriDan. První část práce je zaměřena teoreticky. Vzhledem k obsahu sledované problematiky jsem se v této práci podrobněji zabývala především příjmem vybraných nutrientů - tedy lipidů, sacharidů, proteinů a celkovým příjmem energie v období gravidity. U jednotlivých nutrientů jsem se vedle jejich popisu zabývala i dopady jejich přebytku či nedostatku pro ženu v období těhotenství. Výsledky naměřených hodnot kontrolní skupiny těhotných žen jsou uvedeny v druhé části...
|
host ::
