|
|
Příprava organelových markerů v kvasinkách Saccharomyces cerevisiae
Dekha, Daniella ; Vopálenská, Irena (vedoucí práce) ; Papoušková, Klára (oponent)
Cílem práce bylo připravit sadu kmenů s fluorescenčně značenými organelami. Použitým organismem je haploidní kmen s vysokou frekvencí homologní rekombinace Saccharomyces cerevisiae BY4742. Kvasinka S. cerevisiae je jednobuněčný organizmus a patří mezi nejstudovanější experimentální živé systémy. Její generační doba bývá 1,5-2 hodiny, což umožňuje rychle sledovat vývin kultury jak na pevném, tak i v tekutém médiu. Pro každou organelu byly vybrány specifické proteiny, a to proteiny lokalizované na membráně vakuol (Vph1, Vtc3), peroxisomů (Pex3), jádra (Nvj1), endoplazmatického retikula (Sec63), mitochondrií (Cox4) a v lumen vakuol (Prc1). Vybrané proteiny byly označené připojením fluorescenčních proteinů (yEGFP, yomCherry nebo yomRuby2) k jejich C-koncům. Připravené kmeny byly analyzované v tekutých a na pevných médiích. Byly sestrojené růstové křivky, porovnána fluorescence v různých fázích růstu a zjištěn vliv dvou různých zdrojů uhlíku na expresi vybraných genů. Celkem bylo připraveno a otestováno 12 kmenů s fluorescenčními organelovými markery pro membránu vakuol, peroxisomů, jádra, endoplazmatického retikula, mitochondrií a vakuolární lumen a dále 5 kmenů s dvojicí fluorescenčních markerů pro vakuolární membránu a vybranou další organelu (membránu peroxisomů, jádra, endoplazmatického retikula,...
|
|
|
Úloha proteinu Erv14 v udržování homeostáze kationtů alkalických kovů v kvasince Saccharomyces cerevisiae
Hrášková, Michaela ; Papoušková, Klára (vedoucí práce) ; Vopálenská, Irena (oponent)
Protein Erv14 působí v kvasince Saccharomyces cerevisiae jako cargo receptor ve váčcích COPII. Velké množství membránových proteinů, včetně Na+, K+/H+ antiporteru plazmatické membrány Nha1, který se podílí na udržování homeostáze kationtů alkalických kovů, vyžaduje pro svůj transport z ER protein Erv14. V nepřítomnosti Erv14 je Nha1 částečně zadržován uvnitř buněk, a tím je ovlivněna i jeho celková měřitelná transportní aktivita v plazmatické membráně. Přestože Erv14 interaguje s transmembránovými doménami antiporteru, ukázalo se, že zkrácená verze antiporteru Nha1, postrádající dlouhý hydrofilní C-konec, není v transportu do plazmatické membrány na přítomnosti Erv14 závislá. Tato práce přispívá k porozumění úloze proteinu Erv14 v udržování homeostáze kationtů alkalických kovů v buňkách S. cerevisiae. Byly připraveny dva kmeny S. cerevisiae postrádající gen ERV14 a byl studován vliv této delece na růst buněk a jejich toleranci vůči solím. Dále byla pomocí heterologní exprese proteinů NHA z různých druhů kvasinek, výrazně se lišících délkou hydrofilního C-konce, studována lokalizace a funkce těchto antiporterů v buňkách S. cerevisiae za přítomnosti či nepřítomnosti proteinu Erv14. Naše výsledky naznačily, že by délka C-konce antiporterů mohla hrát roli v jejich požadavku na přítomnost Erv14 pro...
|
|
|
Úloha Na+/H+ antiporterů plasmatické membrány ve fyziologii kvasinkových buněk
Papoušková, Klára ; Sychrová, Hana (vedoucí práce) ; Hašek, Jiří (oponent) ; Flachs, Pavel (oponent)
Souhrn _____________________________________________________________________________________________________________ 60 5. SOUHRN Souhrn _____________________________________________________________________________________________________________ 61 Nejdůležitější výsledky získané v rámci této disertační práce, která přispěla k porozumění fyziologické roli kvasinkových Na+ /H+ antiporterů plasmatické membrány, je možno shrnout do těchto bodů: 1. Studium kvasinkových Na+ /H+ antiporterů na úrovni jejich sekvencí (publikace č. 1) ukázalo, že struktura všech tří skupin antiporterů (Nha1, Nhx1 i Kha1) pravděpodobně obsahuje 12 transmembránových segmentů, v sekvencích proteinů jsme nalezli některé konzervované aminokyseliny či motivy, jež by mohly být významné pro aktivitu antiporterů, a námi provedená fylogenetická studie ukázala, že proteiny Nhx1 jsou příbuzné savčím a rostlinným Na+ /H+ antiporterům, proteiny Kha1 se zdají být nejpříbuznější s bakteriálními antiportery a Na+ /H+ antiportery plasmatické membrány (rodina Nha1) tvoří oddělenou vývojovou větev, jejíž představitelé byli doposud charakterizováni jen v houbových organismech. 2. Gen DhNHA1 kvasinky D. hansenii kóduje Na+ /H+ antiporter plasmatické membrány se širokou substrátovou specifitou (publikace č. 2). Tento protein se tedy může v D. hansenii...
|
|
|
Úloha proteinu Erv14 v buňkách kvasinky Saccharomyces cerevisiae
Hrášková, Michaela ; Papoušková, Klára (vedoucí práce) ; Macůrková, Marie (oponent)
Cílem této bakalářské práce je shrnout veškeré dosud zveřejněné poznatky o roli proteinu Erv14 v buňkách kvasinky Saccharomyces cerevisiae. Protein Erv14 funguje jako receptor pro náklad ("cargo") v endoplazmatickém retikulu (ER), kde umožňuje zainkorporování některých transmembránových proteinů do váčků COPII, čímž je umožněn jejich transport do Golgiho aparátu. V S. cerevisiae bylo nalezeno mnoho proteinů, jejichž transport z ER je závislý na přítomnosti Erv14. V buňkách postrádajících Erv14 jsou tyto proteiny zadržovány v ER a nemohou plnit své funkce. Mezi tyto proteiny paří např. Axl2, který je nezbytný pro axiální pučení, Sma2, díky němuž je zajištěna normální tvorba prosporové membrány během sporulace, katalytická podjednotka chitin syntázy III, Chs3, významná pro syntézu chitinu, a Na+ , K+ /H+ antiporter plazmatické membrány Nha1 účastnící se v buňkách udržování homeostáze kationtů alkalických kovů. O významu funkce proteinu Erv14 vypovídá i skutečnost, že homology tohoto proteinu byly nalezeny i v dalších organismech, a to jak v říši živočichů, včetně člověka, tak v říši rostlin. Klíčová slova: Erv14, cargo receptor, váčky COPII, transport, Saccharomyces cerevisiae
|
|
|
Studium vzájemných interakcí patogennich kvasinek rodu Candida a bakterie Pseudomonas aeruginosa v průběhu kokultivací
Mynářová, Lenka ; Hodek, Petr (vedoucí práce) ; Papoušková, Klára (oponent)
Oportunisticky patogenní druhy kvasinek rodu Candida jsou častým původcem kvasinkových infekcí člověka. Ačkoli se pozornost dnešní medicíny soustředí spíše na vývoj léku proti rakovině, AIDS nebo Alzheimerově chorobě, není možné opominout ani hrozbu systémových kandidóz. Ty představují velké nebezpečí pro jedince se sníženou imunitou a jsou spojeny s vysokou mortalitou, přičemž terapie je finančně náročná a ne vždy účinná. Bakterie Pseudomonas aeruginosa by mohla být jistou inspirací v boji proti patogenním kvasinkám, protože dokáže inhibovat růst nejrozšířenějšího původce rodu Candida, C. albicans. P. aeruginosa jednak produkuje řadu toxických nízkomolekulárních látek a zároveň ne zcela známým mechanismem interaguje s buněčnou stěnou C. albicans a tak podporuje její lyzi. Nicméně, koexistence těchto mikroorganismů je také možná a jejich vzájemný vztah záleží na různých faktorech. Tato skutečnost byla zjištěna díky tomu, že některé nemoci a patologické stavy se vyznačují koinfekcí pacienta vyvolanou jak původcem P. aeruginosa, tak C. albicans. V této práci jsem studovala mechanismy interakce mezi patogenní kvasinkou C. albicans a bakterií P. aeruginosa pomocí a) sledování genové exprese C. albicans v kokultuře C. albicans + P. aeruginosa b) analýzy filtrovaných médií obou mikroorganismů a jejich...
|
host ::
RSS.