|
|
Interakce ARP2/3 s komponentami rostlinné sekretorické dráhy
Voloshina, Mariia ; Schwarzerová, Kateřina (vedoucí práce) ; Oulehlová, Denisa (oponent)
ARP2/3 je evolučně konzervovaný proteinový komplex, podílející se na nukleaci aktinu. U živočichů mutace podjednotek ARP2/3 je většinou letální. Oproti tomu arp2/3 rostliny jsou životaschopné, ale mají několik morfologických defektů. Jedním z charakteristických fenotypických projevů arp2/3 rostlin je narušená buněčná adheze. To naznačuje roli ARP2/3 komplexu v sekreci rostlinné buněčné stěny, hlavně její pektinové složky. Není však jasně, jaký je přesný molekulární mechanismus funkce ARP2/3 v této dráze. Předběžné výsledky naznačují možnou interakci ARP2/3 s proteiny sekretorické dráhy GNL1, COPI a COG. Tato práce kombinuje dvě metody - TIRFM/VAEM a koimunoprecipitaci - pro hodnocení míry kolokalizace a stanovení interakce ARP2/3 s vybranými markery. Interakce studovaných proteinů s ARP2/3 komplexem však v této práci prokázaná nebyla. Tato práce zároveň popisuje chování COPI, COG a GNL1 pomocí TIRFM/VAEM a naznačila možnou interakci GNL1 s endocytotickým markerem na plazmatické membráně. Klíčová slova: ARP2/3, COPI, COG, GNL1, sekretorická dráha
|
|
|
Functional studies of selected members of the Arabidopsis formin family
Oulehlová, Denisa ; Cvrčková, Fatima (vedoucí práce) ; Binarová, Pavla (oponent) ; Černý, Jan (oponent)
Souhrn Forminy jsou multidoménové proteiny obsahující konzervovanou FH2 doménu (forminhomology 2 domain), která je schopna katalyzovat nukleaci aktinových filament de novo. Funkce forminu, stejne jako jejich regulace, byly podrobne studovány predevším u kvasinek a živocichu, zatímco mnohem méne je známo o rostlinných forminech, které se od kvasinkových i živocišných zástupcu znacne liší v doménovém usporádání. Forminy vyšších rostlin se delí do dvou skupin, trídy I a trídy II a experimentální údaje jsou doposud k dispozici pouze pro první skupinu. V této dizertaci predkládám výsledky z experimentální studie nekolika zástupcu velké rodiny forminu u Arabidopsis, vcetne charakterizace forminu AtFH16 z trídy II. Genom Arabidopsis obsahuje 21 genu kódujících forminy, a prestože se hladina a rozložení jejich exprese znacne liší, všechny jsou transkripcne aktivní. V celkem 14-ti forminových genech jsme získali 17 homozygotních mutantu s T-DNA inzercí. Za standartních kultivacních podmínek jsme nenašli zjevné odlišnosti ve fenotypech mutantu v porovnání s kontrolami. Abychom vyradili z funkce dva dominantní pylové forminy, pripravili jsme dvojitého mutanta atfh3atfh5, avšak i v tomto prípade se vývoj mikrospor a následné klícení a rust pylových lácek nezmenily. Stejne tak nedošlo k narušení polarizovaného rustu...
|
|
|
Vliv indukovaného umlčování podjednotek ARP2/3 komplexu na strukturu rostlinných buněk
Fišerová, Kamila ; Fischer, Lukáš (vedoucí práce) ; Oulehlová, Denisa (oponent)
Tato práce se věnuje ARP2/3 komplexu, de novo nukleátoru aktinového cytoskeletu. Tento vysoce konzervovaný komplex je složený ze sedmi podjednotek a reguluje větvení aktinových filament v konstantním úhlu 70o . ARP2/3 se prostřednictvím iniciace polymerace aktinu podílí na různých funkcích v buňkách rostlin a živočichů. Podílí se například na určení směru a rychlosti růstu buněk, pohybu vezikulů a organel v rámci buňky. Mutace jednotlivých podjednotek je pro živočišné buňky letální, v rostlinách však mají tito mutanti jen mírné projevy jako je například poškození trichomů nebo změny tvaru pokožkových buněk. Cílem předložené práce bylo studium funkce ARP2/3 komplexu metodou částečného umlčení podjednotek pomocí RNA interference. Konkrétně se jednalo o podjednotku ARPC1 u Arabidopsis thaliana a podjednotku ARPC2 studovanou na buněčném modelu tabákové linii BY-2. Experimentální práce zahrnovala tvorbu DNA konstruktů navozujících umlčení, transformaci rostlinného materiálu, analýzy míry umlčení a sledování fenotypu u vybraných linií. Přestože byly nalezeny linie se sníženou hladinou transkriptu dané podjednotky ARP2/3 komplexu, nebyly u těchto linií nalezeny žádné fenotypové změny. Klíčová slova - aktin, ARP2/3 komplex, indukované umlčování
|
|
|
Specifické funkce podjednotek ARP2/3 komplexu
Fišerová, Kamila ; Fischer, Lukáš (vedoucí práce) ; Oulehlová, Denisa (oponent)
Aktin je jedním z nejrozšířenějších proteinů v živých organismech. Regulaci aktinového cytoskeletu zajišťuje mnoho mechanismů, jedním z regulátorů dynamiky aktinu u rostlin i živočichů je vysoce konzervovaný - Arp2/3 komplex. U všech organismů je tvořen dvěma velkými podjednotkami (Arp2 a Arp3) a pěti malými podjednotkami (ArpC1- ArpC5). Arp2/3 komplex řídí větvení aktinových filament v úhlu 70o . V předložené práci jsou popsány funkce jednotlivých podjednotek se zvláštním důrazem na ty, které jsou pro jednotlivé podjednotky specifické. Vytvořený souhrn překračuje hranice rostlinné říše a věnuje se i živočichům a kvasinkám, u kterých je tento komplex aktivně zkoumán, a je dostupná řada informací o mechanismech jeho regulace. V práci jsou shrnuty vzájemné interakce mezi podjednotkami i jejich interakce s regulátory Arp2/3 komplexu a dalšími proteiny. Některé z podjednotek jsou u některých organismů kódovány i více než jedním genem, v takových případech mohou mít tyto izoformy i rozdílné funkce. Arp2/3 komplex je pro živočichy nezbytný k životu, u rostlin mají však mutace v podjednotkách tohoto komplexu mírnější projevy. V rostlinách se Arp2/3 komplex uplatňuje především v rychlém a orientovaném růstu, mutace podjednotek se proto projevují typickým poškozením trichomů. Klíčová slova - Arp2/3 komplex,...
|
|
|
Functional studies of selected members of the Arabidopsis formin family
Oulehlová, Denisa ; Cvrčková, Fatima (vedoucí práce) ; Binarová, Pavla (oponent) ; Černý, Jan (oponent)
Souhrn Forminy jsou multidoménové proteiny obsahující konzervovanou FH2 doménu (forminhomology 2 domain), která je schopna katalyzovat nukleaci aktinových filament de novo. Funkce forminu, stejne jako jejich regulace, byly podrobne studovány predevším u kvasinek a živocichu, zatímco mnohem méne je známo o rostlinných forminech, které se od kvasinkových i živocišných zástupcu znacne liší v doménovém usporádání. Forminy vyšších rostlin se delí do dvou skupin, trídy I a trídy II a experimentální údaje jsou doposud k dispozici pouze pro první skupinu. V této dizertaci predkládám výsledky z experimentální studie nekolika zástupcu velké rodiny forminu u Arabidopsis, vcetne charakterizace forminu AtFH16 z trídy II. Genom Arabidopsis obsahuje 21 genu kódujících forminy, a prestože se hladina a rozložení jejich exprese znacne liší, všechny jsou transkripcne aktivní. V celkem 14-ti forminových genech jsme získali 17 homozygotních mutantu s T-DNA inzercí. Za standartních kultivacních podmínek jsme nenašli zjevné odlišnosti ve fenotypech mutantu v porovnání s kontrolami. Abychom vyradili z funkce dva dominantní pylové forminy, pripravili jsme dvojitého mutanta atfh3atfh5, avšak i v tomto prípade se vývoj mikrospor a následné klícení a rust pylových lácek nezmenily. Stejne tak nedošlo k narušení polarizovaného rustu...
|
host ::
RSS.