|
| |
|
|
Využití vybraných inhibitorů k překonání antracyklinové rezistence v terapii nádoru prsu
Grofková, Kateřina ; Laštovičková, Lenka (vedoucí práce) ; Svrčková, Katarína (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Bc. Kateřina Grofková Školitel: Mgr. Lenka Laštovičková, Ph.D. Název diplomové práce: Využití vybraných inhibitorů k překonání antracyklinové rezistence v terapii nádoru prsu Karcinom prsu je heterogenní onemocnění a je celosvětovým problémem především u žen. Již desetiletí se karcinom prsu často léčí antracyklinovým antibiotikem doxorubicinem. Největším problémem při této léčbě je kardiotoxicita, která je spojována s metabolitem doxorubicinu - doxorubicinolem. Ten vzniká enzymatickou reakcí katalyzovanou karbonyl redukujícími enzymy. Další závažný problém představuje vznikající multiléková rezistence proti antracyklinům způsobená indukovanou expresí karbonyl redukujících enzymů metabolizujících léčiva a efluxních ABC transportérů. Snaha o překonání multilékové rezistence a snížení kardiotoxicity doxorubicinu vede ke hledání nových inhibitorů pro karbonyl redukující enzymy a efluxní transportéry. V této diplomové práci byl zjišťován inhibiční účinek proteinkinázových inhibitorů (afatinib, erlotinib hydrochlorid, dacomitinib a tipifarnib) na aktivitu karbonyl redukujících enzymů (AKR1A1, 1B1, 1B10, 1C3 a CBR1). Největší inhibiční potenciál byl zaznamenán u dvojice tipifarnib - AKR1C3. Míra inhibice u 10μM...
|
|
|
Klonování a příprava plasmidu pro expresi reduktázy z vlasovky slezové
Klouček, David ; Matoušková, Petra (vedoucí práce) ; Laštovičková, Lenka (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: David Klouček Vedoucí: doc. Ing. Petra Matoušková, Ph.D. Název diplomové práce: Klonování a příprava plasmidu pro expresi reduktázy z vlasovky slezové Vlasovka slezová (Haemonchus contortus) je nejvýznamnější patogenní hlístice malých přežvýkavců, zejména ovcí a koz. Způsobuje haemonchózu, v důsledku čehož dochází k masivnímu úhynu nakažených zvířat. Hlavním řešením nákazy je farmakoterapie schválenými anthelmintiky. V současnosti je stále se zvětšujícím problémem narůstající rezistence vlasovky vůči dostupným anthelmintikům, což vede k dopadům ekologickým, tak ekonomickým. Příčin rezistence vlasovky je několik. Mezi mechanismy rezistence, jiné než v cílové molekule anthelmintika, lze zařadit zvýšenou aktivitu enzymů 1. fáze biotransformace zprostředkovanou karbonyl-redukujícími enzymy. Konkrétně aldoketoreduktázy a dehydrogenázy/reduktázy. Zvýšená aktivita těchto enzymů vede k rychlejšímu metabolismu léčiv, vzniku neúčinných metabolitů a selhání léčby. Cílem diplomové práce byla příprava plasmidu pro expresi vybrané reduktázy, který může být využit pro další studování aktivity a případně tvorbu nových cílených léčiv. Metody použité v experimentální části byly izolace RNA, reverzní transkripce, PCR,...
|
|
|
Potenciální role inhibitoru tipifarnibu v léčbě akutní myeloidní leukemie
Hrbáčová, Patricie ; Laštovičková, Lenka (vedoucí práce) ; Jirkovský, Eduard (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Bc. Patricie Hrbáčová Školitel: Mgr. Lenka Laštovičková, Ph.D. Název diplomové práce: Potenciální role inhibitoru tipifarnibu v léčbě akutní myeloidní leukémie Antracyklinová antibiotika, kam se řadí například daunorubicin, jsou zlatým standardem v léčbě akutní myeloidní leukémie. Může na ně však vznikat rezistence, a navíc nejsou plně specifická, a kromě rakovinných buněk poškozují i jiné struktury, zejména pak buňky srdeční svaloviny. Působením karbonyl redukujících enzymů dochází k přeměně daunorubicinu na metabolit daunorubicinol, jenž má výrazně horší vlastnosti v léčbě. Této reakci je možné zabránit použitím specifického inhibitoru. V této práci byl testován inhibitor tipifarnib a jeho vliv na reakce katalyzované buď aldo- ketoreduktázami (AKR1A1, 1B1, 1B10 a 1C3) anebo dehydrogenázami/reduktázami s krátkým řetězcem (CBR1). Největší inhibice byla zaznamenána u enzymu AKR1C3. Při použití tipifarnibu o koncentraci 10 μM byla naměřena inhibice 88,0 % a inhibitor o koncentraci 50 μM inhiboval reakci z 92,9 %. Proto se v pokusech pro určení jednotlivých kinetických parametrů pokračovalo pouze s tímto enzymem. Průměrná hodnota IC50 byla experimentálně stanovena na 0,51 ± 0,03 μM a hodnota inhibiční...
|
|
|
Příprava STAT3-knockoutované buněčné linie glioblastoma multiforme pomocí metody CRISPR-Cas9
Papinčáková, Dominika ; Skálová, Lenka (vedoucí práce) ; Laštovičková, Lenka (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králová Katedra biochemických vied Kandidát: Bc. Dominika Papinčáková Školiteľ: prof. RNDr. Lenka Skálová, Ph.D. Názov diplomovej práce: Príprava STAT3-knockoutovanej bunkovej línie glioblastomu multiforme pomocou metódy CRISPR-Cas9 Glioblastoma multiforme (GBM) je jedným z najčastejších primárnych nádorov mozgu u dospelých a jedným z najfatálnejších nádorových ochorení u ľudí. Kľúčovým onkogénom vo vývoji a progresii GBM je signálny transduktor a aktivátor transkripcie 3 (STAT3), ktorý je jedným z mediátorov tumorgenézy. V GBM je permanentne aktivovaný, čo vedie k zvýšenej bunkovej proliferácii, invazivite a angiogenéze. Cieľom tejto práce bolo vytvoriť bunkovú líniu GBM STAT3-knockout (STAT3-KO). Na tento účel sa použila bunková línia U87MG a metóda na knockoutovanie génov CRISPR- Cas9. V prvom kroku sme skúmali možnosť tlmenia expresie STAT3 pomocou siRNA a vhodnosť tohto typu buniek na presné dourčenie mechanizmu na editáciu génov CRISPR do bunky. V druhom kroku sme transfekovali bunky pomocou súpravy na knockoutovanie génu STAT3 (CRISPR) a testovali úspešnosť knockoutu. Vo vytvorenej STAT3-KO GBM bunkovej línii sme potvrdili STAT3-KO na úrovni DNA, RNAa proteínu. Následne sme na bunkovú líniu U87MG a U87MG-STAT3-KO pôsobili temozolomidom...
|
|
|
Příprava STAT3-knockoutované buněčné linie glioblastoma multiforme pomocí metody CRISPR-Cas9
Papinčáková, Dominika ; Skálová, Lenka (vedoucí práce) ; Laštovičková, Lenka (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králová Katedra biochemických vied Kandidát: Bc. Dominika Papinčáková Školiteľ: prof. RNDr. Lenka Skálová, Ph.D. Názov diplomovej práce: Príprava STAT3-knockoutovanej bunkovej línie glioblastomu multiforme pomocou metódy CRISPR-Cas9 Glioblastoma multiforme (GBM) je jedným z najčastejších primárnych nádorov mozgu u dospelých a jedným z najfatálnejších nádorových ochorení u ľudí. Kľúčovým onkogénom vo vývoji a progresii GBM je signálny transduktor a aktivátor transkripcie 3 (STAT3), ktorý je jedným z mediátorov tumorgenézy. V GBM je permanentne aktivovaný, čo vedie k zvýšenej bunkovej proliferácii, invazivite a angiogenéze. Cieľom tejto práce bolo vytvoriť bunkovú líniu GBM STAT3-knockout (STAT3-KO). Na tento účel sa použila bunková línia U87MG a metóda na knockoutovanie génov CRISPR- Cas9. V prvom kroku sme skúmali možnosť tlmenia expresie STAT3 pomocou siRNA a vhodnosť tohto typu buniek na presné dourčenie mechanizmu na editáciu génov CRISPR do bunky. V druhom kroku sme transfekovali bunky pomocou súpravy na knockoutovanie génu STAT3 (CRISPR) a testovali úspešnosť knockoutu. Vo vytvorenej STAT3-KO GBM bunkovej línii sme potvrdili STAT3-KO na úrovni DNA, RNAa proteínu. Následne sme na bunkovú líniu U87MG a U87MG-STAT3-KO pôsobili temozolomidom...
|
|
|
Stanovení parametrů ovariální funkce
Jará, Barbora ; Skálová, Lenka (vedoucí práce) ; Laštovičková, Lenka (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Název práce: Stanovení parametrů ovariální funkce Vedoucí práce: prof. RNDr. Lenka Skálová, Ph.D. Školitelka: RNDr. Michala Vosátková, MBA Vypracovala: Barbora Jará Hladiny hormonů řídících funkce ovarií jsou důležitými ukazateli vývoje i zdravotního stavu ženského organismu. Pro správné diagnostické postupy je důležité laboratorní vyšetření a správná interpretace výsledků. Z hormonů ovariálních funkcí je nejčastěji testována hladina estradiolu, progesteronu, luteinizačního a folikulostimulačního hormonu. Používají se separační a imunochemické metody. Pro běžnou klinickou praxi jsou imunochemické metody vhodné zejména svou dostupností, relativní přesností, nenáročností a rychlostí zpracování. Jejich nedostatkem je nemožnost standardizace jednotlivých metodických přístupů. Sérii vyšetření a interpretaci výsledků získaných pomocí imunochemických metod lze provádět pouze v rámci jednoho pracoviště. Klíčová slova: estradiol, imunochemické metody, ECLIA, CMIA, RIA
|
|
| |
|
|
Ovlivnění antioxidačního systému vojtěšky seté albendazolem v reálných podmínkách
Lisoňková, Monika ; Szotáková, Barbora (vedoucí práce) ; Laštovičková, Lenka (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Bc. Monika Lisoňková Školitel: prof. Ing. Barbora Szotáková, PhD. Název diplomové práce: Ovlivnění antioxidačního systému vojtěšky seté albednazolem v reálných podmínkách Anthelmintika jsou léčiva využívaná k léčbě nemocí způsobených parazitickými červy. V České republice se používají hlavně ve veterinární medicíně. Benzimidazolové anthelminitkum albendazol se používá u skotu a ovcí, během jeho biotransformace se tvoří metabolity, které se vylučují spolu s parentní látkou trusem a močí. Aplikace trusu z ošetřeného skotu na pole může ovlivnit necílové organismy vyskytující se na poli. Příkladem necílových druhů jsou zemědělské plodiny, včetně vojtěšky seté (Medicago sativa). Rostliny nemají schopnost eliminovat absorbované látky a jejich metabolity, proto se v nich ukládají a mohou ovlivnit antioxidační systém roslin. Cílem této studie bylo sledovat účinek albendazolu na antioxidační systém vojtěšky seté (M. sativa) v reálných podmínkách. Rostliny byly ovlivněny trusem ovcí ošetřených albendazolem. Subcelulární frakce byly připraveny z rostlin sklizených v roce 2019 a 2020. V těchto frakcích byly měřeny aktivity vybraných antioxidačních enzymů. U rostlin z roku 2020 byly také změřeny koncentrace...
|
host ::
RSS.