|
|
Optimalizace analýzy lipopeptidů pomocí kapalinové chromatografie a hmotnostní spektrometrie
Kadeřábková, Marta ; Hubálek, Martin (vedoucí práce) ; Novák, Petr (oponent)
Modifikace proteinů lipidovou strukturou je poměrně běžná post-translační modifikace, která ovlivňuje vlastnosti proteinů a má přímý vliv na vazbu modifikovaných proteinů do buněčných membrán. Některé lipidované proteiny hrají roli v různých patologických procesech. Při proteomické analýze těchto proteinů je zkoumaný vzorek nejprve naštěpen pomocí proteázy. Vzniklý hydrolyzát obsahuje jak nemodifikované peptidy, tak i peptidy nesoucí lipidovou modifikaci. Při následné chromatografické separaci se lipopeptidy od těch nemodifikovaných výrazně liší svým chováním. Z tohoto důvodu je analýza lipopeptidů, potažmo lipoproteinů, z hlediska separace a detekce problematická. Předmětem této diplomové práce byla optimalizace analýzy lipoproteinů pomocí kapalinové chromatografie s hmotnostní detekcí. Postupy byly testovány na lipoproteinech Cya A (bifunkční adenylát-cyklázový toxin baterie Bordetella pertussis) a MMTV (matrixový protein viru myšího tumoru prsních žláz). Nejprve byly testovány různé postupy přípravy vzorků zahrnující proteolytické štěpení. Při enzymatickém štěpení trypsinem na filtru (eFASP) došlo k zachycení lipidové modifikace s vysokou mírou spolehlivosti. V dalším kroku bylo testováno nastavení gradientové eluce pro chromatografickou metodu. Jako vhodný byl zvolen gradient dlouhý 70 minut...
|
|
|
Voltametrické stanovení Sudanu I na stříbrné pevné amalgámové elektrodě
Kadeřábková, Marta ; Fischer, Jan (vedoucí práce) ; Schwarzová, Karolina (oponent)
Předmětem studie této bakalářské práce byl vývoj metody stanovení azobarviva Sudan I (1-fenylazo-2-naftol, CAS# 842-07-9), které se využívá v průmyslu, v potravinách je jeho přítomnost nežádoucí. Byla použita technika diferenční pulzní voltametrie (DPV) na rtuťovým meniskem modifikované stříbrné pevné amalgámové elektrodě (m-AgSAE) v prostředí 50 % methanolu a Brittonova-Robinsonova pufru pH od 2 do 12. Pro stanovení Sudanu I bylo optimální prostředí 50 % methanolu a BR pufru o pH 4,0, ve kterém bylo možné, bez nutnosti regenerace povrchu pracovní elektrody, provádět opakovaná měření. Lineární kalibrační závislosti látky byly získány v rozmezí 1∙10-6 -1∙10-5 mol∙l-1 a 1∙10-5 -1∙10-4 mol∙l-1 . Mez stanovitelnosti byla 6,2∙10-7 mol∙l-1 . Následně byla testována použitelnost metody na vzorcích obsahujících vedle sebe Sudan I a potravinářské barvivo Sunset Yellow (v koncentračním rozmezí 1∙10-6 -1∙10-5 mol∙l-1 ), ale metoda pro tuto dvojici analytů nebyla dostatečně selektivní.
|
host ::
RSS.