|
|
Molekulární patologie akutní intermitentní porfyrie
Hrdinka, Matouš
Molekulární patologie akutní intermitentní porfyrie Autor: Matouš Hrdinka Akutní intermitentní porfyrie (AIP) je autozomálně dominantní dědičné onemocnění způsobené částečným chyběním porfobilinogen deaminázy (PBGD), třetího enzymu v biosyntetické dráze hemu. AIP se projevuje život ohrožujícími akutními neurologickými atakami, které mohou být vyvolány řadou vnějších faktorů, jako jsou léky nebo alkohol. Cílem této studie bylo popsat molekulární podstatu AIP u českých a slovenských pacientů. Mutace v genu pro PBGD byly identifikovány pomocí metody PCR, denaturační gradientové elektroforézy (DGGE), sekvenace a restrikční analýzy (RFLP). Celkem byla vyšetřena DNA 35 pacientů a asymptomatických osob z 8 rodin. Bylo identifikováno 7 různých mutací, z nichž byly 3 nové doposud nepopsané. Zvláštním případem byl pacient se dvěma mutacemi, R173Q a Q204K, lokalizovanými v jedné alele 10. exonu genu pro PBGD. Abychom dále charakterizovali nalezené mutace, gen pro lidskou PBGD byl vložen do pGEX-4T-1 vektoru pro bakteriální expresi a mutace byly připraveny místně specifickou mutagenezí. Nemutovaná a mutované formy PBGD zfůzované s GST proteinem byly poté exprimovány v E. coli a purifikovány afinitní chromatografií. Byly stanoveny podmínky pro měření enzymatické aktivity PBGD a byla určena specifická aktivita,...
|
|
| |
|
|
The role of membrane microdomains and transmembrane adaptor proteins PRR7 and SCIMP in the regulation of immunoreceptor signaling
Hrdinka, Matouš ; Drbal, Karel (vedoucí práce) ; Černý, Jan (oponent) ; Kalina, Tomáš (oponent)
Souhrn dizertační práce Úloha membránových mikrodomén a transmembránových adaptorových proteinů PRR7 a SCIMP v regulaci imunoreceptorové signalizace Matouš Hrdinka Jak ovlivňují imunoreceptorovou signalizaci membránové mikrodomény a transmembránové adaptorové proteiny (TRAP)? Tyto otázky patří mezi důležité problémy současné molekulární imunologie a navzdory mnoha letům intenzivního výzkumu stále nejsou plně zodpovězeny. Buněčná membrána je velmi dynamická různorodá dvouvrstva přirozeně uspořádána do mikrodomén rozmanité velikosti, složení a délky života. Jedním z příkladů takových mikrodomén jsou lipidové rafty, které se účastní řady biologických procesů včetně imunoreceptorové signalizace. Jelikož obsahují mnoho proteinů signálních drah, jsou dokonce považovány za jakésy základny pro vznik a šíření buněčných signálů. Proteiny TRAP jsou důležité pro správné uspořádání a usměrňování imunoreceptorové signalizace. Například LAT je nepostradatelný pro signalizaci přes T buněčný receptor (TCR) a vývoj T lymfocytů, PAG pro regulaci proteinů z rodiny tyrosinových kináz Src (SFK) a NTAL je víceúčelový negativní i pozitivní regulátor. Ačkoliv se o tom neustále vedou diskuse, přítomnost TRAP v membránových mikrodoménách je zřejmě nezbytná pro jejich správné fungování. Je možné, že důležitou úlohu v přenosu signálů...
|
|
|
Molekulární patologie akutní intermitentní porfyrie
Hrdinka, Matouš
Molekulární patologie akutní intermitentní porfyrie Autor: Matouš Hrdinka Akutní intermitentní porfyrie (AIP) je autozomálně dominantní dědičné onemocnění způsobené částečným chyběním porfobilinogen deaminázy (PBGD), třetího enzymu v biosyntetické dráze hemu. AIP se projevuje život ohrožujícími akutními neurologickými atakami, které mohou být vyvolány řadou vnějších faktorů, jako jsou léky nebo alkohol. Cílem této studie bylo popsat molekulární podstatu AIP u českých a slovenských pacientů. Mutace v genu pro PBGD byly identifikovány pomocí metody PCR, denaturační gradientové elektroforézy (DGGE), sekvenace a restrikční analýzy (RFLP). Celkem byla vyšetřena DNA 35 pacientů a asymptomatických osob z 8 rodin. Bylo identifikováno 7 různých mutací, z nichž byly 3 nové doposud nepopsané. Zvláštním případem byl pacient se dvěma mutacemi, R173Q a Q204K, lokalizovanými v jedné alele 10. exonu genu pro PBGD. Abychom dále charakterizovali nalezené mutace, gen pro lidskou PBGD byl vložen do pGEX-4T-1 vektoru pro bakteriální expresi a mutace byly připraveny místně specifickou mutagenezí. Nemutovaná a mutované formy PBGD zfůzované s GST proteinem byly poté exprimovány v E. coli a purifikovány afinitní chromatografií. Byly stanoveny podmínky pro měření enzymatické aktivity PBGD a byla určena specifická aktivita,...
|
host ::
RSS.