|
| |
|
|
Aplikace SPE a technologie monolitních kolon v HPLC analýze biologicky aktivních látek
Horčičková, Šárka ; Solich, Petr (vedoucí práce) ; Šatínský, Dalibor (oponent)
Extrakce na pevnou fázi (SPE) představuje účinnou, spolehlivou a selektivní moderní metodu pro úpravu vzorku biologického materiálu před chromatografickou analýzou. V diplomové práci byla vyvinuta nová metoda SPE pro izolaci vitaminu D2 (ergokalciferol), D3 (cholekalciferol) a metabolitu 25-(OH)D3 (kalcidiol) z lidského séra současně s vitaminy A (retinol) a E ( - tokoferol). Jednotlivé vitaminy byly následně stanoveny již vyvinutou a validovanou metodou vysokoúčinné kapalinové chromatografie (HPLC). Vyvinutý postup SPE: Do skleněné zkumavky napipetujeme 250 l séra a přidáme 1000 l ethanolu o teplotě 4řC. Vzorek protřepeme a necháme 10 minut deproteinovat v chladničce při teplotě 4řC, poté zcentrifugujeme (4 000 x g, 15 minut, 4řC). Opatrně odebereme supernatant a naneseme na předem připravenou SPE kolonku (promytí 1 ml methanolu následně 1 ml destilované vody). Během těchto dvou kroků nesmí dojít k vyschnutí sorbentu kolonky. Vitamíny eluujeme 1,5 ml methanolu a následně 2 ml hexanu. Eluát odpaříme v koncentrátoru při teplotě 45řC. Odparek rozpustíme v 250 l methanolu a analyzujeme již vyvinutou HPLC metodou. Optimalizovaná HPLC metoda: Mobilní fáze - A: methanol:voda:2-propanol (75:15:10) 3,0 ml/min, 0.-3. minuta, B: methanol:voda (95:5) 3,5 ml/min, 3.- 6,5. minuta; kolona - monolitní kolona...
|
|
| |
|
|
Aplikace SPE a technologie monolitních kolon v HPLC analýze biologicky aktivních látek
Horčičková, Šárka ; Šatínský, Dalibor (oponent) ; Solich, Petr (vedoucí práce)
Extrakce na pevnou fázi (SPE) představuje účinnou, spolehlivou a selektivní moderní metodu pro úpravu vzorku biologického materiálu před chromatografickou analýzou. V diplomové práci byla vyvinuta nová metoda SPE pro izolaci vitaminu D2 (ergokalciferol), D3 (cholekalciferol) a metabolitu 25-(OH)D3 (kalcidiol) z lidského séra současně s vitaminy A (retinol) a E ( - tokoferol). Jednotlivé vitaminy byly následně stanoveny již vyvinutou a validovanou metodou vysokoúčinné kapalinové chromatografie (HPLC). Vyvinutý postup SPE: Do skleněné zkumavky napipetujeme 250 l séra a přidáme 1000 l ethanolu o teplotě 4řC. Vzorek protřepeme a necháme 10 minut deproteinovat v chladničce při teplotě 4řC, poté zcentrifugujeme (4 000 x g, 15 minut, 4řC). Opatrně odebereme supernatant a naneseme na předem připravenou SPE kolonku (promytí 1 ml methanolu následně 1 ml destilované vody). Během těchto dvou kroků nesmí dojít k vyschnutí sorbentu kolonky. Vitamíny eluujeme 1,5 ml methanolu a následně 2 ml hexanu. Eluát odpaříme v koncentrátoru při teplotě 45řC. Odparek rozpustíme v 250 l methanolu a analyzujeme již vyvinutou HPLC metodou. Optimalizovaná HPLC metoda: Mobilní fáze - A: methanol:voda:2-propanol (75:15:10) 3,0 ml/min, 0.-3. minuta, B: methanol:voda (95:5) 3,5 ml/min, 3.- 6,5. minuta; kolona - monolitní kolona...
|
host ::
RSS.