|
|
Vývoj metody pro stanovení 8-hydroxy-2-deoxy guanosinu v moči pro klinický výzkum
Šestáková, Veronika ; Kujovská Krčmová, Lenka (vedoucí práce) ; Matysová, Ludmila (oponent)
Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Veronika Šestáková Školitel: doc. RNDr. Lenka Kujovská Krčmová, Ph.D. Název diplomové práce: Vývoj metody pro stanovení 8-hydroxy-2-deoxy guanosinu v moči pro klinický výzkum Tato diplomová práce se zabývá vývojem metody pro stanovení 8-hydroxy-2-deoxy guanosinu, 8-hydroxyguanosinu a kreatininu pomocí ultra-vysokoúčinné kapalinové chromatografie. Cílem bylo vytvořit optimální chromatografické podmínky pro klinický výzkum. Experimenty byly prováděny na přístroji UHPLC Nexera, (Shimadzu, Japonsko) s hmotnostním spektrometrem LCMS-8030 (Shimadzu, Japonsko). Byly testovány 2 stacionární fáze. K separaci byla použita kolona Meteoric core C18 BIO o rozměrech 4,6 × 50 mm (YMC, Německo) s povrchově porézními částicemi o velikosti 2,7 μm opatřena předkolonou KrudKatcher Ultra 0,5 μm in-line filtr (Phenomenex, Německo). Mobilní fáze byla připravena z vody (pH 3 upravené pomocí kyseliny octové) a methanolu (s přídavkem kyseliny mravenčí - 0,2 mM) v poměru 90 : 10. Teplota byla nastavena na 25 řC, průtok na 0,5 ml/min a nástřik zvolen 4 µl. Po optimalizaci separačních podmínek byla metoda aplikována na biologickou matrici (moč). Vzorky byly upraveny extrakcí na tuhou fázi. Metoda byla validována. Nová metoda bude...
|
|
|
Vývoj a validace UHPLC metody pro stanovení koncentrace omeprazolu v orálních suspenzích
Reiská, Veronika ; Matysová, Ludmila (vedoucí práce) ; Kujovská Krčmová, Lenka (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Veronika Reiská Školitel: doc. PharmDr. Ludmila Matysová, Ph.D. Název diplomové práce: Vývoj a validace UHPLC metody pro stanovení koncentrace omeprazolu v orálních suspenzích Byly nalezeny vhodné podmínky pro stanovení omeprazolu a jeho rozkladného produktu v orálních suspenzích. Analýza byla provedena na koloně Kinetex TM 1,7 µm, C18 100 A, 50 x 2,1 mm, (Phenomenex, USA). Jako mobilní fáze byl použit 0,025 mol/l fosforečnanový pufr a acetonitril v poměru 74:26. Jako vhodné pH vodné fáze byla zvolena hodnota 7,6. Byla využita metoda vnitřního standardu, kterým byl methylparaben. Cílové analyty byly detekovány při vlnové délce 300 nm. Po stanovení optimálních podmínek bylo proměřeno 6 vzorků orálních suspenzí omeprazolu. K rozpouštění vzorků byla využita mobilní fáze. Metoda byla validována. Klíčová slova: omeprazol, UHPLC, orální suspenze
|
|
|
Validace bioanalytických metod - legislativa v rámci EU a USA (rešeršní práce)
Hrochová, Zuzana ; Matysová, Ludmila (vedoucí práce) ; Kujovská Krčmová, Lenka (oponent)
Tato bakalářská práce byla zaměřena na porovnání legislativních požadavků a následně na porovnání konkrétních nároků na validaci bioanalytických metod vyplývajících z požadavku Food and drug administarion (FDA) v USA a European medicines agency (EMA) v Evropské unii. Bylo zjištěno, že obě agentury vycházejí z jiného právního základu. FDA je vlání agenturou, která je součástí federálního systému. Vydává vlastní zákony a jednotlivá nařízení, která mají právní závaznost. Oproti tomu EMA je nevládní agentura a slouží pouze jako poradní orgán Evropské unie. Obě tyto agentury vydaly své návody tzv. guids. FDA vydala Guidance for industry - bioanalytical method validation a EMA vydala Guideline on bioanalytical method validation. Oba návody mají pouze charakter doporučení a nemají právní závaznost. Oba návody obsahují podobné informace. Obě agentury se liší v uspořádání kapitol a důrazu na jednotlivé problémy, ale základní parametry, které diskutují a které mají oba návody společné, jsou selektivita, carry over, LLOQ a nastavení kalibrační křivky, správnost a přesnost metody, stabilita systému a cross validace. Zásadní rozdíly mezi oběma návody nejsou, liší se pouze v kriteriích, které uznávají pro jednotlivé parametry, jediný větší rozdíl panuje ve vymezení pojmu cross validace a v jeho chápaní...
|
|
|
Optimalizace HPLC metody pro stanovení propranololu v tekutých léčivých přípravcích
Koval, Tomáš ; Matysová, Ludmila (vedoucí práce) ; Kujovská Krčmová, Lenka (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Tomáš Koval Školitel: doc. PharmDr. Ludmila Matysová, Ph.D. Název diplomové práce: Optimalizace HPLC metody pro stanovení propranololu v tekutých léčivých přípravcích. Obsahem diplomové práce je optimalizace a následná validace HPLC metody pro stanovení propranolol-hydrochloridu v tekutých léčivých přípravcích. Léčivé přípravky s obsahem propranolol-hydrochloridu se používají při terapii infantilních hemangiomů jako magistraliter připravený roztok. Při optimalizaci této metody byly zkoušeny dvě stacionární a různé mobilní fáze. Pro vlastní měření byla vybrána kolona Kinetex® C18 (150x4,6 mm, velikost částic 5 μm) a izokratické eluce s mobilní fází fosfátového pufru (c=17,7mM) a acetonitrilu v poměru 30:70, přičemž pH této směsi bylo upraveno na 2,2. Průtok kolonou byl ponechán na hodnotě 1,2 ml/min. Validací bylo dokázáno, že je metoda vhodná a poskytuje přesné a správné výsledky. Klíčová slova: propranolol, HPLC, optimalizace, tekuté léčivé přípravky, benzoan sodný
|
|
|
Stanovení neopterinu v biologickém materiálu - rešeržní práce
Arnoštová, Veronika ; Kujovská Krčmová, Lenka (vedoucí práce) ; Matysová, Ludmila (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Veronika Arnoštová Školitel: RNDr. Lenka Kujovská Krčmová, Ph.D. Název diplomové práce: Stanovení neopterinu v biologickém materiálu - rešeršní práce Hlavní náplní této diplomové práce je vytvoření přehledu současných metod používaných ke stanovení neopterinu v biologickém materiálu. Neopterin je derivát pteridinu, konkrétně patří do skupiny nekonjugovaných pteridinů. Jeho biosyntéza vychází z guanosintrifosfátu a je stimulována působením IF-γ. Neopterin představuje užitečný marker aktivace imunitního systému, je také významným prognostickým ukazatelem např. při maligních onemocněních, u HIV pozitivních pacientů či u pacientů po transplantacích. Zvýšené hladiny neopterinu se vyskytují u řady patologických stavů, jako např. u akutních i chronických virových onemocnění, u nádorových onemocnění, u pacientů s HIV, u pacientů po transplantaci při rejekci, ale i u některých neurologických, kardiovaskulárních a autoimunitních chorob. Podstatnou součástí stanovení neopterinu v biologickém materiálu je úprava vzorku před vlastním stanovením, na kterém velkou měrou závisí samotný výsledek. Proto je tomuto tématu v předkládané práci také věnována pozornost. Hlavními metodami stanovení jsou metody...
|
|
|
Vývoj HPLC metody pro stanovení vitaminu B1 v klinickém výzkumu
Chadtová, Anežka ; Kujovská Krčmová, Lenka (vedoucí práce) ; Matysová, Ludmila (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Anežka Chadtová Školitel: RNDr. Lenka Kujovská Krčmová Ph.D. Název diplomové práce: Vývoj HPLC metody pro stanovení vitaminu B1 v klinickém výzkumu Předkládaná diplomová práce popisuje vývoj a částečnou validaci nové HPLC metody pro stanovení vitaminu B1 (thiamin hydrochloridu) a jeho fosforylovaných derivátů (thiamin monofosfátu, thiamin pyrofosfátu). Tato metoda je založena na využití kapalinové chromatografie s nepřímou fluorescenční detekcí. Separace bylo dosaženo využitím moderní monolitní stacionární fáze druhé generace Chromolith® High Resolution RP-18e 100 x 4,6 mm (Merck, Německo) v kombinaci s gradientovou elucí mobilní fáze, kterou tvoří směs 95% fosfátového pufru 10 mmol/l o pH 6,5 a 5% acetonitrilu (ACN), průtoková rychlost mobilní fáze byla 2,5 ml/min, od 2,1. min 4 ml/min. Pro fluorescenční detekci thiamin hydrochloridu (TH), thiamin monofosfátu (TMP) a thiamin pyrofosfátu (TPP, thiamin difosfátu) byla nutná jejich chemická oxidace hexakynoželezitanem draselným na thiochrom a jeho adekvátní estery, které mají fotoluminiscenční aktivitu. Chromatografická metoda byla částečně validována, byl stanoven faktor symetrie, účinnost kolony, rozlišení chromatografických píků, limit detekce a...
|
|
|
Vývoj extrakčního postupu pro stanovení tokoferolů v lidském séru
Klabačková, Sáva ; Kujovská Krčmová, Lenka (vedoucí práce) ; Sklenářová, Hana (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Bc. Sáva Klabačková Školitel: RNDr. Lenka Kujovská Krčmová, Ph.D. Název diplomové práce: Vývoj extrakčního postupu pro stanovení tokoferolů v lidském séru V předkládané práci byl vypracován miniaturizovaný postup extrakce do kapaliny pro stanovení alfa, beta, gama a delta tokoferolu z lidského séra. Byly optimalizovány jednotlivé kroky extrakce: deproteinace, centrifugace, odpařování a závěrečná filtrace. Pro stanovení tokoferolů byla také testována extrakce do kapaliny podpořená tuhou fází (SLE), která se jeví jako velmi slibná pro využití v bioanalýze. V průběhu vývoje nového extrakčního postupu byl kladen důraz na jednoduchost, rychlost a malou spotřebu vzorků i rozpouštědel. Byla provedena také částečná validace metodiky. Nový extrakční postup je součástí již zavedené UHPLC metody pro stanovení jednotlivých forem tokoferolů a bude sloužit ke stanovení antioxidační kapacity onkologických pacientů během chemoterapeutické léčby. Klíčová slova: tokoferoly, LLE, SLE, biologický materiál
|
|
|
Vývoj HPLC metody pro stanovení amilorid-hydrochloridu v léčivém přípravku
Sohrová, Barbora ; Matysová, Ludmila (vedoucí práce) ; Kujovská Krčmová, Lenka (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Barbora Sohrová Konzultant: PharmDr. Ludmila Matysová, Ph.D. Název diplomové práce: Vývoj HPLC metody pro stanovení amilorid-hydrochloridu v léčivém přípravku Obsahem diplomové práce je vývoj metody pro HPLC stanovení amilorid- hydrochloridu v léčivém přípravku. Léčivý přípravek obsahující amilorid-hydrochlorid se používá při terapii cystické fibrózy jako magistraliter připravený roztok pro inhalaci. Při vývoji byly vyzkoušeny různé stacionární a mobilní fáze a pro vlastní měření byla vybrána kolona HS F5 (150x2,1 mm, 3 µm) a jako mobilní fáze směs acetonitrilu a kyseliny fosforečné 0,085%, které bylo pH upraveno triethylaminem na hodnotu 3,0, v poměru 75:25. Roztok standardů obsahoval amilorid-hydrochlorid, Nečistotu A jako rozkladný produkt a vnitřní standard butylparaben. Vyvinutá metoda byla kompletně validována. Z validace metody bylo zjištěno, že vyvinutá metoda je pro analýzu uvedeného přípravku vhodná a poskytuje přesné a správné výsledky. Jedním ze zjištění validace byla skutečnost, že léčivý přípravek obsahující amilorid-hydrochlorid není dostatečně stabilní. Proto je nutná vždy příprava těsně před použitím.
|
|
|
Vývoj HPLC metody pro stanovení homatropinu a skopolaminu v očních kapkách
Sohrová, Barbora ; Matysová, Ludmila (vedoucí práce) ; Kujovská Krčmová, Lenka (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Mgr. Barbora Sohrová Konzultant: PharmDr. Ludmila Matysová, Ph.D. Název rigorózní práce: Vývoj HPLC metody pro stanovení homatropinu a skopolaminu v očních kapkách Byla vyvinuta a validována metoda pro stanovení homatropin-hydrobromidu a jeho degradačního produktu- skopolamin-hydrobromidu v očních kapkách o koncentraci 1% (s chloridem sodným), 2% (s chloridem sodným) a 2% (s pufrem F 6,45) účinné látky. V průběhu vývoje metody byly testovány různé mobilní i stacionární fáze. Pro validaci byla použita kolona Ascentis Express F5 (100 x 4,6 mm, 2,7 µm). Mobilní fázi tvořila směs acetonitrilu a fosfátového pufru v poměru 9:91 (V/V). Fosfátový pufr obsahoval 3,12% vodný roztok dihydrogenfosforečnanu sodného dihydrátu a 200 µl triethylaminu. PH pufru bylo upraveno kyselinou fosforečnou 85% na hodnotu 2,5. Na kolonu bylo dávkováno 5 µl analyzovaného roztoku, analýza probíhala při průtokové rychlosti 1,1 ml/min a detekci v UV oblasti při 210 nm. Čas analýzy nepřesáhl 6,5 minuty. Analyzovaný roztok obsahoval roztok standardu homatropin-hydrobromidu o koncentraci 25 mg/100 ml a jeho degradační produkt skopolamin-hydrobromid o koncentraci 0,5 mg/100 ml. Vyvinutá metoda byla kompletně validována a byl...
|
|
|
Vývoj HPLC metody pro sledování stability roztoků kofeinu
Saifrová, Zuzana ; Matysová, Ludmila (vedoucí práce) ; Kujovská Krčmová, Lenka (oponent)
Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Mgr. Zuzana Saifrová Konzultant: PharmDr. Ludmila Matysová, Ph.D. Název rigorózní práce: Vývoj HPLC metody pro sledování stability roztoků kofeinu Tato rigorózní práce je zaměřena na vývoj HPLC metody pro sledování stability roztoku kofeinu a kofein-citrátu a její následnou validaci. Jako nečistota byl zvolen teofylin, u nějž bylo pravděpodobné, že by se mohl objevit jako rozkladný produkt vzorku. Z množství dostupných metod analýzy kofeinu pomocí HPLC (viz kapitola 3.6 Rešerše) byla jako výchozí zvolena metoda prováděná za laboratorní teploty (20 ± 5 řC), s mobilní fází MeOH:H2O 40:60 o průtoku 1 ml/min, monolitickou kolonou C18 o rozměrech 100 × 4,6 mm a nástřikem 5 µl. V průběhu vývoje metody došlo jak k úpravě několika podmínek analýzy a složení mobilní fáze, tak ke změně rozměrů chromatografické kolony a charakteru fáze stacionární. Hlavními sledovanými parametry při vývoji metody byla rychlost analýzy a schopnost poskytovat symetrické píky rozlišené na základní linii a rovněž od mrtvého objemu kolony. Výsledná metoda je založena na izokratické eluci s použitím mobilní fáze ACN:pufr o pH 6 v poměru 10:90 o průtoku 0,5 ml/min a chromatografickou kolonou C18, 50 x 4,6 mm o velikosti částic 3µm....
|
host ::
RSS.