|
|
Stanovení isoenzymů cytochromu P450 pomocí UHPLC-MS/MS v modifikovaných buněčných liniích C3A, CACO2 a v lidských jaterních mikrosomech
Rejšková, Lenka ; Szotáková, Barbora (vedoucí práce) ; Vokřál, Ivan (oponent)
Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Univerzita Východního Finska v Kuopiu, Škola Farmacie Katedra farmaceutické chemie Kandidát: Lenka Rejšková Školitel: doc. Ing. Barbora Szotáková, Ph.D. Konzultant: Prof. Seppo Auriola Název diplomové práce: Stanovení isoenzymů cytochromu P450 pomocí UHPLC-MS/MS v modifikovaných buněčných liniích C3A, CACO2 a v lidských jaterních mikrosomech Isoenzymy cytochromu P450 (CYP) hrají podstatnou roli v metabolismu léčiv. Mohou být zodpovědné za selhání terapie, vedlejší nebo toxické účinky a za interakce léčiv. Modifikované C3A a CACO2 buněčné linie s exprimovaným konstitutivním androstanovým receptorem (CAR) a pregnanovým X receptorem (PXR) by mohly být použity pro in vitro biotransformační a absorpční studie místo klasických primárních buněčných linií. Isoenzymy CYP by v těchto liniích měly být neustále exprimovány. Tato studie je zaměřena na vytvoření kvantitativní metody pro stanovení nejběžnějších isoenzymů CYP u člověka: CYP1A2, CYP2B6, CYP2C9, CYP2C19, CYP2E1, CYP3A5 a CYP3A4 v uvedených buněčných liniích a v lidských jaterních mikrosomech. Absolutní kvantitativní stanovení isoenzymů CYP bylo provedeno na UHPLC přístroji spojeném s tandemovým hmotnostním detektorem pracujícím v dynamickém MRM módu....
|
|
|
Využití hmotnostní spektrometrie pro identifikaci metabolitů anthelmintik u parazitujících červů
Komrska, Jan ; Skálová, Lenka (vedoucí práce) ; Vokřál, Ivan (oponent)
Jestliže chceme být úspěšní v léčbě parazitárních onemocnění, je důležité získat co nejvíce informací o osudu podaného léčiva. Zjištění metabolických drah anthelmintik a zúčastněných enzymů parazitů nám může pomoci v boji se vznikající rezistencí na dané látky. Cílem naší práce bylo najít a identifikovat metabolity I. a II. fáze anthelmintik albendazolu (ABZ), flubendazolu (FLU) a mebendazolu (MEB) vzniklé při ex vivo inkubacích s parazitem motolicí kopinatou (Dicrocoelium dendriticum), za použití LC-MS techniky. V ex vivo studii byli dospělci motolice kopinaté inkubováni v živném médiu společně s benzimidazolovým anthelmintikem po dobu 24 hodin. Po skončení inkubace byly homogenáty parazitů a vzorky media extrahovány na pevné fázi. Extrakty byly následně analyzovány vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií s hmotnostně-spektrometrickou detekcí (LC-MS). Jako metabolity první fáze jsme detekovali albendazolsulfoxid, redukovaný flubendazol a redukovaný mebendazol. Jako metabolity druhé fáze jsme zaznamenali methylderiváty flubendazolu, redukovaného flubendazolu a redukovaného mebendazolu.
|
|
|
The influence of spinal anesthesia on the degree of DNA damage
Koščáková, Mária ; Kuchařová, Monika (vedoucí práce) ; Vokřál, Ivan (oponent)
Cieľ práce: Ľudský organizmus sa denne podrobuje pôsobeniu mnohých endogénnych a exogénnych látok, ktoré sú zdrojom oxidatívneho poškodenia. Pri vysokých koncentráciách a hromadení oxidačného stresu v bunkách dochádza k poškodeniu ich štruktúr vrátane DNA (deoxyribonukleová kyselina) v jadre. Prevaha tohto poškodzujúceho procesu môže byť neskôr zodpovedná za vznik ľudských chorôb ako je rakovina, neurodegeneratívne ochorenia či srdcové zlyhanie. V našej štúdií sme pozorovali oxidatívne poškodenie na úrovni DNA vznikajúce vplyvom spinálnej anestézie. Metódy: Spracovávanie vzoriek prebiehalo metódou kométovej analýzy. Princíp spočíva vo fixovaní buniek (lymfocytov) v agarózovom gély, lýze štruktúr bunky pre uvoľnenie nukleotidov, inkubácií so špecifickými enzýmami a vystavení pôsobeniu elektrického poľa v procese elektroforézy. Poškodené, negatívne nabité časti DNA v elektrickom poli putujú smerom ku kladne nabitej anóde čím vytvárajú typický kométový tvar. Pre vizualizáciu boli gély zafarbené etídiom bromidom (DNA interkalačné farbivo). Výsledky: Kvantifikovali sme jednoreťazcové zlomy, oxidované puríny a pyrimidíny (použitie enzýmov pre detekciu špecifických lézií). Výsledky sú udávané v percentách DNA vo chvoste kométy. Princípom je porovnanie intenzity chvosta kométy s celkovou intenzitou kométy....
|
|
|
Efekt konzumace jednoduchých cukrů na kognitivní funkce potkaních samic
Podhorská, Gabriela ; Macháček, Miloslav (vedoucí práce) ; Vokřál, Ivan (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Gabriela Podhorská Školitel: Mgr. Miloslav Macháček, Ph.D. Název diplomové práce: Efekt konzumace jednoduchých cukrů na kognitivní funkce potkaních samic. Konzumace jednoduchých cukrů, především fruktosy, se za několik uplynulých desetiletí zvýšila. Nadměrný příjem cukrů byl spojen s rozvojem inzulinové rezistence, hypertriglyceridémií a oxidačním stresem, což vede k narušení kognitivních funkcí. Nicméně, stále zůstává nejasné, zda jsou tyto změny v kognitivních funkcích způsobeny vysokým kalorickým příjmem, či zda jsou zapříčiněné příjmem specifického monosacharidu. Mimoto, mechanismus na molekulární úrovni není zatím kompletně rozluštěn. Naše výzkumná skupina podávala potkaním samicím Sprague-Dawley v dlouhodobé studii po dobu 7 měsíců 10% w/v roztok glukosy ve vodě a 10% roztok fruktosy, což simulovalo chronický příjem cukrů u lidí. Plazmatické parametry a exprese proteinů, které jsou zahrnuty v metabolických drahách, byly zkoumány v prefrontální kúře. Kognitivní funkce byly hodnoceny pomocí testu rozpoznávání nového objektu (NOR) a Morris Water Maze (MWM) testu. Výsledky získané v naší studii ukázaly významný nárůst v hladině triacylglycerolů nalačno i postprandiálně (1,9x a 1,4x, p<0,05) pouze ve...
|
|
|
Studium interakcí léčiv s transportéry z rodiny OATP za využití střevních tkáňových řezů
Čečková, Patrícia ; Vokřál, Ivan (vedoucí práce) ; Červený, Lukáš (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmakologie a toxikologie Studentka: Patrícia Čečková Školitel: PharmDr. Ivan Vokřál, Ph.D. Název diplomové práce: Studium interakcí léčiv s transportéry z rodiny OATP za využití střevních tkáňových řezů Kľúčovú úlohu v pôsobení perorálne podávaných liečiv predstavuje ich absorpcia črevnou bariérou. Exprimuje celú radu transportérov, mimo iné OATP2B1 a OATP1A2 influxné transportéry, patriace do rodiny SLC. Sú lokalizované na apikálnej membráne enterocytov a umožňujú prúdenie endogénnych a exogénnych látok z lúmen čriev do enterocytu. Ovplyvňujú nielen farmakokinetiku liečiv, ale aj ich bezpečnosť a účinnosť. Predstavujú miesta pôsobenia interakcií liečiv s inými liečivami/zložkami potravy, ktoré môžu viesť ku zmene účinnosti liečiv alebo toxicite. Keďže FDA (Úrad pro kontrolu potravín a liečiv) a EMA (Európska lieková agentúra) nemajú intestinálne OATP transportéry zahrnuté vo svojich smerniciach preklinických štúdií, nie je vypracovaný jednotný model skúmania interakcií. Limitácie bunkových modelov a geneticky modifikovaných organizmov vedú k rozvoju nových metód, akým je napríklad ex vivo metóda ultratenkých intestinálnych rezov (PCIS), ktorá predstavuje tkanivový model reflektujúci skutočnú 3D štruktúru črevnej bariéry. Cieľom...
|
|
|
Virové hepatitidy a jejich farmakoterapie
Klímková, Martina ; Mladěnka, Přemysl (vedoucí práce) ; Vokřál, Ivan (oponent)
14. Abstrakt Virové hepatitidy patří v dnešní době mezi nejčastější infekční onemocnění ve světě. Největší výskyt tohoto onemocnění připadá na státy jižní Ameriky, jižní Asie a Afriky. Přenáší se buď parenterálně (hepatitidy B, C, D) nebo fekoorální cestou (hepatitidy A, E). Po vstupu viru do organismu se spustí imunitní reakce, začnou se vytvářet protilátky, které většinou slouží k definitivnímu potvrzení diagnózy. Akutní projevy virových hepatitid zahrnují gastrointestinální dyskomfort, žloutenku, při komplikovaném nebo neléčeném průběhu onemocnění až selhání jater a úmrtí. Hepatitidy A a E nepřecházejí do chronicity a při uzdravení pacient nemá následky. Naopak chronické formy (hepatitidy B, C, D) způsobují dlouhodobé komplikace. Hepatitidy A a E nepotřebují žádnou protiinfekční terapii, stačí zajistit pouze symptomatologickou léčbu. Ostatní typy hepatitid už antivirovou léčbu vyžadují. Základem terapie je používání interferonů a syntetických nukleosidových analog. Interferony vyvolávají odpovídající imunitní odpověď a způsobují destrukci infikovaných hepatocytů. Syntetická analoga inhibují syntézu virové nukleové kyseliny. Pro léčbu hepatitidy B je používán pegylovaný interferon α. Běžně se kombinuje s nukleosidovými analogy (lamivudin, adefovir). Vývoj nových látek pokračuje. Některá syntetická analoga...
|
|
|
In vitro hodnocení cytotoxicitního působení nových potenciálních antituberkulotik ze skupiny aromatických nitrolátek
Turoňová, Dorota ; Macháček, Miloslav (vedoucí práce) ; Vokřál, Ivan (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Bc. Dorota Turoňová Školitel: RNDr. Miloslav Macháček, Ph.D. Konzultant: doc. PharmDr. Jaroslav Roh, Ph.D. Název diplomové práce: In vitro hodnocení cytotoxicitního působení nových potenciálních antituberkulotik ze skupiny aromatických nitrolátek Každoročně se objeví více než 10 milionů nových případů onemocnění tuberkulózou. Nedostatek a nedostupnost léků, špatná diagnostika, ale především nevhodná léčba komplikují eradikaci tuberkulózy. Už tak závažné onemocnění se v posledních letech stává ještě závažnějším, a to hlavně výskytem lékově rezistentní tuberkulózy, především tzv. MDR-TB a XDR-TB. Díky chromozomálním mutacím, které bakterie činí rezistentní k lékům, je potřeba stále vyvíjet účinné nové látky, které by nahradily dosavadní léky, které jsou často toxické a s tím je spojen výskyt nežádoucích účinků. Výzkumná skupina z Katedry organické a bioorganické chemie, Farmaceutické fakulty v Hradci Králové, Univerzity Karlovy zabývající se řadu let výzkumem nových antituberkulotik vytvořila nové struktury aromatických nitrolátek s velmi vysokým antimykobakteriálním účinkem. Cílem této diplomové práce bylo in vitro stanovit cytotoxicitu devíti nových látek z této skupiny. Hodnocení cytotoxicity bylo...
|
|
|
Metabolismus monepantelu u parazitů a jejich hostitelů
Valát, Martin ; Skálová, Lenka (vedoucí práce) ; Vokřál, Ivan (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Martin Valát Školitel: prof. RNDr. Lenka Skálová, Ph.D. Název diplomové práce: Metabolismus monepantelu u parazitů a jejich hostitelů Monepantel (MOP) patří do nové skupiny anthelmintických léčiv - amino- acetonitrilových derivátů. Od běžně používaných širokospektrých léčiv (makrocyklické laktony, benzimidazoly a imidazothiazoly) se liší chemickou strukturou a mechanismem účinku. Z důvodu velmi častého používání léčiv z těchto skupin se u mnoha patogenních parazitů vyvinula rezistence. MOP je účinný i proti parazitům rezistentním na výše zmíněné skupiny. Cílem této studie byla identifikace a porovnání metabolitů první a druhé fáze biotransformace MOP u parazitů (Haemonchus contortus - citlivý kmen ISE a multirezistentní kmen WR) a u jejich hostitelů - ovcí (Ovis aries) prostřednictvím in vivo a ex vivo studie. Pro identifikaci metabolitů byla použita ultra- vysokoúčinná kapalinová chromatografie ve spojení s hmotnostní spektrometrií (UHPLC/MS). U ovce v in vivo studii bylo detekováno 13 metabolitů MOP první a druhé fáze biotransformace, 7 z nich nebylo dosud popsáno. U parazita v ex vivo studii byly stanoveny pouze 4 metabolity první fáze biotransformace. Byly zjištěny tyto biotransformační reakce...
|
|
|
Optimalization of Leishmania antigen formulations for the diagnosis of canine leishmaniasis.
Danková, Barbora ; Němečková, Ivana (vedoucí práce) ; Vokřál, Ivan (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biologických a lékářských věd Studentka: Barbora Danková Školitel: RNDr. Ivana Němečková, Ph.D. Školitel specialista: Prof. Anabela Cordeiro da Silva Název práce: Optimalizace diagnostiky leišmaniózy u psů Leišmanióza je parazitální onemocnění způsobené prvokem z rodu Leishmania, šířící se pomocí přenašeče. Vyskytuje se v 98 zemích po celém světě. Pro laboratorní diagnózu leišmaniózy jsou nezbytné spolehlivé a přesné testy, protože se může vyskytnout široké spektrum klinických znaků, symptomů a vysoká míra asymptomatických infekcí. Sérologické stanovení leišmaniózy u psů, zejména metoda enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), se ukázala být užitečnou. Údaje získané z ELISA testu pro detekci protilátek proti vybraným rekombinantním proteinům A, B, C, D, E a F byly vyhodnoceny z infekčních sér, které byly získány v Portugalsku a Brazílii. Tato práce prezentuje nejlepší formulaci rekombinantních proteinů pro sérologické stanovení diagnózy. Zjistili jsme, že antigen C ukázal vysoký stupeň senzitivity a specificity v rozpoznání pozitivních a asymptomatických sér infikovaných leišmaniózou. Klíčová slova: leišmanióza u psů, rezervoár, diagnóza, ELISA.
|
|
|
Hemonchóza ovce domácí jako modelová parazitóza - výsledky její parazitologické kontroly v experimentální studii
Zdeněk, Pavel ; Lamka, Jiří (vedoucí práce) ; Vokřál, Ivan (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmakologie a toxikologie Student: Pavel Zdeněk Školitel: prof. RNDr. Jiří Lamka, CSc. Název diplomové práce: Hemonchóza ovce domácí jako modelová parazitóza - výsledky její parazitologické kontroly v experimentální studii Velkým problémem chovů hospodářských zvířat po celém světě je v současné době helmintorezistence, která značně narušuje zdravotní stav chovaných zvířat a tím i jejich produkci. Snahou výzkumných pracovišť je poznat mechanismy vzniku rezistence a najít přístupy, jak jí předcházet. Cílem této diplomové práce bylo popsat experimentální infekci modelovým parazitem Haemonchus contrortus, která byla založena na ovcích plemene Texel. H. contortus je jedním z významných endoparazitů, žije ve slezu přežvýkavců a živí se jejich krví. Vzorky trusu všech zvířat vstupujících do experimentálních studií byly vyšetřeny kvalitativní ovoskopickou metodou a zvířata byla pečlivě odčervena albendazolem a monepantelem. Následně byla infikována larvami L3 různých kmenů H. contortus. Byly použity tři kmeny - ISE (citlivý ke všem anthelmintikům), IRE (rezistentní k benzimidazolům) a WR (multirezistentní kmen). Kvantitativní ovoskopickou metodou byly v rektálně získaných vzorcích trusu stanovovány počty vajíček. Doba mezi...
|
host ::
RSS.