|
|
Vliv resveratrolu na tok žluče.
Paclíková, Kristýna ; Doleželová, Eva (vedoucí práce) ; Cermanová, Jolana (oponent)
Kristýna Paclíková Vliv resveratrolu na tok žluče Diplomová práce Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Farmacie Cíl práce: Ochranný účinek resveratrolu je prokázán u řady experimentálních modelů cholestázy, ale jeho účinek na produkci žluče u zdravých jedinců zatím studován nebyl. Vzhledem k tomu, že je resveratrol v populaci často užíván, cílem diplomové práce bylo zjištění jeho účinku na tok žluče u zdravých jedinců a následné objasnění mechanismu tohoto děje. Metody: Potkani kmene Wistar (n = 6, v každé skupině, 280 - 320 g) byli rozděleni do dvou skupin: Kontrolní skupina (Kontrola) a skupina, které byl podáván resveratrol (10mg/kg/den, p.o.) po dobu 28 dní (RES). Pro zjištění produkce žluče byla provedena in vivo kinetická studie. Analýza exprese transportních proteinů byla provedena na úrovni mRNA a proteinu metodou qRT-PCR a Western blot. Výsledky: Resveratrol vedl ke zvýšení kumulativního toku žluče. Analýza exprese transportních proteinů na úrovni mRNA a proteinu ukázala, že k této změně dochází v důsledku posttranskripční indukce kanalikulárních transportérů, Bsep a Mrp2. Současně vedl resveratrol k indukci Mrp4 proteinu, exprimovaného na bazolaterální membráně hepatocytů. Závěr: Z výsledků studie vyplývá, že choleretický účinek orálně podávaného resveratrolu...
|
|
|
Characterization of a synthetic leoligin derivative, with agonistic FXR and enhancing macrophage cholesterol efflux activity
Kovářová, Lenka ; Kovařík, Miroslav (vedoucí práce) ; Doleželová, Eva (oponent)
Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové, Katedra biologických a lékařských věd University of Vienna, Faculty of Life Sciences, Department of Pharmacognosy Kandidát: Lenka Kovářová Školitel: Pharmdr. Miroslav Kovařík, Ph.D. Konzultant: Dr. Angela Ladurner Název diplomové práce: Charakteristika syntetického derivátu leoliginu, agonisty FXR zvyšujícího cholesterolový eflux z makrofágů Ateroskleróza je patologický a multifaktoriální proces způsobující vznik kardiovaskulárních onemocnění, které jsou hlavními příčinami úmrtí v západním světě. Iniciální fáze aterosklerózy je charakterizována akumulací lipidních částic, převážně LDL cholesterolu a pěnových buněk původně získaných z makrofágů, ve velkých arteriích, což vede k postupnému ztluštění cévní stěny. Tyto progresivní změny vyvolávají tvorbu plaku, následovaného rupturou, trombózou a vedoucí až k vzniku kardiovaskulární příhody. Reverzní transport cholesterolu je důležitý preventivní mechanismus, který zajišťuje odstranění nadbytku aterogenních lipoproteinů z makrofágů. Tento eflux je zprostředkován ABC transportéry v makrofázích, hlavně ABCA1 a ABCG1 a zčásti scavenger receptorem (SR-B1). Několik nukleárních receptorů, včetně PPARγ, LXRα a LXRβ, upreguluje tyto transportéry a ovlivňuje tak cholesterolový metabolismus, zejména...
|
|
|
Vliv analog GLP-1 (glucagon-like peptide-1) na hepatocyty potkana v podmínkách in vitro
Krejčíková, Veronika ; Nachtigal, Petr (vedoucí práce) ; Doleželová, Eva (oponent)
Bc. Veronika Krejčíková Vliv analog GLP-1 (glucagon-like peptide-1) na hepatocyty potkana v podmínkách in vitro. Diplomová práce Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Odborný pracovník v laboratorních metodách Cíl práce: Měřením vybraných parametrů jsme sledovali vliv liraglutidu (LIRA; analoga GLP-1) na nesteatotické (ST-1) a steatotické (HF) hepatocyty potkana v podmínkách in vitro. Dále jsme sledovali jeho případný hepatoprotektivní účinek na buňky poškozené acetaminofenem (APAP). Metody: Jako model pro pokusy jsme využili primární kultury nesteatotických a ztukovatělých hepatocytů potkana izolované z jater samců potkanů kmene Wistar. Steatóza u nich byla navozena podáváním vysokotukové diety (71% energie z tuků) po dobu 6 týdnů. Jako kontroly sloužily potkani krmení standardní dietou (10 % energie z tuků). Hepatocyty byly izolovány dvoustupňovou kolagenázovou perfuzí. Na připravených primárních kulturách jsme testovali vliv LIRA o koncentracích 1, 10 a 100 nmol/l na intaktní, nesteatotické a steatotické, hepatocyty a dále na hepatocyty po působení APAP o koncentracích 2,5; 3,75 a 5 mmol/l. Po 24 resp. 20 hod. inkubaci jsme zjišťovali aktivitu laktátdehydrogenázy (LDH) v kultivačním médiu, viabilitu hepatocytů, produkci albuminu, koncentraci malondialdehydu (MDA) a...
|
|
|
Hodnocení exprese iNOS a HO-1 v aortě myší s vysokými hladinami sérového endoglinu pomocí Western blot analýzy.
Tysoňová, Kristýna ; Rathouská, Jana (vedoucí práce) ; Doleželová, Eva (oponent)
Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biologických a lékařských věd Hodnocení exprese iNOS a HO-1 v aortě myší s vysokými hladinami sérového endoglinu pomocí Western blot analýzy Autor diplomové práce: Kristýna Tysoňová Vedoucí práce: PharmDr. Jana Rathouská, Ph.D. Cíl práce: Záměrem této diplomové práce bylo zhodnotit rozdíly exprese iNOS a HO-1 (markery nitračního/oxidačního stresu) v aortě dvou skupin geneticky modifikovaných myší na cholesterolové dietě, které se lišily hladinami lidského sérového endoglinu. Metody: Pro studii se použily 6 měsíců staré transgenní myší samice kmene CBAxC57BL/6J s vysokou hladinou lidského solubilního endoglinu. Pomocí ELISA analýzy byla stanovena hladina tohoto endoglinu a myši byly rozděleny do dvou srovnávaných skupin. Sledovaná skupina (Sol-Eng+ ) vykazovala vysoké hladiny lidského solubilního endoglinu a jejich sourozenecké myši s nízkými (nedetekovatelnými) plazmatickými hladinami lidského endoglinu byly použity jako myši kontrolní. Po dobu 3 měsíců byly obě skupiny krmeny speciální stravou s vysokým obsahem tuku a cholesterolu. Biochemickou analýzou byla zjištěna hladina celkového cholesterolu. Pro detekci a kvantifikaci exprese markerů iNOS a HO-1 byla použita analýza Western blot. Výsledky: Po tříměsíční...
|
|
|
Vliv C-reaktivního proteinu na endotel v aortě spontánně hypertenzních potkanů
Kosán, Aleš ; Němečková, Ivana (vedoucí práce) ; Doleželová, Eva (oponent)
VLIV C-REAKTIVNÍHO PROTEINU NA ENDOTEL V AORTĚ SPONTÁNNĚ HYPERTENZNÍCH POTKANŮ Diplomová práce Autor: Aleš Kosán Studijní obor: Farmacie Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Endotelová dysfunkce a chronický zánět jsou faktory hrající roli v patogenezi metabolického syndromu. Tato práce je koncipována jako pilotní studie, jejímž cílem je navrhnout další směr zkoumání v oblasti vlivu C-reaktivního proteinu na endotel. Pomocí metody Western blot byla sledována exprese čtyř látek, v minulosti spojených se vznikem endotelové dysfunkce: endotelinu-1, hemoxygenázy-1, endoglinu a fosforylované syntázy oxidu dusnatého. Měření bylo provedeno na vzorcích z homogenizovaných potkaních aort transgenních spontánně hypertenzních potkanů exprimujících lidský C reaktivní protein. Jako kontrolní skupina byl využit kmen standardních spontánně hypertenzních potkanů. Detekce byla provedena pomocí chemiluminiscenčního substrátu na RTG filmy a získaná data byla semikvantitativně vyhodnocena denzitometrickou metodou. U endoglinu jsme zaznamenali zvýšenou expresi v hodnotě 186,3 % oproti kontrolní skupině. Exprese fosforylované formy endotelové syntázy představovala 325,6 % v porovnání s kontrolní skupinou. U hemoxygenázy-1 byl nárůst exprese minimální (109,0 %) a exprese endotelinu-1 byla...
|
|
|
Role of Gq-coupled receptors in brown adipocytes
Čajková, Michaela ; Kovařík, Miroslav (vedoucí práce) ; Doleželová, Eva (oponent)
Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové, Katedra biologických a lékařských věd Rheinische Friedrich-Wilhelms-University Bonn, Institute of Pharmacology and Toxicology Kandidát: Michaela Čajková Školiteľ: PharmDr. Miroslav Kovařík, Ph.D. Konzultant: Dr. Linda Sarah Hoffmann Názov diplomové práce: Úloha receptorů spřažených s Gq proteiny v hnědých adipocytech V mojej diplomovej práci, sme sa zamerali na štyri receptory spojené s Gq proteiny (F2R, α1DAR, LPHN1, TSHR) v hnedých adipocytoch (BAs), ktoré boli identifikované v screene, s najvyššou expresiou v nezrelých a zrelých BAs. Cieľom bolo potvrdiť predpoklad, že receptor pre thyroidný stimulujúci hormón (TSHR) hrá kľúčovú rolu v diferenciácií BAs a že F2R, LPHN1 a α1D-AR by mohli byť pre BAs dôležité. V našej štúdii sme zisťovali genetickú expresiu týchto štyroch receptorov v BAs pomocou analytických metód kvantitatívna reverzná-transkripcia polymerázová reťazová reakcia (qRT-PCR) a Western blot. Výsledky z analýz ukázali, že expresia TSHR bola zvýšená v zrelých BAs, znamená to, že TSHR indukuje dozrievanie BAs. BAs infikované s vlásenkovou RNA (sh-RNA) proti TSHR sa diferencovali podstatatne menej, čo sme dokázali aj pomocou Oil Red-O barvenia. Expressia adipocytného Proteinu 2 (aP2), peroxisome proliferator-activated...
|
|
|
Změna exprese transportních proteinů během intrahepatální cholestázy u potkanů
Kolouch, Jan ; Doleželová, Eva (vedoucí práce) ; Cermanová, Jolana (oponent)
Jan Kolouch Změna exprese transportních proteinů během intrahepatální cholestázy u potkanů Diplomová práce Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Farmacie Cíl práce: Cílem diplomové práce bylo ověření cholestatického poškození jater prostřednictvím biochemické analýzy plazmy a analýzy exprese hlavních jaterních transportních proteinů (Ntcp, Oatp1a4, Bsep, Mrp2, Mrp3, Mrp4) pro uptake a eflux látek na úrovni mRNA. Metody: Potkani kmene Wistar (n = 6, v každé skupině; 280 - 320 g), byli rozděleni do dvou skupin: kontrolní skupina (LPS-K) a skupina LPS (lipopolysacharid podaný jednorázově i.p., 4 mg/kg). Vzorky krve a jater byly odebrány 12 hodin po aplikaci LPS. Biochemická analýza plazmy byla provedena pomocí Cobas Integra ® 800 a GC/MS. Změny exprese transportních proteinů na úrovni mRNA byly hodnoceny qRT-PCR. Výsledky: V porovnání s kontrolou byla ve skupině LPS pozorována významně zvýšená plazmatická koncentrace žlučových kyselin a zvýšená aktivita enzymů ALP a GMT. U žlučových kyselin došlo ke zvýšení koncentrace na 818 %, aktivita ALP byla zvýšená na 311 % a aktivita GMT na 2167 %. Intrahepatální cholestáza vedla k významnému poklesu exprese jaterních transportních proteinů na úrovni mRNA - Ntcp na 4,6 %, Oatp1a4 na 2,2 %, Mrp2 na 1,7 % a Bsep na 25 %. Závěr: Z...
|
|
|
Změna exprese transportních proteinů během obstrukční cholestázy u potkanů I
Šindelářová, Jana ; Doleželová, Eva (vedoucí práce) ; Zemánková, Lenka (oponent)
Jana Šindelářová Změna exprese transportních proteinů během obstrukční cholestázy u potkanů I Diplomová práce Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Farmacie Cíl práce: Cílem diplomové práce bylo potvrzení cholestatického poškození jater navozeného podvazem žlučovodu v trvání 28 dnů pomocí biochemické analýzy séra a analýzy exprese jaterních transportérů pro uptake látek Ntcp, Oatp1a1, Oatp1a4, Oatp1b2 a Oat2 na úrovni mRNA i proteinu u potkanů. Metody: Potkani kmene Wistar (n = 6, v každé skupině; 280 - 320g) byli rozděleni do dvou skupin: kontrolní skupina sham-operovaných potkanů (Sham) a skupina s podvazem žlučovodu trvajícím 28 dní (BDO). Biochemická analýza séra byla provedena pomocí Cobas Integra ® 800. Změny v expresi mRNA a proteinů byly hodnoceny qRT-PCR a Western blot analýzou. Výsledky: Hladina žlučových kyselin byla zvýšená u BDO skupiny zvířat na 454 %, hladina celkového bilirubinu na 4111 % a hladina konjugovaného bilirubinu na 7313 % v porovnání s kontrolní skupinou. Aktivita ALP byla zvýšena na 238 %, aktivita GMT na 2826 %, aktivita ALT na 1200 % a aktivita AST na 1387 % oproti kontrolní skupině. U BDO skupiny zvířat bylo pozorováno snížení hladiny mRNA u Ntcp transportéru na 51 % a Oatp1a4 proteinu na 38 %. Změny hladiny Oatp1a1, Oatp1b2 a Oat2 mRNA...
|
|
|
Změna exprese transportních proteinů během obstrukční cholestázy u potkanů II
Skořepová, Zuzana ; Doleželová, Eva (vedoucí práce) ; Němečková, Ivana (oponent)
4 Abstrakt Zuzana Skořepová Změna exprese transportních proteinů během obstrukční cholestázy u potkanů II Diplomová práce Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Farmacie Cíle práce: Cílem diplomové práce bylo ověření cholestatického poškození jater navozené podvazem žlučovodu po dobu trvání 28 dnů u potkanů analýzou exprese efluxních transportních proteinů v játrech (Bsep, Bcrp, Mrp2, Mdr1, Mdr2, Mrp3, Mrp4) na úrovni mRNA a proteinu. Metody: Potkani kmene Wistar (n = 6, v každé skupině; 280 - 320 g) byli rozděleni do dvou skupin: kontrolní skupina sham-operovaných potkanů (Sham) a BDO skupina (obstrukce žlučovodu v trvání 28 dnů). Byla provedena analýza exprese efluxních transportních proteinů na úrovni mRNA a proteinu metodou qRT-PCR a Western blot. Výsledky: Ve skupině BDO bylo pozorováno významné zvýšení mRNA exprese u Mdr2 proteinu na 303 %, Mdr1b na 340 % a Mrp3 na 9900 % v porovnání s kontrolní skupinou. Exprese Mrp2 mRNA byla snížena na 42 %. Významné zvýšení exprese proteinu ve skupině BDO bylo prokázáno u Bcrp na 160 %, Mdr1 na 1010 %, Mrp3 na 940 % a Mrp4 na 140 % v porovnání se Sham skupinou. Exprese proteinu byla významně snížena u Mrp2 na 31 %, Bsep na 59 % a Mdr2 na 82 % v porovnání s kontrolní skupinou. Závěr: Z výsledků diplomové práce vyplývá, že při obstrukční...
|
|
| |
host ::
RSS.