|
|
Vývoj HPLC-MS/MS metody pro stanovení L-dopa v lidském krevním séru
Neumannová, Johana ; Kozlík, Petr (vedoucí práce) ; Křížek, Tomáš (oponent)
Tato diplomová práce se zabývá vývojem metody vysokoúčinné kapalinové chromatografie ve spojení s hmotnostní tandemovou detekcí (HPLC-MS/MS) pro stanovení L-dopy v lidském krevním séru. Levodopa je prekurzor dopaminu a používá se obecně pro léčbu Parkinsonského syndromu. V rámci diplomové práce byla provedena optimalizace tandemové hmotnostní detekce a optimalizace vysokoúčinné kapalinové chromatografie. Nalezené optimální parametry jsou následující: chromatografická kolona HALO 90 Å Penta-HILIC (150 x 2,1 mm; 2,7 µm), Advanced Materials Technology (USA). Použitá mobilní fáze byla směs složená z 0,1% kyseliny mravenčí (složka A) a z acetonitrilu (složka B) za gradientové eluce. Celková doba analýzy byla 12,50 minut, průtok MF byl 0,4 ml min-1, nastřikován byl vzorek o objemu 5 µl, teplota na dávkovači byla 15 řC a teplota kolony byla 30 řC. V diplomové práci byly sledovány následující MRM přechody v pozitivním módu: 1. levodopa: m/z 198,1 → m/z 152,1 (Q1: -10 V, CE: -16 V, Q3: -28 V) 2. deuterovaná levodopa (IS): m/z 201,1 → m/z 155,2 (Q1: -10 V, CE: -14 V, Q3: -28 V) Iontový zdroj byl nastaven následovně: průtok nebulizačního plynu 3 l min˗1, průtok sušícího plynu 10 l min˗1, teplota vnitřního prostoru 300 řC, napětí na kapiláře 3 000 V, teplota desolvatační kapiláry 250 řC. V závěru práce byla...
|
|
|
Analýza a charakterizace liposomů pomocí kapilární elektroforézy
Orgoníková, Andrea ; Křížek, Tomáš (vedoucí práce) ; Coufal, Pavel (oponent)
3 Abstrakt Tato diplomová práce se zabývá analýzou tří různých typů liposomů pomocí kapilární elektroforézy s UV-VIS a laserem indukovanou fluorescenční detekcí a využitím liposomů jako pseudostacionární fáze pro separace analytů metodou liposomální elektrokinetické chromatografie. V rámci experimentů s liposomy DSPC-DSPG-PEG2000-DMPE s enkapsulovaným 5-fluoruracilem byl v elektroferogramech úspěšně identifikován pík liposomů s enkapsulovaným 5-fluoruracilem a pík volného 5-fluoruracilu. Oba píky vykazovaly shodné absorpční spektrum v UV oblasti, čímž byla potvrzena jejich identita. Bylo tedy ověřeno, že kapilární elektroforéza s UV-VIS detekcí je použitelná pro separaci a detekci volného a enkapsulovaného léčiva, což je nezbytné pro stanovení účinnosti enkapsulace. Sledováním změny efektivní mobility analytů po přídavku liposomů do základního elektrolytu byla hodnocena použitelnost zkoumaných liposomů v liposomální elektrokinetické chromatografii. Změna mobility byla pozorována u záporně nabitého 5-fluoruracilu a kladně nabitého tryptaminu a p-toluidinu. Absolutní hodnota efektivní mobility záporně nabitého 5-fluoruracilu se snížila vlivem interakcí s liposomy o 18,2 % a efektivní mobilita kladně nabitých analytů tryptaminu a p-toluidinu o 9,2 a 16 %. Prázdné liposomy DSPC-DSPG-PEG2000-DMPE-NBDPC s...
|
|
|
Elektroforetické stanovení oxidované a redukované formy glutathionu v rostlinném materiálu
Durychová, Eva ; Křížek, Tomáš (vedoucí práce) ; Kubíčková, Anna (oponent)
Tato práce vychází z dříve publikované metody pro stanovení dvaceti proteinogenních aminokyselin pomocí kapilární elektroforézy s bezkontaktní vodivostní detekcí a zabývá se možností jejího využití ke stanovení oxidované (GSSG) a redukované (GSH) formy glutathionu s aminokyselinami. Teoretická část se nejdříve věnuje stručnému představení vlastností a významu glutathionu a jeho stabilizací vůči autooxidaci, konkrétně alkylací pomocí N-ethylmaleimidu (NEM) vázajícím se na GSH za vzniku alkylované formy (GSH-NEM). Dále se věnuje stručnému souhrnu dostupných metod k stanovení glutathionu, s detailnějším zaměřením na již vyvinuté metody kapilární zónové elektroforézy. Na závěr ve zkratce představuje elektroforetickou metodu pro stanovení dvaceti proteinogenních aminokyselin, ze které tato práce vychází. V praktické části se nachází postup, s jakým bylo zaváděno stanovení obou forem glutathionu do metody pro stanovení proteinogenních aminokyselin. Nejprve byla testována zjednodušená, časově méně náročná metoda v kratší 50,0 cm kapiláře bez hydroxyethylcelulózy, kde byly obě formy glutathionu separovány na základní linii během 10 minut. U této metody byly zjištěny relativní směrodatné odchylky ploch píků (GSH 2,1 %; 1,2 GSSG %; GSH-NEM 2,2%) a jejich migračních časů (GSH 0,56 %; GSSG 0,59 %; GSH-NEM 1,31...
|
|
|
Degradační studie elektrochemické a chemické oxidace kyseliny salicylové a kyseliny acetylsalicylové
Tonnerová, Barbora ; Kubíčková, Anna (vedoucí práce) ; Křížek, Tomáš (oponent)
Tato práce byla provedena za účelem studia degradace kyseliny salicylové pomocí elektrochemické oxidace. Tato oxidace byla porovnávána s oxidací kyseliny acetylsalicylové. Vyzkoušeny byly dvě elektrochemické cely - průtoková a vsádková. Množství vzniklých degradačních produktů, kyseliny salicylové a kyseliny acetylsalicylové bylo vyhodnocováno nově vyvinutou a validovanou metodou ultravysokoúčinné kapalinové chromatografie. Optimální separace bylo dosaženo na koloně Kinetex C18 (2,1 x 100 mm; 1,7 µm) s dvousložkovou mobilní fází - acetonitril a voda s 0,1% kyselinou mravenčí. Složky mobilní fáze byly v průběhu analýzy směšovány podle gradientového programu od 10 do 60 % (v/v) acetonitrilu. Průtok mobilní fáze byl 0,3 ml min-1 , dávkovaný objem byl 2 µl, detekce byla provedena PDA detektorem při 240 nm. Celková doba analýzy byla 11 minut. V elektrochemickém uspořádání byla jako anoda použita borem-dopovaná diamantová elektroda a jako katoda nerezová elektroda. Kyselina salicylová a a kyselina acetylsalicylová byly rozpouštěny v octanu amonném o koncentraci 200 mmol dm-3 a pH=4,0. Ve vsádkovém uspořádání bylo 20% oxidace dosaženo po 10 minutách při napětí 4,0 V. V průtokovém uspořádání bylo požadované 20% oxidace dosaženo při průtokové rychlosti 0,5 ml h-1 , době průtoku 18 minut, tloušťce těsnění...
|
|
|
Separace a stanovení možných produktů enzymového štěpení 4-nitrofenyl-N,N'-diacetyl-β-D-chitobiosidu pomocí kapilární elektroforézy
Velvarská, Romana ; Křížek, Tomáš (vedoucí práce) ; Kalíková, Květa (oponent)
Tato práce se zabývá vývojem a optimalizací podmínek metody, kterou lze využít k porovnání aktivity enzymu β-N-acetylhexosaminidasy při hydrolýze jejího přirozeného substrátu a tvz. chromogenního substrátu, který se často využívá při studiu enzymové kinetiky. Jako substrát pro štěpení byl zvolen 4-nitrofenyl-N,N'-diacetyl-β- D-chitobiosid. Tento oligosacharid obsahuje vazbu, kterou enzym štěpí v přirozeném substrátu, a zároveň také vazbu, která se vyskytuje v substrátu chromogenním. Pro stanovení produktů, jež vznikají při enzymatické hydrolýze 4-nitrofenyl-N,N'-diacetyl- β-D-chitobiosidu byla využita kapilární zónová elektroforéza. Nejprve bylo nutno najít optimální složení základního elektrolytu, tedy jeho hodnotu pH a koncentraci. Optimálním základním elektrolytem byl roztok tetraboritanu sodného o koncentraci 25 mmol/l a hodnotě pH 10,25. Následně byla zjištěna opakovatelnost měření, kalibrační závislosti a linearita, limit detekce a limit kvantifikace. Opakovatelnost migračních časů se pohybovala do 0,6%, opakovatelnost plochy píků pak v rozmezí 2,5 až 6,3%. Limity detekce metody byly v rozmezí 0,005-0,120 mmol/l. Nakonec byla optimalizovaná metoda úspěšně použita ke sledování průběhu skutečného enzymového štěpení.
|
|
|
České atomové právo
Křížek, Tomáš ; Drobník, Jaroslav (vedoucí práce) ; Damohorský, Milan (oponent)
6. Závěr Problematika využití jaderné energie a ionizujícího záření prošla od svého vzniku výrazným vývojem. Původně značně roztříštěná a neúplná úprava této oblasti neposkytovala dostatečnou záruku ochrany životního prostředí. Za poslední roky prošla právní úprava využití jaderné energie a ionizujícího záření složitým vývojem, který ji kvalitativně přiblížil na úroveň právních úprav vyspělých států, což bylo výsledkem dlouholeté účasti na mezinárodní spolupráci v oblasti využívání jaderné energie a ionizujícího záření. Je třeba si uvědomit, že je jaderná energie mnohostranně využitelná, jak v energetice a zdravotnictví, tak se zároveň naskýtá možnost jejího zneužití pro vojenské účely. Toto zneužití by mohlo znamenat fatální důsledky nejen pro životní prostředí, ale i pro lidstvo samo. Z těchto důvodů je potřebné danou oblast právně regulovat nejen na národní, ale i mezinárodní úrovni. Atomový zákon samozřejmě nemůže vyloučit všechna rizika, která jsou spojena s využíváním jaderné energie a ionizujícího záření. Využívání jaderné energie a ionizujícího záření je vždy potenciálně nebezpečné, a proto se v atomovém zákoně neuplatní zásada předběžné opatrnosti, ale speciální zásada odůvodněného přínosu, v jejímž rámci je posuzováno, zda přínos činnosti pro lidskou společnost vyváží možná rizika této činnosti na...
|
|
| |
|
|
Klubová scéna amerického fotbalu v ČR
Dundáček, Jan ; Janák, Vladimír (vedoucí práce) ; Křížek, Tomáš (oponent)
Název práce: Klubová scéna amerického fotbalu v České republice Práce zkoumá a popisuje vznik jednotlivých klubů amerického fotbalu v České republice. Rozděluje celé období do několika etap a snaží se najít společné jmenovatele jednotlivých událostí. Cílem je zmapování prostředí amerického fotbalu v České republice od vzniku prvního klubu až do současnosti s důrazem na skutečnosti okolo zakládání konkrétních klubů, okolnosti, které zakládání provázely, a problémy, se kterými se zakladatelé museli potýkat. Zaznamenání jednotlivých historických událostí je důležité pro budoucí generace, následné bádání a jakoukoliv statistiku. Žádný obdobný přehled dosud nebyl vytvořen. Klíčová slova: americký fotbal, vznik, kluby, historie, Česká republika
|
|
|
Determination of proteinogenic amino acids by high-performance separation techniques
Hodek, Ondřej ; Křížek, Tomáš (vedoucí práce) ; Pacáková, Věra (oponent) ; Tůma, Petr (oponent)
(CZ) Proteinogenní aminokyseliny patří mezi základní stavební jednotky živých organismů. Proto byl v poslední době výzkum v metabolomice zaměřen na vývoj rychlých a citlivých analytických metod pro stanovení aminokyselin. Tato práce obsahuje dvě studie popisující vývoj vysoce účinných separačních metod pro kvantifikaci aminokyselin. V první studii byla vyvinuta metoda kapilární elektroforézy pro stanovení aminokyselin v rostlinách tabáku. Nedílnou součástí této studie byla optimalizace extrakce aminokyselin z rostlinného materiálu. Extrakce byla optimalizována postupem "design of experiments" (DoE), pomocí kterého byly vyhodnoceny faktory ovlivňující výtěžek extrakce aminokyselin. Nejdůležitějšími faktory byly objem a koncentrace extrakčního činidla (kyselina chlorovodíková), jejichž optimální hodnoty byly určeny pomocí "response surface methodology" (RSM). Poté byly aminokyseliny separovány pomocí kapilární elektroforézy s bezkontaktní vodivostní detekcí a stanoveny za použití kalibrace s vnitřním standardem, což přispělo ke zlepšení přesnosti metody. Druhá studie byla zaměřena na vývoj metody pro stanovení aminokyselin v lidské plasmě pomocí superkritické fluidní chromatografie. Jedním z cílů této studie bylo zvýšit rozpustnost aminokyselin v mobilní fázi bohaté na CO2. Nejdříve byla zvýšena...
|
|
| |
host ::
RSS.